五節芒對阿霉素致小鼠腎損傷的保護作用

池志珍 黃鎔章 王煒辰 鄭時楨 郭曉芳 吳學輝

【摘 要】 目的：探討五節芒對阿霉素致小鼠腎損傷的保護作用。方法：建立阿霉素誘導小鼠的腎病模型，連續灌服五節芒水煎液4周后，檢測小鼠血清中的尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）含量;計算腎臟指數;ELISA 法檢測腎組織中炎癥因子白介素-8（IL-8）的含量。結果：五節芒治療后小鼠血清中的BUN和Cr的含量、腎臟指數及腎組織中炎癥因子IL-8含量均較模型組小鼠明顯減少（P<0.05）。結論：五節芒對阿霉素所致小鼠腎損傷具有一定的保護作用。

【關鍵詞】 五節芒;阿霉素;腎損傷

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2021）13-0029-04

Abstract：Objective To investigate the protective effects of Miscanthus floridulus on adriamycin-induced kidney injury in mice. Methods Adriamycin-induced kidney injury model mice were established by a single intravenous injection of Adriamycin. They were given corresponding medicine or saline for 4 weeks. The effects of Miscanthus floridulus on kidney index，urea nitrogen （BUN） and creatinine （Cr） in the serum of mice were observed. ELISA was used to measure the expressions of IL-8 in renal tissue.Results After Miscanthus floridulus treatment，kidney index，the content of BUN and Cr，the expression of IL-8 were decreased markedly compared with model group （P<0.05）. Conclusion Miscanthus floridulus might protect mice kidney from injury induced by ADR.

Keywords：Miscanthus floridulus; Adriamycin; Kidney Injury

急性腎損傷是臨床最常見的急危重癥之一，其發病率約為30%，并且與患者的預后不良有關，全球每年約有400萬例死于急性腎損傷，且發病率和死亡率不斷攀升，造成嚴重的健康和經濟問題[1]。目前，臨床上對于急性腎損傷提倡早發現、早治療，國內外對其干預研究還處于探索階段，還沒有治療效果良好的藥物[2]。急性腎損傷所涉及的發病機制包括炎癥、氧化應激和凋亡等，其中炎癥反應被認為是細胞病理損傷的關鍵致病因素，其導致的病理損傷貫穿于多種腎臟病發生、發展的過程中。

五節芒為禾本科多年生草本植物五節芒Miscanthus floridulus （Lab.） Warb. ex Schum. et Laut.的莖，其性平，味甘、淡，具有清熱通淋、祛風除濕的功效[3]。臨床上常用于治療熱淋、白濁、白帶、急性腎孟腎炎、泌尿道結石等[4]。五節芒主要含有木脂素類、甾醇類、苷類等成分[5]，近年來有研究發現，五節芒的苷類成分可明顯抑制脂多糖LPS引起的NF-κB激活，具有一定的抗炎活性[4]，但目前有關它的藥理作用研究未見系統的研究和報導。本研究采用阿霉素致BLAB/C小鼠腎損傷，建立急性腎損傷小鼠模型，研究五節芒水煎液對小鼠腎組織的保護作用，為臨床應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 BLAB/C 小鼠，清潔級，雄性，18～21 g，50只，上海斯萊克實驗動物有限責任公司，合格證號 SCXK（滬）：2017-0005。

1.2 試驗藥品 五節芒莖，采自閩侯縣鴻尾鄉里頭村，由池志珍等鑒定為禾本科芒屬植物五節芒Miscanthus floridulus （Lab.） Warb.ex Schum.et Laut.。鹽酸貝那普利片，北京諾華制藥有限公司，批號：X2893;阿霉素，瀚暉制藥有限公司，批號：19019833。

1.3 五節芒水煎液的制備 取干燥的五節芒100 g切成小段，置于容器內，加12倍量的水浸泡30 min，加熱至沸騰（需時時攪拌）后保持60 min，濾出藥液，再加12倍量水加熱至沸騰（需時時攪拌）后保持30 min，濾出藥液，合并兩次的藥液，蒸發濃縮成0.5 g·mL-1生藥量的水煎劑。

1.4 實驗方法

1.4.1 小鼠腎損傷模型的建立、分組與給藥 雄性BLAB/C小鼠50只，按體重隨機分為5組，即：正常對照組、模型組、五節芒低、高劑量組、陽性對照組，每組10只。除正常對照組外，其它4組小鼠均尾靜脈一次性注射11 mg·kg-1體重的阿霉素溶液[5]。從造模第2天開始各組分別按劑量灌胃給藥，五節芒高劑量組給予10.0 g·kg-1五節芒水煎劑，五節芒低劑量組給予5.0 g·kg-1五節芒水煎劑，陽性對照組給予2 mg·kg-1貝那普利混懸液，給藥體積按20 mL· Kg-1體重灌胃，正常對照組與模型組給予等體積的蒸餾水，每天1次，連續灌胃給藥4周。

1.4.2 小鼠血清中尿素氮和肌酐的含量測定 末次給藥24 h后，摘眼球取血，離心（3000 rpm，10 min），取血清，采用全自動生化分析儀分別檢測血清中尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）的含量。

1.4.3 小鼠腎臟指數 采血后，處死小鼠，打開小鼠腹腔，摘取右側腎臟稱量，并計算腎臟指數。計算公式如下：小鼠腎臟指數=小鼠腎臟的質量/小鼠體質量× 100% 。

