一例犬瘟熱的診斷、預(yù)防與控制

于占松

（山東省膠州市動物疫病預(yù)防與控制中心 266300）

犬瘟熱最早發(fā)現(xiàn)于17 世紀(jì)，1809 年Jeneer 首次報道了犬瘟熱的存在，自1905 年被發(fā)現(xiàn)，已廣泛分布于世界各個國家，我國報道犬瘟熱的時間比較晚，1980 年在我國首次報道。犬瘟熱傳染性強(qiáng)，臨床癥狀不唯一，發(fā)病后容易造成繼發(fā)感染，對動物健康安全造成極大的威脅。目前已經(jīng)證實犬瘟熱除能感染犬類，對雪貂、狐貍、大熊貓、小熊貓等動物均易感。犬瘟熱是當(dāng)前犬科動物最常見的傳染性疾病，傳播性強(qiáng)，分布范圍廣。犬感染后臨床癥狀主要表現(xiàn)為眼鼻分泌物增多、雙相熱、腹瀉、嘔吐、足墊增厚，有的會出現(xiàn)抽搐神經(jīng)癥狀等，且犬瘟熱經(jīng)常與犬細(xì)小病毒、犬冠狀病毒、滴蟲等疾病共同感染[1]，在臨床治療比較困難。

1 犬瘟熱病原學(xué)

犬瘟熱（Canine distemper,CD）是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus,CDV) 引起的疾病，犬瘟熱病毒屬于副黏膜病毒科，麻疹病毒屬，為單股負(fù)鏈無節(jié)段RNA 病毒[2]。病毒呈球形，直徑為150～330nm，外面包裹一層囊膜，基因組全長為15690bp，編碼6 種結(jié)構(gòu)蛋白，血凝素蛋白(Haemagglutinin,H蛋白)、核衣殼蛋(Nucleoprotein,N 蛋白)、磷蛋白(Phosphoprotein,P 蛋白)、基質(zhì)膜蛋白(Martrix protein,M 蛋白)、融合蛋白(Fusion,F 蛋白)、大蛋白(Large protein,L 蛋白)[3]。其中血凝素蛋白(H) 是犬瘟熱病毒的主要抗原，同時也是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的重要抗原，是最易發(fā)生變異的抗原[4]，犬瘟熱病毒僅有1 個血清型。該病毒對環(huán)境的抵抗力比較差，干燥、高溫、紫外線直射都能將其殺滅，常規(guī)的消毒劑來蘇兒、甲醛及燒堿等也可用于該病毒的消毒，因為該病毒有囊膜，有機(jī)溶劑能破壞其囊膜，從而起到殺滅病毒的效果[5]。通常情況下，犬瘟熱病毒在2～4℃可以存活數(shù)周，室溫能存活數(shù)天，50～60℃下只能存活1h。強(qiáng)酸強(qiáng)堿會導(dǎo)致犬瘟熱病毒快速死亡。在低溫冷凍環(huán)境下，犬瘟熱病毒可以保存的時間比較長，多達(dá)數(shù)年[6]。

犬瘟熱病毒自然宿主較多，包括犬科、浣熊科、貓科、鼬科等多種動物，犬類為主要宿主，對個品種的犬均有易感性，其中純種犬和小型犬更易感，幼年犬發(fā)病率高于成年犬。

2 犬瘟熱流行病學(xué)

犬瘟熱病毒的感染途徑主要是呼吸道和消化道，通過機(jī)體的外分泌物進(jìn)行排泄，然后通過空氣進(jìn)行傳播。犬瘟熱病毒的傳染性比較強(qiáng)，同舍動物如果有一只感染，即使采取隔離措施，其他動物也很容易會被傳染。通常情況下，帶毒犬及病犬是犬瘟熱病毒傳播的主要源頭，而已經(jīng)受到感染的動物或帶毒的其他動物也能作為傳染源[7]，犬瘟熱感染犬康復(fù)后仍會往外排毒。犬瘟熱發(fā)病受年齡、品種和季節(jié)性的影響，一般每2～3年會有一個周期[8]，一般情況下，2～12 個月的幼犬比較容易感染犬瘟熱，未斷奶犬及老齡犬感染的幾率比較低，未斷奶犬很大原因與母源抗體獲得性主動免疫有關(guān)。

通過對不同品種犬感染犬瘟熱情況的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，純種犬比當(dāng)?shù)赝练N犬更容易感染，且寒冷季節(jié)往往多發(fā)。近年來，隨著人們對犬的需求越來越大，犬養(yǎng)殖行業(yè)也在不斷發(fā)展，犬類動物在調(diào)運、引種和倒種等過程中，其種群中的免疫力水平不斷下降，其感染犬瘟熱病毒的規(guī)律不容易被探知[9]。

3 疑似犬瘟熱患病犬的接診

2020 年10 月，一寵物主人帶寵物犬就診，患病犬精神不振、嘔吐、便血、眼睛有黏性分泌物，鼻鏡干燥，取血便用安捷犬瘟熱抗原快速檢測試紙條進(jìn)行檢測，為犬瘟熱陽性，初步懷疑該犬患犬瘟熱。

