升陽益胃顆粒的制備工藝研究

王宏,馬全龍,姜亮,李鵬,王坤

(1.山東慈德醫(yī)藥有限公司,山東 濟南 250100；2.濟南龍華醫(yī)藥技術(shù)有限公司,山東 濟南 250032；3.山東仙河藥業(yè)有限公司,山東 東營 257231；4.山東省食品藥品檢驗研究院，山東 濟南 250101)

升陽益胃顆粒是在升陽益胃湯基礎(chǔ)上制成的顆粒劑，升陽益胃湯是金元時期著名醫(yī)家李東垣《脾胃論》中的經(jīng)典名方，已入選國家中醫(yī)藥管理局古代經(jīng)典名方目錄，由黃芪、半夏、人參、甘草、防風、白芍藥、羌活、獨活、橘皮、茯苓、澤瀉、柴胡、白術(shù)、黃連、生姜和大棗組成[1]。主治脾胃之虛，怠惰嗜臥，四肢不收，時值秋燥令行，濕熱少退，體重節(jié)痛，口苦舌干，食無味，大便不調(diào)，小便頻數(shù)，不嗜食，食不消；兼見肺病，瀝淅惡寒，慘慘不樂，面色惡而不和[2]。本試驗對升陽益胃顆粒的提取和成型工藝進行了優(yōu)化篩選。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 AL204電子分析天平[梅特勒-托利多國際貿(mào)易(上海)有限公司]；CAV313C電子分析天平(上海皆準儀器設備有限公司)；LC-15C高效液相色譜儀(島津)；UC-120D超聲波清洗器(寧波市雙嘉儀器有限公司)；DHG型鼓風干燥箱(鄭州宏華儀器有限公司)。

1.2 試藥 黃芪、半夏、人參、甘草、防風、白芍、羌活、獨活、橘皮、茯苓、澤瀉、柴胡、白術(shù)、黃連、生姜和大棗等藥材飲片均購自山東博康中藥飲片有限公司；糊精(曲阜市天利藥用輔料有限公司，批號：F20209990413)；蔗糖(湖南新綠方藥業(yè)有限公司，批號：F20170000474)；可溶性淀粉(山東聊城阿華制藥股份有限公司，批號：F20190000179)；芍藥苷對照品(20 mg,批號：110736-201943，純度為95.1%，含量測定用)、甘草苷對照品(20 mg,批號：113280-201928，純度為97.4%，含量測定用)購自中國食品藥品檢定研究院；乙醇(山東龍玉泉藥用輔料有限公司，批號：F20170000523)；乙腈(東莞市斯巴達化學有限公司)；磷酸(天津賽孚瑞科技有限公司)為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.2 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；SB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm，安捷倫)；以乙腈-0.1%磷酸(15∶85)為流動相，檢測波長230 nm[3]。

2.1.3 混合對照品溶液制備 精密稱取芍藥苷對照品12.89 mg置于50 mL量瓶中，甘草苷對照品12.58 mg置于100 mL量瓶中，分別加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得質(zhì)量濃度分別為245.17 μg·mL-1和122.53 μg·mL-1的單一對照品儲備液。分別精密量取芍藥苷與甘草苷對照品儲備液各2.0 mL置于同一10 mL量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，得混合對照品溶液(芍藥苷49.03 μg·mL-1，甘草苷24.51 μg·mL-1)。

2.1.4 試驗樣品溶液制備 取各試驗項下提取液，濾過后合并，精密吸取5 mL，水浴蒸至近干，用70%甲醇轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，用70%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.5 顆粒樣品溶液制備 取顆粒劑適量，混勻，研細，取約6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇100 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率100 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[4]。

2.1.6 陰性對照溶液的制備 按處方組成比例，稱取除甘草、白芍外的其余藥味，制成不含甘草、白芍的陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液。

2.1.7 方法學考察 按《中國藥典》2015年版(通則9101)藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則進行，結(jié)果甘草苷在12.18～73.06 μg·mL-1范圍內(nèi)，回歸方程為Y=283 863X-16 496(R2=0.999 5)，精密度RSD=0.63%、重復性RSD=0.83%、加樣回收率范圍96.59%～101.25%、RSD=1.38%，在12 h內(nèi)穩(wěn)定性RSD=1.55%；芍藥苷在24.52～147.10 μg·mL-1范圍內(nèi)，回歸方程為Y=836 229X-19 615(R2=0.999 7)，精密度RSD=1.12%、重復性RSD=0.87%、加樣回收率范圍98.96%～101.89%、RSD=1.52%，在12 h內(nèi)穩(wěn)定性RSD=1.29%。

2.2 提取工藝 分別稱取黃芪165 g、半夏82.5 g、人參82.5 g、甘草82.5 g、防風41.2 g、白芍41.2 g、羌活41.2 g、獨活41.2 g、橘皮33 g、茯苓24.8 g、澤瀉24.8 g、柴胡24.8 g、白術(shù)24.8 g、黃連16.5 g、生姜50 g，大棗12 g，共9份，每份共計788 g，參考文獻[5]，以甘草苷和芍藥苷含量為指標按表1進行試驗，結(jié)果見表2～3。

