替比夫定在小鼠自身免疫性肝炎中對血清IL-17的影響

張笛，李貞茂

（四川省醫學科學院/四川省人民醫院 消化內科，四川 成都 610072）

0 引言

IL-17是輔助性T淋巴細胞17（Th17）分泌的一種重要的促炎因子。IL-17可誘導多種趨化因子積極參與機體的免疫調節和炎癥反應。IL-17可促進Th17活化，通過激活肝臟內細胞產生炎性介質，分泌多種促炎因子影響肝臟的炎癥[1]。IL-17在自身免疫性肝炎（AIH）中表達明顯升高，在AIH發病過程中，IL-17可能介導了肝臟炎癥及纖維化[2]。替比夫定（Telbivudi-ne，LdT）是目前很多乙肝患者使用的抗病毒的藥物，它單獨使用及聯合阿德福韋酯的治療對乙肝抗病毒有較好作用[3]，特別是它的免疫調節作用如對IL-17的調節作用得到一些研究證實[4-5]。本次研究把重點放在了替比夫定對小鼠自身免疫性肝炎中血清IL-17水平的影響，希望為自身免疫性肝炎患者如果合并慢性乙型活動性肝炎的選藥提供更好地選擇依據。

1 資料與方法

1.1 資料及動物造模。購買6～8周C57BL/6雄性小鼠（體重在20 g左右）20只，取10只小鼠的肝臟經過超聲破碎超速離心后，取其上清液含肝抗原S-100。0.5 mL新鮮S-100肝抗原與等體積的弗氏完全佐劑（CFA）充分乳化后，分別在第1 d和第7 d經腹腔注射入10只小鼠體內造模，繼續飼養小鼠到21 d。

1.2 方法。造模結束后，在治療給藥前，從小鼠眼底靜脈叢取血，測IL-17的值（ELISA法）和肝功（ALT、AST、ALP、GGT）。后使用灌胃給藥，每天一次，劑量通過小鼠與人體表面積折算的等效劑量比值表進行計算后給予替比夫定（素比伏，諾華公司）86.5 mg/kg，每日一次，持續30天后再次從小鼠眼底靜脈叢取血測IL-17的值（ELISA法）和肝功（ALT、AST、ALP、GGT）。

1.3 檢測方法。血清IL-17使用ELISA方法進行檢測（美國R&D公司試劑）；使用雅培 C-16000 全自動生化分析儀檢測肝功能等生化指標（北京中生北控生物科技股份公司）。

1.4 統計學分析。應用SPSS 19.0統計學軟件進行統計分析，組間率的比較采用χ2檢驗，計量資料以（）表示，采用t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 給予替比夫定治療前，10只小鼠IL-17、ALT（丙氨酸氨基轉移酶）、AST（天冬氨酸氨基轉移酶）均較正常值明顯升高，ALP（堿性磷酸酶）、GGT（谷氨酰轉肽酶）較正常值輕微升高。

2.2 IL-17等在替比夫定治療前后情況比較。從表1可以看出，IL-17、ALT治療前后差異有統計學意義（P＜0.05），AST、GGT和ALP治療前后差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 IL-17等在替比夫定治療前后情況比較（）

表1 IL-17等在替比夫定治療前后情況比較（）

項目 組別 n 治療前后值 F P IL17 治療前 10 819.20±12.639（pg/mL） 2.165 0.001治療后 10 501.70±23.571（pg/mL）ALT 治療前 10 266.00±26.774（U/L） 2.092 0.001治療后 10 110.30±14.376（U/L）AST 治療前 10 176.00±15.470（U/L） 3.340 0.093治療后 10 167.20±8.618（U/L）GGT 治療前 10 76.40±7.120（U/L） 2.179 0.086治療后 10 61.50±4.080（U/L）ALP 治療前 10 128.50±10.550（U/L） 0.313 0.203治療后 10 107.00±12.367（U/L）

3 討論

自身免疫性肝炎（AIH）是一種與免疫相關的慢性炎癥性肝臟疾病，AIH主要表現為肝功能異常、轉氨酶升高（主要表現為ALT、AST明顯升高，GGT、ALP輕度升高或正常）、自身抗體陽性及高免疫球蛋白血癥（以IgG升高為主）等的自身免疫性疾病。目前AIH的發病機制至今尚未闡明，目前認為針對宿主肝抗原的免疫反應是AIH肝臟損傷的主要機制[6]，研究已表明，T淋巴細胞在AIH免疫調解機制中發揮重要作用[7]。IL-17是Th17細胞分泌并參與生物功能的主要細胞因子，Th17細胞作為一種新型的輔助T細胞亞型正是主要通過分泌IL-17和IL-22等細胞因子，從而參與機體的免疫作用，在介導自身免疫性疾病、炎癥反應等過程中發揮重要作用[8]。目前研究表明發現IL-17廣泛表達于AIH、PBC以及重疊綜合征患者肝組織中炎細胞浸潤明顯的匯管區，主要在單核細胞和淋巴細胞的胞漿中有IL-17的大量表達。造模小鼠IL-17及肝臟功能出現異常，在造模后第7 d開始增加，并在第21 d達到高峰。有研究表明IL-17可以促進組織局部中性粒細胞的浸潤，在自身免疫性肝炎中IL-17可以促進中性粒細胞局部的趨化，IL-17可以促進自身免疫性肝炎肝臟局部炎癥的進展，控制IL-17可以改善AIH患者的肝臟炎癥[9]。

替比夫定（LdT）是胸腺嘧啶脫氧核苷類抗病毒藥物，目前很多研究表明，其具有抑制病毒之外的免疫調節作用，LdT對免疫主體包括適應性免疫（CD4+/CD8+T cells，Th1/Th2，Treg，Th17，IL-21等）和固有免疫（NK，NKT和巨噬細胞等）等均有調節作用，對IL-17有明顯的調節作用。

本次研究最開始的想法是，既然LdT對IL-17有調節作用，IL-17 在AIH免疫調解機制中起著重要作用，那對于AIH患者如果合并慢性乙型病毒性活動性肝炎時，在抗病毒藥物選擇中使用LdT可能同時更有利于兩種慢性肝臟疾病的恢復。從本次研究中發現，LdT的免疫調節作用對AIH小鼠的血清IL-17及部分肝臟功能改善有明顯的作用，因而從一方面表明AIH患者如果合并慢性乙型病毒性活動性肝炎時，在抗病毒藥物選擇中使用LdT可能更加合適。

本次研究的小鼠例數較少，且在造模過程中，一直無法很好完成同時合并AIH和慢性乙型病毒性活動性肝炎的小鼠模型。如果AIH和慢性乙型病毒性活動性肝炎同時合并的情況下，肝臟損害情況更加復雜，LdT是否同樣能明顯改善肝臟情況，特別是運用到患者身上的情況需進一步觀察研究，與其他抗病毒藥物的比較仍需進一步研究。