Prospero相關同源異形盒蛋白1在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義>

李冰，馬起鵬，林林，劉暢>

(1.鐵嶺市中心醫院 婦產科,遼寧 鐵嶺 112000； 2.中國醫科大學附屬盛京醫院滑翔院區 婦科,遼寧 沈陽 110022)

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤之一，其發病率占女性惡性腫瘤的第4位。近年來，我國宮頸癌的發病率和死亡率呈逐漸上升之勢[1]。尋找宮頸癌潛在的分子生物學指標對改善患者生存預后有重要意義。Prospero相關同源異形盒蛋白1(Prospero- related homeobox 1，PROX1)是一種轉錄調節因子，在淋巴管的形成和發育中發揮重要作用[2]。PROX1在膠質瘤、肝細胞癌、乳腺癌和甲狀腺癌等腫瘤組織中高表達，可能發揮促癌基因作用，其表達與腫瘤細胞的增殖、分化、侵襲、凋亡及遷移等生物學行為密切相關[3- 6]。本研究用免疫組化染色方法檢測宮頸癌組織中PROX1的表達水平，探討PROX1與宮頸癌患者臨床病理特征及預后的關系，以期尋找潛在的宮頸癌生物學指標。

1 材料與方法

1.1 標本來源

選取2011年6月至2014年6月鐵嶺市中心醫院81例宮頸癌患者的宮頸癌組織進行研究。納入標準：(1) 年齡≥18歲；(2) 組織病理學檢查證實為宮頸癌；(3) 術前未接受放療、化療或免疫治療等。排除標準：(1) 嚴重的心肝腎功能障礙；(2) 隨訪資料不全。患者年齡44～68歲，平均(54.01±11.80)歲；腺癌25例，鱗癌56例；低分化癌44例，中分化癌21例，高分化癌16例；腫瘤直徑(3.89±1.34)cm；深浸潤42例；有淋巴結轉移38例；FIGO分期為Ⅰa期18例，Ⅰb期23例，Ⅱa期40例；術后輔助化療59例，放療或放化療聯合治療13例。治療后對患者進行門診和電話隨訪，患者隨訪截止2019年6月，記錄患者總體生存時間。

1.2 免疫組化染色法檢測組織中PROX1的表達

宮頸癌組織和癌旁組織(距離癌組織>4 cm[7])的石蠟切片由鐵嶺市中心醫院病理科制作，厚度為4 μm。在70 ℃下烤片30 min，隨后進行脫蠟處理。用Tris/EDTA抗原修復緩沖液(北京酷來搏科技有限公司)進行抗原修復，羊血清封閉30 min。加入鼠抗人PROX1單克隆抗體(1∶1 000稀釋，美國Sigma公司)，4 ℃過夜，隨后加入生物素標記的鼠抗兔IgG(1∶500稀釋，美國Sigma公司)，37 ℃孵育30 min。用辣根標記的鏈霉素卵白素工作液和DAB顯色液處理，蘇木紫復染。經過脫水、透明、封片處理后在顯微鏡下觀察。

由兩位病理科醫師進行獨立閱片，兩人結果一致則記錄結果，如有爭議則請第3名醫師看片，以兩個相同結果為準。每張切片隨機選擇10個視野，每個視野計數100個細胞，根據細胞的染色強度及陽性細胞比例判斷PROX1表達情況。染色為陰性記0分、淺黃色1分、棕黃色2分、棕褐色3分；陽性細胞數為0～10%記1分、11%～50%記2分、51%～80%記3分、81%～100%記4分，將二者評分相乘得出最終結果：0分為陰性，1～3分為弱陽性，4～8分為中等陽性，9～12分為強陽性[8]。0～3分為低表達組，4～12分為高表達組。

1.3 統計學處理

應用SPSS 21.0統計軟件進行統計學分析。兩組間計數資料比較用McNemar檢驗。生存分析用Kaplan- Meier法，多因素分析用Cox比例風險回歸模型。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 PROX1在宮頸癌組織中的表達

