細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)在對胸腔積液進(jìn)行病理診斷中的應(yīng)用

李賢龍，王 鵬

（聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八五醫(yī)院病理科，山西 太原 030012）

機(jī)體的臟層與壁層胸膜間有一潛在的胸膜腔，其中含有少量的液體，正常情況下該液體的產(chǎn)生與吸收處于動態(tài)平衡的狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體發(fā)生全身或局部病變時此動態(tài)平衡會被破壞，此時會因該液體形成過快或吸收過緩而產(chǎn)生胸腔積液[1]。大量的臨床實(shí)踐證實(shí)，多數(shù)的胸腔積液是由惡性間皮瘤、淋巴瘤、轉(zhuǎn)移性癌等惡性腫瘤所致，其中轉(zhuǎn)移性癌引起的胸腔積液最為常見。轉(zhuǎn)移性肺腺癌、轉(zhuǎn)移性胃癌、轉(zhuǎn)移性乳腺癌、轉(zhuǎn)移性卵巢癌、轉(zhuǎn)移性腸癌等均可引起胸腔積液，其中轉(zhuǎn)移性肺腺癌最易引起胸腔積液[2]。臨床上主要是通過胸腔積液中是否檢測出脫落細(xì)胞判斷患者有無腫瘤性病變，并根據(jù)脫落細(xì)胞是否為癌細(xì)胞確定其腫瘤的性質(zhì)[3]。細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查是臨床上對胸腔積液進(jìn)行病理診斷常用的方法。有研究表明，漿膜腔原發(fā)性間皮瘤與轉(zhuǎn)移性癌的細(xì)胞形態(tài)較為相似，僅采用細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查法對胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行病理診斷，難以區(qū)分癌細(xì)胞與正常細(xì)胞的形態(tài)，診斷的靈敏度和準(zhǔn)確率較低。臨床上治療轉(zhuǎn)移性癌與間皮性腫瘤的方案截然不同，對這兩種疾病進(jìn)行鑒別診斷的結(jié)果會影響患者后續(xù)治療方案的制定[4]。因此，尋找一種靈敏度及準(zhǔn)確度較高的診斷方法對胸腔積液進(jìn)行鑒別診斷和定性診斷就成為目前病理學(xué)研究的重要課題。許暉[5]的研究表明，在對轉(zhuǎn)移性癌與間皮性腫瘤進(jìn)行鑒別診斷時，對其胸腔積液進(jìn)行細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查的靈敏度及準(zhǔn)確率較高。本次研究主要是探討細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)在對胸腔積液進(jìn)行病理診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對象為2019年6月至2020年12月期間聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八五醫(yī)院收治的50例胸腔積液患者的50份胸腔積液標(biāo)本。這50例患者的病情經(jīng)影像學(xué)檢查和臨床綜合檢查均被確診為胸腔積液。這50例患者均簽署了參加本次研究的知情同意書。在這50例患者中，有男30例，女20例；其年齡為22～70歲，平均年齡為(45.1±7.9)歲。

1.2 研究方法

對這50份胸腔積液標(biāo)本分別使用細(xì)胞涂片法和細(xì)胞塊切片免疫組化染色法進(jìn)行病理檢查，方法是：1）采集胸腔積液標(biāo)本。⑴在早上8:00～9:00，收集患者60 mL的胸腔積液，分別裝入3～5個試管中。⑵將胸腔積液標(biāo)本放入離心機(jī)中，以3000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行10～15 min的離心處理，然后用移液槍吸出上清液，保留沉渣備用。2）制作胸腔積液標(biāo)本。⑴取部分沉渣制作成細(xì)胞涂片。⑵在剩余的沉渣中加入濃度為10%的甲醛液，將其放入離心機(jī)中以3000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行5 min的離心處理，用移液槍吸出上清液后，用濾紙包好所有的沉渣。對沉渣進(jìn)行脫水處理后制作成細(xì)胞蠟塊。對細(xì)胞蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片制成細(xì)胞塊切片，每個切片的厚度為3～ 4μm。3）對胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行染色處理。⑴使用HE（蘇木精-伊紅）對細(xì)胞涂片進(jìn)行染色處理。⑵使用免疫組化染色技術(shù)對細(xì)胞塊切片進(jìn)行染色處理，方法是：①本次研究使用的試劑盒為Maxvi-sion試劑盒〔其中包含細(xì)胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子（thyroid transcription fartor-1，TTF-1）、細(xì)胞 角 蛋 白5/6（cytokeratin 5/6，CK5/6）、粒/單 核 細(xì) 胞相關(guān)抗原（cluster Of differentiation，CD15）、上皮抗原Ber-EP4（簡稱Ber-EP4）、人類全癌上皮相關(guān)糖蛋白-2（humam pancarcinoma-associated epithelial glycoprotein，MOC-31）、癌胚抗原（carcinoembryonic，CEA）、腎母細(xì)胞瘤蛋白質(zhì)抗體（Wilns Tumor Protein, WT-1）、鈣網(wǎng)膜蛋白（Calretinin）、肌間線蛋白（Desmin）等〕，使用的顯色劑為二氨基聯(lián)苯胺（Diaminobenzidine，DAB）顯色劑。②所有操作均嚴(yán)格按照Maxvi-sion試劑盒的說明書進(jìn)行。4）對胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行觀察。由2位資深的病理醫(yī)師對胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行觀察。⑴觀察細(xì)胞涂片中是否有脫落細(xì)胞，并根據(jù)經(jīng)染色后其中是否有不典型性細(xì)胞核 、細(xì)胞的形態(tài)及黏附性等判斷胸腔積液屬于良性還是惡性。良性胸腔積液：細(xì)胞涂片中有反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞，細(xì)胞的彌散性較好、相對較為溫和、無不典型細(xì)胞核。惡性胸腔積液：細(xì)胞涂片中的細(xì)胞成團(tuán)，出現(xiàn)嚴(yán)重的不典型性細(xì)胞核、細(xì)胞形態(tài)嚴(yán)重不溫和。不能肯定性質(zhì)的胸腔積液：細(xì)胞涂片中的細(xì)胞彌散或細(xì)胞成團(tuán)，出現(xiàn)中重度不典型性細(xì)胞核或中輕度不典型性細(xì)胞核。⑵觀察對患者進(jìn)行細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查時惡性胸腔積液的檢出情況。惡性胸腔積液檢查結(jié)果呈陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)是：CK7和CEA的細(xì)胞質(zhì)均染色且在細(xì)胞膜或細(xì)胞漿上表現(xiàn)為棕黃色，Ber-EP4、CK5/6、MOC-31和Desmin 的細(xì)胞質(zhì)染色并呈棕黃色，TTF-1和WT-1在細(xì)胞核中表現(xiàn)為棕黃色顆粒，Calretinin的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均顯色且在細(xì)胞膜、細(xì)胞漿或細(xì)胞核上表現(xiàn)為黃色，CD15 的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)均染色。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察使用細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查與細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查法對這些胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行病理診斷的結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

