肺炎支原體肺炎兒童血清SP- D、sB7- H3濃度變化及其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究>

景素敬，柳敏，程穎，郝偉紅>

(1.邯鄲市第二醫(yī)院 兒科，河北 邯鄲 056001； 2.邯鄲市中心醫(yī)院 兒科，河北 邯鄲 056001)

肺炎支原體肺炎(Mycoplasmapneumoniaepneumonia，MPP)是兒童中的常見病，也是誘發(fā)小兒呼吸道感染的常見因素，5%～20%的患兒出現(xiàn)呼吸道感染與MPP有關(guān)，以學(xué)齡期、青少年群體居多，近年來，MPP患兒呈現(xiàn)低齡化傾向[1]。MPP發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，大部分研究[2]認(rèn)為主要與細(xì)胞免疫所介導(dǎo)的炎癥相關(guān)，從而引起機(jī)體免疫異常，誘發(fā)免疫損傷，促進(jìn)肺內(nèi)炎癥進(jìn)展，還可能引起心肌炎、肝炎等肺外并發(fā)癥。輕度MPP患兒經(jīng)抗生素治療后通常能取得較好效果，不會誘發(fā)嚴(yán)重臟器損害，但重癥患兒病情扭轉(zhuǎn)難度較大，可引起肺實變、全身炎癥反應(yīng)綜合征等病變，對生命構(gòu)成威脅[3]。既往有學(xué)者[4]通過炎癥因子對MPP病情進(jìn)展進(jìn)行評估，其能反映機(jī)體炎癥情況，但特異度欠佳。目前，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，可溶性B7- H3(soluble B7- H3，sB7- H3)可能與細(xì)胞因子相互協(xié)同，或產(chǎn)生拮抗作用，參與肺部疾病進(jìn)展[5]。肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(pulmonary surfactant associated protein D，SP- D)是SP的重要成分，能調(diào)節(jié)肺部免疫，與多種病原體的糖蛋白結(jié)合可將凋亡壞死細(xì)胞吞噬[6]。據(jù)此推測，SP- D、sB7- H3可能參與了肺炎發(fā)生及進(jìn)展，但作用機(jī)制仍不明確。故本次納入104例MPP患兒為研究對象，分析其血清SP- D、sB7- H3濃度變化，并探討二者與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取邯鄲市第二醫(yī)院2018年7月至2020年7月收治的MPP患兒104例作為MPP組，另取同期體檢的健康體檢兒童90例作為對照組。研究方案獲倫理委員會批準(zhǔn)，兩組基線資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組基線資料比較

1.2 納入、排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) (1) MPP組：① 經(jīng)影像學(xué)檢查證實為MPP，年齡≤14歲；② 病程≤2周；③ 有家屬陪同，且對研究內(nèi)容知情同意。(2) 對照組：① 體檢狀況良好；② 性別、年齡、身高、體重與MPP組匹配；③ 有家屬陪同，且對研究內(nèi)容知情同意。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) (1) 既往有免疫系統(tǒng)缺陷、支氣管哮喘、呼吸道慢性炎癥病史者；(2) 近3個月內(nèi)使用過免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑者；(3) 近期有手術(shù)史、創(chuàng)傷史者；(4) 經(jīng)呼吸道病理學(xué)檢查，提示為其它病原體感染者；(5) 惡性腫瘤者；(6) 腦、心等臟器嚴(yán)重受損者。

1.3 方法

(1) 血清指標(biāo)檢測：在受試者體檢或確診后即刻采集空腹靜脈血4 ml，2 500 r·min-1離心5 min，離心半徑8 cm，分離血清存放于-70 ℃冰箱等待檢測。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法測定血清SP- D、sB7- H3濃度，主要試劑盒包括人SP- D酶免試劑盒(上海一研生物科技有限公司，規(guī)格：48T)、人sB7- H3酶免試劑盒(上海滬鼎生物科技有限公司，規(guī)格：48T)，吸光度值檢測儀器為邁瑞mindray MR- 96A酶標(biāo)分析儀，嚴(yán)格根據(jù)試劑盒操作。經(jīng)散射免疫比濁法測定血清C反應(yīng)蛋白(C reactive protein，CRP)，試劑盒為CRP檢測試劑盒(貝克曼庫爾特有限公司，規(guī)格：300測試·盒-1)。經(jīng)PTS- 3000血沉分析儀(北京普天新橋技術(shù)有限公司)測定血沉(erythrocyte sedimentation rate，ESR)，經(jīng)山東博科BIOBASE全自動生化分析儀測定白細(xì)胞計數(shù)(WBC)。(2) 亞分組與診斷、評分標(biāo)準(zhǔn)：① 根據(jù)重癥MPP診斷標(biāo)準(zhǔn)評估MPP患兒的疾病嚴(yán)重程度，并分成輕癥組(n=56)和重癥組(n=48)。重癥MPP診斷[7]：經(jīng)影像學(xué)檢查可見壞死性肺炎改變；肺大葉出現(xiàn)實變，且伴有大量胸腔積液；對呼吸功能有明顯影響，或者出現(xiàn)肺外并發(fā)癥；伴有閉塞性支氣管炎。至少滿足上述1條標(biāo)準(zhǔn)則可確診為重癥MPP，將其納入重癥組，否則為輕癥組。② 臨床肺部感染評分(clinical pulmonary infection score，CPIS)[8]：內(nèi)容包括體溫、WBC、分泌物、氣體交換指數(shù)、X線胸片浸潤影、氣道吸出物細(xì)菌培養(yǎng)，每項計0～2分，總分范圍為0～12分，分值越高提示感染程度越重。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 MPP組、對照組的血清SP- D、sB7- H3濃度比較