如圖1所示，PROX1陽性染色主要出現在細胞核中，細胞漿中也有少量染色。癌組織中PROX1高表達率為69.14%(56/81)，明顯高于癌旁組織的11.11%(9/81)，差異有統計學意義(χ2=35.905，P<0.001)。

A.PROX1在癌旁組織中弱陽性表達; B.PROX1在癌組織中強陽性表達

2.2 PROX1表達與宮頸癌臨床病理特征的關系

高表達組組織低分化、深浸潤和淋巴結轉移率均高于低表達組(均P<0.05)，其余資料的組間比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。多因素分析結果顯示，分化程度、浸潤深度和淋巴結轉移是PROX1表達的獨立影響因素(P<0.05)，見表2。

表1 PROX1表達與宮頸癌臨床病理特征的關系

表2 影響PROX1表達的多因素分析

2.3 宮頸癌總體生存時間的影響因素分析

Cox多因素分析結果顯示，組織低分化、浸潤較深、淋巴結轉移、未輔助化療、PROX1高表達是宮頸癌患者總體生存時間短的獨立影響因素(均P<0.05)，見表3。

表3 宮頸癌患者總體生存時間的多因素分析

2.4 PROX1表達與宮頸癌患者生存預后的關系

高表達組5年生存率為40.74%，明顯低于低表達組的71.73%，差異有統計學意義(P=0.031，Log- rank檢驗)，見圖2。

圖2 宮頸癌患者生存曲線

3 討 論

宮頸癌的發病機制目前尚未完全明確[9]。PROX1于1996年首次被Zinovieva等人發現，是prospero在哺乳動物中的同源框基因轉錄因子[10]。既往研究[3- 6]發現，PROX1與膠質瘤、肝細胞癌、乳腺癌和甲狀腺癌等多種腫瘤的發生和發展密切相關。PROX1在宮頸癌中的表達及意義既往未見報道，本研究用免疫組化染色法檢測了81例宮頸癌組織和配對的癌旁組織，結果顯示癌組織中PROX1表達率為69.14%(56/81)，明顯高于癌旁組織的11.11%(9/81)，差異有統計學意義。結果說明PROX1可能作為促癌基因在宮頸癌中發揮作用。

本研究發現，PROX1高表達組低分化、深浸潤、淋巴結轉移率均高于低表達組，提示PROX1與宮頸癌的進展密切相關。PROX1在腫瘤中的作用機制既往報道較少。Gramolelli等[11]發現，PROX1結合并抑制基質金屬蛋白酶- 14表達，進而參與腫瘤血管生成和腫瘤侵襲。也有學者[12]發現，PROX1通過核小體重塑和去乙酰化酶復合物抑制Notch信號通路，進而抑制腫瘤細胞增殖。PROX1也與免疫炎癥損傷有關，它能夠通過上調轉錄因子κB促進瘤細胞增殖和侵襲[3]。PROX1也表達于淋巴管內皮細胞，能夠參與腫瘤淋巴管新生和腫瘤淋巴道轉移[2]。

影響宮頸癌預后的因素有很多，本研究發現腫瘤低分化、浸潤較深、淋巴結轉移、未輔助化療是宮頸癌患者不良生存預后的獨立影響因素，這與既往報道[13- 15]一致。本研究結果顯示，高表達組5年生存率為40.74%，明顯低于低表達組的71.73%，提示PROX1可能會成為預測宮頸癌患者預后的生物學指標。

綜上所述，PROX1表達水平與宮頸癌分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移及FIGO分期有關，PROX1高表達可能預示患者的不良生存預后。本研究也存在一些局限性，例如未檢測血清中PROX1表達水平，其對宮頸癌早期診斷及鑒別診斷的價值還有待研究；未分析PROX1下游分子的變化，未來需要深入探討其在宮頸癌中的作用機制。