對血型為O型Rh（D）的孕婦進行產前IgG血型抗體效價檢測的意義

唐炳娣

（惠州市第三人民醫院，廣東 惠州 516002）

新生兒ABO溶血病（Hemolytic disease of the newborn，ABO-HDN）是一種同族免疫性溶血性貧血。此病的發生主要是由于母嬰血型不合所致。ABO-HDN是引發新生兒高膽紅素血癥的主要病因。研究發現，孕婦機體受到胎兒紅細胞抗原的刺激，會產生免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）類血型抗體。此抗體可經胎盤屏障進入到胎兒的體內，可對其血液中的紅細胞產生致敏作用，進而可引發免疫性溶血[1-2]。據統計，我國母嬰ABO血型系統不合的發生率較高。在產前對孕婦進行IgG血型抗體效價檢測具有重要的臨床意義[3]。本次研究主要是探討對血型為O型Rh（D）的孕婦進行產前IgG血型抗體效價檢測的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對象是2019年6月至2020年6月期間在惠州市第三人民醫院進行ABO血型鑒定血型為O型Rh（D）的238例單胎妊娠孕婦。本次研究對象的納入標準是：1）身體健康；2）未出現孕期并發癥、合并癥；3）年齡在20～40歲之間；4）自愿參加本次研究，并簽署了《知情同意書》。本次研究對象的排除標準是：1）進行產前不規則抗體檢測的結果呈陽性；2）有輸血史；3）存在自身免疫性溶血性疾病或其他原因引起的溶血性疾病。在這些孕婦中，年齡最小的21歲，年齡最大的37歲，平均年齡為（31.27±3.21）歲；其孕周為21～25周，平均孕周為（22.92±0.31）周。

1.2 方法

1.2.1 檢測試劑及儀器 本次研究使用的檢測試劑是：1）ABO血型反定型用紅細胞試劑盒、ABO血型卡、抗人球蛋白檢測卡（微柱凝膠法）。以上檢測試劑購自長春博訊生物技術有限責任公司。2）抗D〔免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）+IgG〕血型定型試劑，購自長春博德生物技術有限責任公司。3）抗A、抗B血型定型試劑，購自上海血液生物醫藥有限責任公司。4）2-巰基乙醇（2-Me），本試劑購自上海血液生物責任有限公司。5）孵育器、專用離心機，購自長春博研科學儀器有限責任公司。

1.2.2 檢測方法 采集每例孕婦的靜脈血。對采集到的靜脈血樣本進行ABO血型鑒定、IgG血型抗體效價檢測。對這些孕婦的血液樣本進行ABO血型鑒定的方法是：1）采取微柱凝膠法對孕婦的血型進行正反定型。2）采用抗A、抗B、抗D標準血清及ABO反定型用紅細胞進行正反定型，復核孕婦的血型。對這些孕婦的血液樣本進行IgG血型抗體效價檢測的方法是：參考2-Me試劑說明書，將本次試驗分成三個步驟：第一步，將這些孕婦的血液樣本放到離心機中進行離心處理。分離出血清后，將血清樣本與2-Me試劑分別按照1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512、1:1024的比例在標記好的試管中進行稀釋。第二步，將稀釋液放到37℃的恒溫水浴箱中進行IgM抗體裂解處理，時間為15min。采用ABO反定型用紅細胞溶液對裂解后的溶液進行驗證，判斷是否完全裂解。如果裂解后的溶液未完全裂解，需要將其放到0.9%的生理鹽水中稀釋后重新裂解。再次對裂解后的溶液進行IgM抗體裂解處理。第三步，將裂解后的溶液加入到0.8%A型或B型反定型用紅細胞溶液，使這兩種溶液的比例為1:1。將這兩種溶液加入到抗人球蛋白微柱凝膠卡中，測定IgG血型抗體效價。這些孕婦分娩后，均對其新生兒進行ABO-HDN檢測，方法是：采用微柱凝膠法對新生兒進行血型檢測、ABO-HDN檢測〔間接抗人球蛋白試驗、直接抗人球蛋白試驗及抗體釋放試驗〕。其中，參考抗人球蛋白卡試劑說明書進行間接抗人球蛋白試驗、直接抗人球蛋白試驗。抗體釋放試驗可分成三個步驟：1）用生理鹽水洗滌壓積紅細胞，共洗滌3～5次；2）在洗滌后的壓積紅細胞中添加等體積的生理鹽水，充分混勻，放置于56℃的浴箱中，處理10min；3）對壓積紅細胞和生理鹽水的混合溶液進行離心處理后，取出上清液，添加抗人球卡，且加入洗滌末次的上清液，以此作為陰性對照，完成抗體檢測。

1.3 ABO-HDN的診斷標準

將進行抗體釋放試驗的結果呈陽性作為診斷ABOHDN的標準，綜合分析新生兒血紅蛋白、膽紅素的水平及其臨床癥狀，用以輔助診斷ABO-HDN[4]。具體的診斷標準如表1所示。

表1 ABO-HDN的診斷標準

1.4 統計學方法

將本次研究的所得數據均錄入Excel 2010中校對，采用SPSS 20.0統計軟件進行處理。計量資料用±s表示，用t檢驗。計數資料用%表示，用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 這些孕婦進行產前IgG血型抗體效價檢測的結果

在這些孕婦中，進行產前IgG血型抗體效價檢測的結果為＜1:64、1:64、1:128、1:256、≥1:512的孕婦分別有61例、57例、43例、53例、24例，所占的比例分別為25.63%、23.95%、18.07%、22.27%、10.08%。詳見表2。

表2 這些孕婦進行產前IgG血型抗體效價檢測的結果（n=238）

2.2 不同產前IgG血型抗體效價孕婦的新生兒ABO-HDN的檢出率

在這些孕婦的新生兒中，共檢出147例ABO-HDN患兒，占61.76%（147/238）。進行產前IgG血型抗體效價檢測的結果為＜1:64、1:64、1:128、1:256、≥1:512孕婦的新生兒ABO-HDN的檢出率分別為47.54%、54.39%、69.77%、71.70%、79.17%。詳見表3。

表3不同產前IgG血型抗體效價孕婦的新生兒ABO-HDN的檢出率

3 討論

研究發現，在產前動態監測孕婦的IgG血型抗體效價對預測ABO-HDN具有重要的指導意義[5]。胎兒血液中的紅細胞抗原免疫母體所產生的IgG血型抗體，可通過胎盤屏障與胎兒紅細胞血型抗原相結合。存在此情況的產婦分娩后，其新生兒肝脾腫大、膽紅素腦病的發生率較高[6]。在產前檢測孕婦的IgG血型抗體效價，可輔助診斷其血液中有無IgG類血型抗體，據此采取相應的干預措施，積極地預防ABO-HDN。在納入本次研究的238例孕婦中，IgG血型抗體效價以低效價為主。這提示，在日常檢測中，需要注意預防漏檢低效價的血液樣本。

本次研究的結果證實，孕婦產前IgG血型抗體效價越高，其新生兒發生ABO-HDN的風險越高。臨床上可將產前IgG血型抗體效價檢測法應用于預測ABO-HDN中。