MPP組血清SP- D、sB7- H3濃度均高于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 MPP組、對照組患兒的血清SP- D、sB7- H3濃度比較

2.2 輕癥、重癥MPP患兒的血清SP- D、sB7- H3濃度及臨床資料比較

重癥組血清ESR、CRP、SP- D、sB7- H3濃度及CPIS高于輕癥組(P<0.05)，兩組性別、年齡、身高、體重、病程、WBC比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3 輕癥、重癥MPP患兒的血清SP- D、sB7- H3濃度及臨床資料比較

2.3 重癥MPP發(fā)生的影響因素分析

經(jīng)Logistic多因素回歸模型對相關(guān)變量行量化賦值，其中ESR、CRP、SP- D、sB7- H3以均值為界賦值，將其定義為自變量X，以是否發(fā)生重癥MPP作為因變量Y(輕癥=0，重癥=1)，結(jié)果顯示血清CRP、SP- D、sB7- H3濃度及CPIS是重癥MPP發(fā)生的影響因素(P<0.05)，見表4。

表4 重癥MPP發(fā)生的影響因素分析

2.4 血清SP- D、sB7- H3濃度對重癥MPP的評估價值分析

收集患者各血清指標(biāo)的數(shù)據(jù)，根據(jù)數(shù)據(jù)繪制ROC曲線，提示血清SP- D、sB7- H3濃度單獨(dú)與二者并聯(lián)(即其中1項異常則確診)聯(lián)合評估重癥MPP的AUC分別為0.759、0.780、0.884，最佳界值分別為149.415 ng·ml-1、6 381.170 pg·ml-1，見表5、圖1。

表5 血清SP- D、sB7- H3濃度對重癥MPP的評估價值分析

圖1 血清SP- D、sB7- H3濃度評估重癥MMP的ROC曲線

2.5 MPP患兒血清SP- D、sB7- H3濃度與CPIS的相關(guān)性分析

經(jīng)相關(guān)性分析顯示，血清SP- D、sB7- H3濃度與CPIS呈正相關(guān)(r=0.620、0.662，均P<0.05)，見圖2、3。

圖2 血清SP- D濃度與CPIS的線性相關(guān)圖

3 討 論

肺炎支原體是導(dǎo)致兒童出現(xiàn)非細(xì)菌性肺炎的一種常見病原體，在小兒肺炎中MPP占比高達(dá)10%～20%，因MPP患兒年齡較小，機(jī)體抵抗能力差，一旦發(fā)生肺部感染后病情進(jìn)展迅速，可引起周圍神經(jīng)炎、腦膜炎等并發(fā)癥，影響患兒機(jī)體發(fā)育[9]。MPP患兒癥狀的嚴(yán)重程度具有差異性，大部分患兒病情較輕，癥狀包括咽痛、咳嗽、發(fā)熱等，重癥患兒則可能發(fā)生低氧血癥，或致多個臟器受損，危及生命[10]。盡早確診MPP并評估其進(jìn)展情況對改善預(yù)后而言至關(guān)重要，但目前尚缺乏理想指標(biāo)預(yù)測MPP的進(jìn)展程度。有研究[11]指出SP- D對適應(yīng)性免疫應(yīng)答具有調(diào)節(jié)作用，與肺炎病原體感染疾病密切相關(guān)。sB7- H3作為共刺激因子能對下游趨化因子受體進(jìn)行刺激，使其活躍度提升，致肺泡損傷加劇[12]。鑒于此，臨床可以考慮通過測定二者在MPP患兒血清中的濃度，觀察其對病情進(jìn)展的影響。