4 實驗室診斷

4.1 RT-PCR 鑒定

取患病犬眼部分泌物及排泄物，按照RNA/DNA 核酸提取試劑盒步驟進(jìn)行核酸提取，根據(jù)試劑盒說明書操作，將提取的RNA 反轉(zhuǎn)錄成cDNA。以此作為模板用PCR 方法擴(kuò)增目的基因。

擴(kuò)增引物：根據(jù)GenBank 中報道的犬瘟熱病毒H 基因序列，用Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計。

CDV-F：5’ -AACGGTGGCTGAATAACATGCC-3’

CDV-R：5’ -ACCACAAATCGTCATCCCACAC-3’

擴(kuò)增條件：94℃，5min；94℃，30s，57℃，30s，72℃，1min；32 個循環(huán)，72℃再延伸10min。

將PCR 產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，結(jié)果出現(xiàn)大約900bp 的目的條帶（圖1）。將PCR 產(chǎn)物送上海生物工程技術(shù)有限公司進(jìn)行序列測定，將測序結(jié)果與NCBI 上已發(fā)表的序列進(jìn)行比對，結(jié)果與3 株Asia-Ⅰ型犬瘟熱核苷酸同源性為97.4%～97.8%，處于統(tǒng)一分支，與America-1 和Europe 型犬瘟熱同源性分別為93%和94%，確定該病毒確為犬瘟熱病毒，分型屬于Asia-Ⅰ型（圖2，圖3）。

圖1 RT-PCR 檢測結(jié)果

圖2 遺傳進(jìn)化圖譜

圖3 核苷酸同源性比較結(jié)果

4.2 病毒分離

取患病犬眼部分泌物加入適量生理鹽水，5500r/min 離心20min，取上清，加入終濃度為2000IU 的青鏈霉素，處理4h，接種長成單層的Vero 細(xì)胞，37℃培養(yǎng)120h，每日觀察細(xì)胞病變情況，結(jié)果第一代無細(xì)胞病變，將第一代細(xì)胞培養(yǎng)物凍融一次，收獲后按照15%的比例接種長成單層的Vero 細(xì)胞，連續(xù)傳至第3 代，Vero 細(xì)胞出現(xiàn)融合的典型犬瘟熱細(xì)胞病變（圖4-B），正常細(xì)胞無病變（圖4-A）。

圖4 細(xì)胞接種后細(xì)胞病變情況

5 患病犬的治療

根據(jù)病犬的病情進(jìn)行治療，治療原則是抗病毒，防止繼發(fā)感染和對癥處理。肌肉注射犬瘟熱病毒單克隆抗體，1.0ml/kg，每日一次，連用3d，肌肉注射犬干擾素10 萬～20 萬單位/次，2d/次，肌肉注射雙黃連抗病毒，60mg/kg，每日一次，同時靜脈滴注頭孢、VC、VB6，抗菌消炎，增加機(jī)體抵抗力，經(jīng)過3d治療，患病犬癥狀有所好轉(zhuǎn)，精神逐漸恢復(fù)正常，但仍然比較虛弱，后期繼續(xù)用藥，葡萄糖加ATP，靜脈滴注，補(bǔ)充能量，病犬逐漸恢復(fù)，恢復(fù)后建議主人進(jìn)行犬瘟熱疫苗的免疫。

6 犬瘟熱的預(yù)防與控制

犬瘟熱病毒出現(xiàn)在世界各地，對犬類造成極大的危害，在臨床上要減少犬瘟熱發(fā)病率就要做到早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療，注重養(yǎng)防結(jié)合，防重于治，加大疫病免疫宣傳力度，現(xiàn)在大部分應(yīng)用犬瘟熱活疫苗進(jìn)行疾病預(yù)防，市場上主要的犬瘟熱活疫苗為Onderstepoort 株和CDV3 株，市場上還有犬的三聯(lián)苗、五聯(lián)苗、八聯(lián)苗，但還是建議先使用單苗進(jìn)行免疫，因為聯(lián)苗抗原彼此之間很有可能產(chǎn)生免疫干擾，導(dǎo)致免疫失敗，因此，最好不要為了圖省事用多聯(lián)苗進(jìn)行免疫。

除了接種疫苗外，還需要注意衛(wèi)生防控，對犬舍要定期打掃，噴灑消毒藥，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，一旦發(fā)現(xiàn)飼養(yǎng)犬有發(fā)病癥狀，一定要及時隔離病犬與其他犬類，同時使用消毒劑、干燥劑、清潔劑對犬類活動區(qū)域進(jìn)行清潔，保持干凈整潔的衛(wèi)生環(huán)境[10]。在犬飼養(yǎng)過程中給犬飼喂?fàn)I養(yǎng)豐富的狗糧，不要購買劣質(zhì)狗糧，注意觀察犬只精神、飲食、飲水、排糞等情況，一旦發(fā)現(xiàn)異常及時處理就醫(yī)，做到早發(fā)現(xiàn)早治療[11]。