透皮活血中藥墊枕枕芯對下肢深靜脈血栓形成犬模型的安全性和有效性

雍熙，康藤耀，陳開，王賢芝，張富釗，寧俊潔，任逢春，楊勤，尹洪順，陳鏡全，鄭江華

(1.川北醫學院附屬醫院血管外科，四川 南充 637000；2.廣元市第一人民醫院心胸血管外科，四川 廣元 628000；3.北川羌族自治縣人民醫院，四川 綿陽 622650；4.成都中醫藥大學附屬醫院放射科，四川 成都 610000；5.川北醫學院附屬醫院感染科；6.川北醫學院臨床醫學系，四川 南充 637000)

下肢深靜脈血栓形成(thrombosis of deep vein of lower extremities，DVT)已經成為最常見的心血管疾病之一，發病率僅次于缺血性心臟病和卒中。因為回流靜脈的血栓形成，引起下肢靜脈回流障礙、靜脈高壓、瓣膜破壞及血液倒流，可導致患肢腫脹疼痛，嚴重者甚至會誘發股青腫、股白腫，乃至肢體缺血壞死[1]。其中，下肢嚴重的腫脹疼痛使患肢的生理功能部分喪失，嚴重影響病人的工作及生活質量。然而，深靜脈血栓形成經正規抗凝、溶栓治療后，在3個月內的復發率仍高達14.5%[2]。現為降低DVT的遠期復發率、促進患肢癥狀的快速緩解，結合活血類中醫藥的特點，制備下肢深靜脈血栓形成透皮活血中藥墊枕，并初步評價該中藥枕芯對犬下肢深靜脈血栓模型的安全性和有效性，為其臨床應用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗用中藥透皮制劑

活血中藥透皮制劑由桃紅四物湯加減(活性成分主要為：紅花、川芎、乳香、沒藥、元胡等)由成都中醫藥大學附屬醫院提供，具有補血活血化瘀行氣的功效，是可治療氣滯血淤肝氣不舒、血栓性疾病的經典方劑，臨床應用較廣泛。

1.2 試驗動物

8月齡比格犬 16只，雄性，體重約11.3～13.9 kg，動物來源：川北醫學院實驗動物中心(SYXK(川)2018-076)，采用抽簽法將實驗犬隨機分為實驗組和對照組，每組各8只。

1.3 試驗方法

構建試驗犬的下肢深靜脈血栓形成模型：參考相關文獻[3-4]進行造模。任意選擇一側髂股靜脈。超聲引導下經頸外靜脈及股靜脈途徑分別將直徑10 mm與6 mm的球囊導管置于髂總靜脈近心端及股靜脈遠心端，充盈球囊阻斷血流，并經導管注入凝血酶100 U。1 h后行超聲檢查，4 h后抽癟兩端球囊退出導管，24 h后行靜脈超聲檢查確認是否造模成功。結果顯示，16只犬均造模成功。隨后，修剪兩組試驗犬只腿上毛發，并分別將活血中藥透皮制劑、透皮制劑(聚硅氧烷類壓敏膠不含活血類中藥成分)貼附于實驗組、對照組試驗犬的大腿及小腿表面。

1.4 檢查內容

(1)分別于治療后1、2、4、12、16周周日8∶00至9∶00行試驗犬的后肢靜脈抽血，比較兩組試驗動物的D-二聚體、凝血功能、血常規、肝功、腎功等；并于治療后1、2、4、12、16周周日9∶00至11∶00完善彩超檢查以了解血栓再通、復發情況。(2)在治療后16周處死試驗犬，取實驗組、對照組血栓處血管及管腔內血栓、心臟、腦組織、肺臟、肝臟和腎臟制作石蠟標本送至川北醫學院附屬醫院病理科行病理學檢查。(3)血栓復發評判標準：以D-二聚體水平再次升高并經B超檢查提示髂股靜脈或其他深靜脈管腔增寬、管腔內可見低回聲充填為血栓復發標準。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 兩組治療前后血常規比較

治療前后實驗組紅細胞(red blood cell，RBC)、白細胞(white blood cell，WBC)、血小板(platelet，PLT)水平等血常規指標與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組治療前后血常規的比較

2.2 兩組治療前后凝血功能指標比較

治療前、治療后1周，實驗組的D-二聚體水平高于對照組，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后2周，實驗組的D-二聚體水平低于對照組，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后 4、12、16周，實驗組的D-二聚體水平低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。治療前及治療后1、2、4、12、16周，實驗組的活化部分凝血活酶時間(activated partial thromboplastin time，APTT)、纖維蛋白原(fibrinogen，FIB)水平與對照組相近，差異無統計學意義(P>0.05)。治療前，實驗組的凝血酶原時間(prothrombin time，PT)稍低于對照組，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后1、2、4、12、16周，實驗組的PT稍高于對照組，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組治療前后凝血功能的比較