圖3 血清sB7- H3濃度與CPIS的線性相關(guān)圖

本研究結(jié)果提示，與健康者相比MPP患兒的血清SP- D、sB7- H3濃度明顯增高。研究指出，SP- D可與多種革蘭陽性菌、巨噬細(xì)胞結(jié)合產(chǎn)生天然免疫效應(yīng)，并且對巨噬細(xì)胞有調(diào)節(jié)作用，促進(jìn)病毒、細(xì)菌被吞噬，從而將其清除[13]。徐素玲等[14]研究也發(fā)現(xiàn)MPP患兒血清SP- D濃度較無肺感染兒童顯著增高，本研究結(jié)果與之吻合。MPP患兒血清SP- D濃度上調(diào)的機(jī)制可能在于當(dāng)肺部出現(xiàn)炎癥后，可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞受到損害，提升肺泡毛細(xì)血管通透性，SP- D則能輕易達(dá)外周血，致血清SP- D濃度增高[15]。B7- H3是B7共刺激分子中的一員，能調(diào)節(jié)T細(xì)胞并產(chǎn)生共抑制、共刺激作用，其功能與T細(xì)胞活化狀態(tài)密切相關(guān)，一方面，B7- H3對靜息狀態(tài)下的T細(xì)胞分泌有促進(jìn)作用，另一方面，其還能對活化狀態(tài)的T細(xì)胞分泌進(jìn)行抑制，參與免疫應(yīng)答[16]。sB7- H3是B7- H3的其中一種表達(dá)形式，可以通過調(diào)節(jié)T細(xì)胞分泌參與肺炎患兒的免疫應(yīng)答，影響疾病進(jìn)展[17]。夏利等[18]也發(fā)現(xiàn)，MPP患兒的血清B7- H3呈高表達(dá)，本研究結(jié)果與之吻合。B7- H3參與MPP的機(jī)制可能在于其高表達(dá)能將T細(xì)胞激活，對T細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控，使炎癥反應(yīng)放大，從而參與MPP發(fā)生與進(jìn)展。

本研究提示與輕癥MPP患兒相比，重癥患兒的血清SP- D、sB7- H3濃度明顯上調(diào)，且血清CRP、SP- D、sB7- H3濃度及CPIS是重癥MPP發(fā)生的影響因素。SP- D表達(dá)增高與肺部炎癥進(jìn)展密切相關(guān)，原因可能在于SP- D利用支氣管上皮與肺泡之間的間隙到達(dá)血液內(nèi)，而隨著肺部炎癥加重上皮細(xì)胞與肺泡間的間隙也相應(yīng)擴(kuò)大，使SP- D輕易進(jìn)入血液，即血清SP- D濃度增高[19]。因此，重癥MPP患兒血清SP- D濃度較輕癥患兒明顯上調(diào)。sB7- H3具有雙向調(diào)節(jié)功能，它對γ- 干擾素生成有促進(jìn)作用，但其過表達(dá)能對炎癥細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控，促進(jìn)炎癥因子分泌，導(dǎo)致機(jī)體受損[20]。據(jù)此推測sB7- H3可能通過調(diào)控炎癥因子表達(dá)，導(dǎo)致MPP病情加重。本研究顯示，CRP水平增高也與重癥MPP發(fā)生有關(guān)。既往研究[21]發(fā)現(xiàn)，MPP加重患兒通常伴有炎癥加重，主要原因在于這類患兒的感染程度較重，由感染因素引起的CRP急劇上調(diào)。CPIS是評估肺部感染嚴(yán)重程度的常用評分方式，能反映患者的氣管分泌物、氧合、WBC等情況，CPIS分值越高，表明肺部感染程度越重[22]。本研究也發(fā)現(xiàn)，重癥MPP患兒的CPIS更高。臨床可通過分析上述因素推測輕癥MPP患兒進(jìn)展成重癥的風(fēng)險，盡早給予針對性治療。

本研究結(jié)果顯示血清SP- D、sB7- H3濃度對重癥MPP有一定預(yù)測價值，且二者均與CPIS呈正相關(guān)，隨著MPP病情加重，二者在血清中表達(dá)水平也越高。在發(fā)生肺部感染后機(jī)體出現(xiàn)氧化損傷，而SP- D在該損傷作用下可導(dǎo)致SP- D膠原尾暴露，并與鈣網(wǎng)質(zhì)蛋白復(fù)合體相互結(jié)合，促使肺泡巨噬細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB通路活化，引起或加重炎癥[23]。此外，在MPP發(fā)生后sB7- H3可通過促進(jìn)中性粒細(xì)胞活化、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子水平誘發(fā)免疫反應(yīng)損害，參與疾病進(jìn)展[24]。既往也有研究[25- 26]認(rèn)為，MPP患兒的血清SP- D、sB7- H3濃度增高，但僅分析了二者的表達(dá)水平。而本研究不僅分析二者的表達(dá)情況，還探討了其與MPP嚴(yán)重程度的相關(guān)性，能為臨床診療提供更多可靠依據(jù)。

綜上所述，與健康兒童相比，MPP患兒的血清SP- D、sB7- H3濃度上調(diào)，且與MPP嚴(yán)重程度有相關(guān)性，臨床可考慮將二者作為評估MPP進(jìn)展的依據(jù)。此外，本研究也有局限性，如未分析血清SP- D、sB7- H3二者間的相關(guān)性，且未分析二者與預(yù)后的關(guān)系，未來還須彌補(bǔ)上述缺陷，進(jìn)一步對此予以探討。