表1 因素水平表

表2 正交試驗設計與結(jié)果

表3 甘草苷含量方差分析

從表2～4分析，以甘草苷與芍藥苷為共同指標時，A3明顯優(yōu)于A2、A1，B3明顯優(yōu)于B2、B1，C因素各組間無明顯區(qū)別，可任意選擇；從可操作和生產(chǎn)成本等方面綜合考慮，最終確定提取工藝A3B3C1(加8倍量水提取3次，每次30 min)。

表4 芍藥苷含量方差分析

2.3 提取驗證試驗 按“2.2”項下分別稱取升陽益胃顆粒處方中黃芪等飲片3份，每份788 g，按優(yōu)選的工藝(加8倍量水提取3次，每次30 min)提取驗證3次，測定出膏率、甘草苷和芍藥苷含量(見表5)。

表5 提取工藝驗證試驗結(jié)果表

結(jié)果表明，按優(yōu)選的升陽益胃顆粒提取工藝提取驗證3次，出膏率及含量穩(wěn)定。

2.4 成型工藝研究

2.4.1 潤濕劑的選擇 分別按升陽益胃顆粒處方稱取黃芪等飲片共4份，每份788 g，分別按優(yōu)選的提取工藝提取，合并濾液，制成干膏，結(jié)合本品日服量，經(jīng)預試驗，加入適量輔料，混勻，以不同潤濕劑制軟材，以尼龍篩網(wǎng)制粒，干燥，整粒(見表6)。

表6 潤濕劑選擇結(jié)果

由上表可知，干膏粉與賦形劑混勻后以20%乙醇制軟材，顆粒合適，可操作性強。

2.4.2 賦形劑的選擇 分別按升陽益胃顆粒處方稱取黃芪等飲片4份，每份788 g，分別按優(yōu)選的提取工藝提取，制成干膏，粉碎，混勻，平均分成4份，與不同比例輔料混勻，制成制粒，以顆粒的成型率、制粒可操作性為評價指標，結(jié)果見表7。

表7 賦形劑選擇結(jié)果

結(jié)果：糖粉∶可溶性淀粉∶糊精=2∶3∶5為賦形劑時，顆粒的成型性好，可操作性強。

2.5 中試工藝驗證 按升陽益胃顆粒處方160倍投料，分別稱取黃芪13.2 kg、半夏6.6 kg、人參6.6 kg、甘草6.6 kg、防風3.3 kg、白芍藥3.3 kg、羌活3.3 kg、獨活3.3 kg、橘皮2.64 kg、茯苓1.98 kg、澤瀉1.98 kg、柴胡1.98 kg、白術(shù)1.98 kg、黃連1.32 kg、生姜4.0 kg、大棗0.96 kg，中試生產(chǎn)3批，對生產(chǎn)工藝進行驗證，結(jié)果見表8。

表8 升陽益胃顆粒中試表

結(jié)果經(jīng)3批中試驗證，升陽益胃顆粒的出干膏率、成品率和含量等指標穩(wěn)定可行。

3 討論

3.1 升陽益胃湯是補氣升陽名方，以黃芪為君，健脾益氣，升舉清陽；黨參、甘草健脾益胃，助黃芪補氣健脾之功；白術(shù)苦溫燥濕，茯苓淡滲利濕，白術(shù)與茯苓既能補脾益氣，又能化濕除濁，而助脾土健運；陳皮、半夏行氣和胃，調(diào)暢脾胃氣機升降；澤瀉甘寒利水滲濕，助白術(shù)茯苓健脾化濕；柴胡、羌活、獨活、防風四味皆為風藥，具有燥濕之功；風藥升散，又助黃芪升舉清陽；白芍養(yǎng)陰補血；黃連苦寒燥濕，以清除滯留余熱，配白芍可制風藥辛燥的作用[6]。全方令濁陰降、清陽升，脾氣健旺，氣機調(diào)暢，虛實并治，攻補兼施，補中有散，發(fā)中有收，氣足陽升，濕熱自除[7]。

3.2 為保持升陽益胃顆粒的經(jīng)典名方特色，保證臨床療效，也符合國家關(guān)于古代經(jīng)典名方除成型工藝外的其他制備方法應當與古代醫(yī)籍記載基本一致的相關(guān)規(guī)定[8]，結(jié)合日服用飲片量及出膏率等因素，宜制成顆粒劑。升陽益胃湯原方煎法為加水三盞，同煎至一盞，去渣，溫服[2]，經(jīng)文獻考證[9-11]，金元時期一中盞者，約五合，1升=700 mL；1斤約合如今的660 g，生姜1片約等于5 g，棗1枚約等于3 g，每服三錢，相當于飲片劑量約12.4 g，每次服用干膏約3 g，加入糖粉、可溶性淀粉和糊精制成顆粒劑，單劑量包裝為10 g，每次服用1袋，便于患者攜帶和服用。

3.3 對升陽益胃顆粒提取工藝驗證3次，結(jié)果出膏率及含量穩(wěn)定；以顆粒的成品率和制粒可操作性為評價指標，優(yōu)選后顆粒的潤濕劑為低濃度乙醇，賦形劑為糖粉、可溶性淀粉和糊精，制成的顆粒硬度合適，溶化性好；按升陽益胃顆粒處方量的160倍投料，進行了3批中試生產(chǎn)，結(jié)果升陽益胃顆粒劑的成品率，甘草苷和芍藥苷含量穩(wěn)定，優(yōu)選的升陽益胃顆粒劑工藝適用于生產(chǎn)。