1.4.4 小鼠腎組織中炎癥因子IL-8的含量測定 取右側腎臟，稱重，加PBS液，用電動勻漿器勻漿，離心取上清液，按照ELISA試劑盒說明書操作，用酶標儀在450 nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算腎組織勻漿上清液中小鼠IL-8含量。

1.4.5 腎組織病理學觀察 采血后，處死小鼠，打開小鼠腹腔，摘取左腎，福爾馬林固定左腎組織，經石蠟包埋、切片、HE染色后，光鏡下觀察腎組織病理變化。

1.4.6 統計學方法 采用 SPSS14.0軟件進行數據分析，實驗數據以均數加減標準差（x±s）表示，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 五節芒水煎液對腎損傷小鼠體重的影響 用阿霉素造模后，模型組小鼠體重與正常對照組比較，明顯減輕（P<0.05），給藥組在給藥1周后，給藥組體重較模型組明顯增加（P<0.05），隨著時間延長，給藥組與模型組的體重差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2 五節芒水煎液對腎損傷小鼠血清中BUN和Cr含量的檢測 與正常對照組相比，模型組小鼠血清中BUN和Cr的含量明顯升高（P<0.01）;與模型組相比，五節芒低、高劑量組及陽性對照組小鼠血清中的 BUN和 Cr的含量均明顯降低（P<0.05或0.01）。見表2。

2.3 五節芒水煎液對小鼠腎臟指數的影響 與正常對照組相比，模型組小鼠腎臟指數明顯增大（P<0.01）;與模型組相比，五節芒低、高劑量組及陽性對照組小鼠腎臟指數均明顯降低（P<0.05）。見表3。

2.4 五節芒水煎液對腎組織中炎癥因子IL-8含量的影響 與正常對照組比，模型組腎組織中 IL-8的含量明顯增加（P<0.01）;與模型組相比，五節芒低、高劑量組及陽性對照組小鼠腎組織中的炎癥因子IL-8含量均明顯減少（P<0.05或0.01）。見表4。

2.5 腎組織病理學觀察 高倍鏡下觀察發現，正常對照組小鼠腎組織形態學正常，造模組小鼠腎小體毛細血管球體積增大，腎小球內細胞數量上升，包含大量紅細胞，腎小囊層結構被破壞，毛細血管球被擠壓并伴炎癥細胞浸潤，腎小管管腔可見炎癥細胞浸（如圖紅色箭頭）潤。五節芒低、高劑量組及陽性對照組小鼠腎組織上述損傷程度均較模型組小。如圖1所示。

3 討論

阿霉素是一種抗腫瘤的抗生素，它對RNA和DNA的合成具有抑制作用，其誘導的急性腎損傷是一個成熟的和高重復性的腎病模型[6-7]。本實驗采用一次性尾靜脈注射阿霉素11 mg·kg-1致BLAB/C小鼠腎損傷模型，腎組織病理學觀察結果顯示造模組小鼠腎小體毛細血管球體積增大，腎小球內細胞數量上升，包含大量紅細胞，腎小囊層結構被破壞，毛細血管球被擠壓并伴炎癥細胞浸潤，腎小管管腔可見炎癥細胞浸潤，符合急性腎損傷表現，與文獻[6]研究相一致。

本研究利用阿霉素誘導小鼠腎損傷模型探討五節芒水煎液對小鼠腎損傷的保護作用，研究結果顯示，與正常對照組相比，模型組小鼠腎臟指數及血清BUN、Cr 水平升高，同時模型組腎病粒結構嚴重損傷，腎小管上皮細胞空泡及顆粒變性，腎小囊層結構被破壞，毛細血管球被擠壓并伴炎癥細胞浸潤，腎小管管腔可見炎癥細胞浸，符合急性腎損傷炎癥反應等表現[6]。與模型組相比，五節芒水煎液低、高劑量組血清中BUN、Cr水平明顯下降，腎組織病理損傷變化部分得到恢復，這些結果提示五節芒水煎液能夠改善腎功能和腎組織的損傷。同時結果發現與模型組相比，五節芒水煎液低、高劑量組腎組織中的炎癥因子IL-8含量明顯減少，提示五節芒水煎液可改善炎癥反應，這與文獻[5]中報道的一致。綜上所述，五節芒水煎液對阿霉素誘導的小鼠腎損傷具有保護作用，為其在治療急性腎損傷方面提供了理論依據，但其作用機制仍需進一步研究。

參考文獻

[1]SRISAWAT N，SILEANU F E，MURUGAN R，et al.Variation in risk and mortality of acute kidney injury in critically ill patients： a multicenter study [J]. Am J Nephrol，2015（41）：81-88.

[2]SUTHERLAND S M，KWIATKOWSKI D M. Acute kidney injury in children [J]. Adv Chronic Kidney Dis，2017，24（6）： 380-387.

[3]泉州市泉港區中醫藥學會.泉港本草（第五輯）[M].福州：海峽出版發行集團/福建科學技術出版社，2017.

[4]福建省中醫藥研究所編.福建藥物志（第二冊）[M].福州：福建科學技術出版社，1982：412-413.

[5]熊禮燕.五節芒化學成分及其生物活性的研究[D].上海：第二軍醫大學，2011：40.

[6]舒適，張瑞義，徐中菊，等. 真武湯對阿霉素所致小鼠腎損傷保護作用的實驗研究 [J].中國中醫藥科技，2016，23（5）：526-529.

[7]張悅，魏民，王謙，等.阿霉素復制大鼠微小病變腎病模型的研究[J].北京中醫藥大學學報，2002，25（2）：16-18.

（收稿日期：2020-12-02 編輯：劉斌）