2.3 兩組治療前后肝腎功能比較

治療前及治療后1、2、4、12、16周，實驗組肌酐(creatinine，Cr)、谷氨酸-丙酮酸轉氨酶(alanine aminotransferase，ALT)表達水平與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 兩組治療前后肝腎功能的比較

2.4 兩組血栓復發率比較

治療前及治療后1、2、4、12、16周，實驗組無血栓復發，對照組2例復發，組間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.5 兩組動物心、肺、腎、肝和腦組織標本病理活檢

治療前后實驗組與對照組實驗心、肺、腎、肝和腦組織標本病理活檢均未見明顯異常。見圖1。

2.6 實驗前后兩組動物的血栓處、血管及管腔內容物組織標本的血栓彩色多普勒血流顯像(CDFI)和蘇木精-伊紅染色(HE染色)

部分實驗組動物治療后血管得以再通。見圖2及圖3。

3 討論

DVT的治療方式以抗凝治療為基礎，輔以溶栓、活血消腫等對癥支持治療。目前，靜脈血栓栓塞癥的研究大都聚焦于發病機制[5]、 臨床篩查[6-7]、抗凝治療藥物的研發[8-9]，現存手術治療包括經皮機械吸栓、導管接觸性溶栓等[10]，而對于該疾病的物理治療研究鮮有報道。但是，DVT的物理抬高治療與患者的康復速度、急性癥狀持續時間密切相關。當缺乏物理治療時，DVT的急性癥狀可長時間持續存在，緩解速率極為緩慢，血栓往往難以完全清除，進而易導致血液回流障礙，引起血栓復發，提高了遠期血栓后遺癥發生的可能性。血栓性疾病的物理及預防復發治療，是現階段國家衛生健康加速康復治療的重要手段，具有投入小、回報大等優勢。劉秋月等[11]研究證實，使用新型可調式抬高器可快速降低患者的血管腫脹程度，減輕疼痛感，增加術后舒適度，并減少并發癥的發生。而藍培桂等[12]指出，桃紅四物湯類活血化瘀類中藥可促進血栓的吸收，縮短DVT的病程。活血類中草藥桃紅四物湯作為枕芯，可利用藥物的透皮作用，緩慢持續作用于殘存血栓的患肢，降低患者血栓的復發率、改善預后[13-15]，減少遠期后遺癥。

本研究證實，治療前后實驗組的血常規、肝腎功能與對照組比較， 差異均未見統計學意義(P>0.05)，表明中藥枕芯未影響機體的血細胞功能、肝腎功能、電解質平衡，安全性較高。

D-二聚體是臨床上常用的血栓形成相關檢測指標，廣泛用于VTE和DIC風險評估、惡性腫瘤、心腦血管疾病等方面，具有敏感性強、檢測成本低等優勢[16]。本研究發現，可能是由于透皮制劑釋放、吸收均緩慢，治療后1、2周實驗組的D-二聚體、APTT、FIB、PT水平與對照組相比，差異均未見統計學意義，而治療后4、12、16周實驗組的D-二聚體水平低于對照組(P>0.05)，證實了該藥方的起效時間剛好位于血栓復發率增高的時期(治療后3～4個月)，通過藥物的緩慢吸收可治療血栓或預防血栓復發；而治療后4、12、16周，兩組血指標差異無統計學意義(P>0.05)，驗證了活血類中藥透皮制劑藥性緩慢而又穩定釋放的特點。另外，治療后實驗組的血栓再通率高于對照組。實驗組的血栓復發率低于對照組，差異無統計學意義(P>0.05)，這可能是由于樣本量小且試驗時間短，對于降低血栓遠期復發率的確切性還需進一步研究驗證。綜上所述，透皮活血中藥墊枕枕芯用于下肢深靜脈血栓形成動物犬模型后，對血液常規、生化和重要臟器結構功能無明顯影響，安全性較高，但可輕度降低血D-二聚體水平，降低血栓的遠期復發率，具有一定的臨床應用價值。但礙于中草藥成分復雜、試驗樣本量小且動物試驗時間較短、試驗指標較單一，本研究尚未驗證活血類中草藥桃紅四物湯與華法林等傳統抗凝藥聯合用藥的安全性、有效性，及其長期使用對凝血功能的影響，后續仍需開展較大樣本量的研究以進一步驗證相關結論。