蒲公英黃酮及其Cu絡合物抗亞硝化反應的比較

薛長暉，袁少明

1. 青島農業大學化學與藥學院（青島 266109）；2. 青島昊鑫新能源科技有限公司（青島 266732）

蒲公英[1]屬于菊科草本植物，葉子主要是披針形，長度5～21 cm不等，寬度1～5 cm不等，據《中華人民共和國藥典》記載，蒲公英可用于醫治多種炎癥，有助于治療感冒引起的發熱，還有一些感染和腫痛的療用，如尿路感染、療毒瘡腫等；中草藥手冊記載，蒲公英對清熱、解讀、催生乳汁有好的作用，可醫治疔瘡，利尿，緩瀉。《本草綱目拾遺》中補充了蒲公英的一些藥理作用，如抗腫瘤作用、通乳、抗菌作用、利膽作用等。《本草綱目》記載，蒲公英含多種多類化學成分，如蒲公英賽醇、豆甾醇、金菊賽醇，葡萄糖甙，葡萄糖等，還有樹脂、橡膠等，蒲公英還含有黃酮類物質[2,4]，對蒲公英黃酮的研究較少，亞硝酸鹽廣泛存在于食物中，很容易變成致癌物亞硝胺，清除亞硝酸鹽可以起到防癌作用[5]，通過比較黃酮和黃酮Cu絡合物對亞硝酸鹽的清除作用，找到更好的應用于亞硝酸鹽清除的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

蒲公英（市售，干燥后磨粉過篩儲存備用）；蘆丁（國藥集團化學試劑有限公司）；亞硝酸鈉（AR，南京奧多福尼生物科技有限公司）；檸檬酸、磷酸氫二鈉（泰州恒利化工）；氫氧化鈉（AR，中國上海化學試劑有限公司）；鹽酸萘乙二胺（AR）；對氨基苯磺酸（天津市博迪化工有限公司）；鹽酸萘乙二胺（天津市巴斯夫化工有限公司）；硫酸銅、鹽酸、硝酸鋁（天津市巴斯夫化工有限公司）；95%乙醇（AR，萊陽化學試劑廠）；蒸餾水。

紫外分光光度計（島津儀器（蘇州）有限公司）；集熱式磁力攪拌器（銀壇市康威威實驗儀器廠）；恒溫加熱的磁力攪拌器；V-5000分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；電子分析天平（奧豪斯國際貿易（上海）有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 含量測定方法

采用標準曲線法[6-8]測定黃酮含量，將得到的黃酮提取溶液與提前配制好的、質量分數70%乙醇溶液混合，稀釋成1 mg/mL的樣品備用。使用紫外分光光度法，掃標本樣品。確定該樣品中黃酮含量。

1.2.2 抗亞硝化反應測定

通過確定最大吸收波長，選擇顯色反應，用分光光度法進行測定[9-10]，在最大吸收波長下測定吸光度，根據清除率公式計算出清除率。清除率按式（1）計算。

1.2.3 蒲公英黃酮Cu絡合物的制備[11-12]

取2 mL已知濃度的蒲公英黃酮提取液于25 mL容量瓶，按照1∶1比例加入硫酸銅溶液。

2 結果與討論

2.1 蘆丁標準曲線的制作

由圖1可知，標準曲線為A=11.576C+0.0093，相關系數R2=0.9966。用上述方法測得蒲公英提取液的吸光度為0.386，竹葉黃酮質量濃度為1.000 mg/mL，黃酮類活性物質質量濃度為0.814 mg/mL。

圖1 蘆丁標準曲線

2.2 反應條件對蒲公英黃酮類物質及其Cu絡合物抗亞硝化反應效果的影響[13-15]

2.2.1 反應濃度的影響

從圖2可知，質量濃度為0.814 mg/mL時，清除率達到最大值，此時的清除效果最好。

圖2 反應濃度對清除率的影響

2.2.2 反應pH的影響

從圖3可知，pH 3時清除率達到最大值；人體的體液和血液的pH 7左右，pH 7時蒲公英黃酮提取液及其金屬絡合物對亞硝酸鹽也有一定清除作用，綜上所知，最佳反應pH為3，蒲公英黃酮提取液的清除作用對人體內的亞硝酸鹽的清除有積極作用，可以清除致癌物前體。

圖3 反應pH對清除率的影響

2.2.3 反應溫度的影響

從圖4可知，50 ℃時清除率達到最大，聯系實際，人體的正常溫度在37 ℃左右[21]，此時蒲公英中黃酮清除率可達48%，對正常人體內清除亞硝酸鹽具有實際意義。

圖4 反應溫度對清除率的影響

2.2.4 反應時間的影響

從圖5可知，無論是蒲公英黃酮銅絡合物還是蒲公英黃酮，反應時間30 min時，清除率最大。

圖5 反應時間對清除率的影響

3 討論

3.1 蒲公英黃酮提取液對亞硝酸根的清除作用

試驗證明，蒲公英黃酮提取液確實對亞硝酸根具有良好清除作用。結果表明，最佳清除條件為黃酮提取液質量濃度0.814 mg/mL、pH 3、反應溫度50 ℃、反應時間30 min。

通過反應pH的影響和反應溫度的影響，可知在pH 3、溫度37 ℃、黃酮提取液質量濃度0.81 mg/mL條件下，反應30 min，清除率可達62%左右，對人體內亞硝酸根的清除作用具有實際意義，對人類生活具有實際意義。

3.2 蒲公英黃酮提取液的金屬絡合物對亞硝酸根的清除作用

試驗證明，蒲公英黃酮提取液的金屬絡合物對亞硝酸根具有良好清除作用。結果表明，黃酮提取液的金屬絡合物，最佳清除條件為：質量濃度0.814 mg/mL，調節至pH 3，反應溫度50 ℃，反應時間30 min時具有最好的清除效果。整體變化的趨勢和蒲公英黃酮提取液基本上一致。

3.3 蒲公英黃酮類物質及其金屬絡合物的清除作用的比較

蒲公英黃酮提取液本身對亞硝酸根有良好的清除效果。同時，蒲公英黃酮提取液的金屬絡合物，對亞硝酸根的清除也具有良好效果。但是，蒲公英黃酮提取液的金屬絡合物對亞硝酸鹽清除效果要優于單純的含有蒲公英黃酮提取液。因此，蒲公英黃酮在人體內結合Cu離子后，抗癌效果更加理想。

4 結論

由以上試驗可知，蒲公英黃酮提取液和蒲公英黃酮提取液的金屬絡合物對亞硝酸根都具有良好的清除作用，最佳的清除條件為質量濃度0.814 mg/mL、pH 3、反應溫度50 ℃、反應時間30 min。在此條件下，清除率可以達到62%左右，這對人體內亞硝酸根的清除作用具有實際的意義，此外，研究發現蒲公英黃酮Cu絡合物對亞硝酸根清除效果優于蒲公英黃酮，說明蒲公英黃酮若在體內結合Cu離子后，抗癌效果會更加理想。