對本次研究中的數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對50份胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查與細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查的結(jié)果

與進(jìn)行細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查相比，對50份胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查的陽性檢出率更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=11.64，P＜0.05）。詳見表1。

表1 對50份胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查與細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查的結(jié)果

2.2 用細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查與細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查法對50份胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行定性診斷的結(jié)果

使用細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查法對這50份胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行定性診斷的準(zhǔn)確率為100%（50/50），使用細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查法對這50份胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行定性診斷的準(zhǔn)確率為72%（36/50）。與使用細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查法相比，使用細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查法對這50份胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行定性診斷的準(zhǔn)確率更高，P＜0.05。在惡性間質(zhì)瘤患者的胸腔積液標(biāo)本中WT-1、CK5/6、Desmin及Calretinin的陽性表達(dá)率較高，在轉(zhuǎn)移性肺腺癌患者的胸腔積液標(biāo)本中CK7、Ber-EP4、CD15、CEA、TTF-1 及MOC-31的陽性表達(dá)率較高。詳見表2。

表2 用細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查與細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查法對50份胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行定性診斷的結(jié)果[份(%)]

3 討論

對胸腔積液進(jìn)行細(xì)胞病理學(xué)檢查是臨床上鑒別診斷良惡性腫瘤的常用手段之一。相關(guān)的調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，對胸腔積液進(jìn)行細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查的靈敏度較低，僅為50%～70%[6-7]。郭仁杰等[8]的研究表明，轉(zhuǎn)移性癌癥患者和漿膜腔原發(fā)性間皮性腫瘤患者的胸腔積液中細(xì)胞形態(tài)的相似度很高，單用細(xì)胞涂片病理學(xué)檢查法難以區(qū)分這兩種細(xì)胞形態(tài)，而對這兩種疾病進(jìn)行鑒別診斷的結(jié)果可直接影響醫(yī)師為患者制定的治療方案，進(jìn)而影響治療的效果。細(xì)胞塊切片技術(shù)是通過對細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行離心處理，使細(xì)胞高度濃縮后形成沉淀，再用濃度為10%的甲醛對沉渣進(jìn)行固定，然后對其進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片處理的一項(xiàng)技術(shù)。使用該技術(shù)可采集較多的細(xì)胞成分，在對細(xì)胞塊進(jìn)行石蠟包埋后可連續(xù)切片，不僅能夠長期保存標(biāo)本，還可控制切片的厚度、均勻度，以便進(jìn)行觀察[9]。免疫組化染色法是通過使用顯色劑對抗體進(jìn)行標(biāo)記，再用標(biāo)記后的抗體與細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行特異性結(jié)合，然后利用化學(xué)反應(yīng)顯色反映其位置、活性及分布等[10-11]。細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)的操作簡單，可對未知抗原進(jìn)行精確的定位，且特異性強(qiáng)[12]。應(yīng)用細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)可完整地保存細(xì)胞標(biāo)本，有利于對標(biāo)本進(jìn)行多項(xiàng)病理學(xué)檢查。細(xì)胞塊切片免疫組化染色病理學(xué)檢查具有操作簡單、特異性強(qiáng)、標(biāo)本易保存等特點(diǎn)。本次研究的結(jié)果證實(shí)，細(xì)胞塊切片免疫組化染色技術(shù)在對胸腔積液進(jìn)行病理診斷中具有較高的應(yīng)用價值。