高海拔地區組培室消毒效果比較

珍 珍

(日喀則市農業科學研究所，西藏 日喀則 857000)

引言

馬鈴薯脫毒試管苗在生產上的應用解決了馬鈴薯病毒病危害造成減產的問題，但是目前微生物污染又成為脫毒試管苗生產的制約因素。因此，如何將污染控制到最低水平，并且將成本降到最低，成為目前組培實驗室需要解決的重要問題。由于西藏地區環境溫差大，氣候干燥，每當換季交替之時常出現大量的組培苗污染情況，直接影響組培苗的質量。因此，西藏脫毒馬鈴薯組培實驗室的消毒是實驗室最重要工作之一，研究選擇適合高海拔地區組培實驗室的消毒劑，提高組培苗的質量成為目前高海拔地區組培實驗室亟需解決的最重要的問題。目前，高海拔地區組培實驗室常用的空氣消毒方法有甲醛和高錳酸鉀熏蒸、次氯酸鈉擦拭、紫外燈照射等方法，近2a組培室常用的方法有二氧化氯消毒法。每種消毒方法都有一定的缺陷，但都能不同程度的對組培環境起到滅菌效果。如，紫外線具有一定的輻射，對人體皮膚會造成損害；次氯酸鈉最后分解為氯氣和氧氣而散逸，因而易于除去，不留殘毒，但產生的刺激性氣體如氯氣和氯化氫對人體有毒害作用，這些氣體強烈刺激眼角膜、上呼吸道粘膜等，可引起喉痙孿、喉水腫、支氣管炎和急性腦炎等；甲醛殘存時間長，還可致癌[1]，皮膚直接接觸甲醛可引起過敏性皮炎，產生色斑，吸入高濃度甲醛，可誘發過敏性哮喘[2]；各種空氣滅菌器消毒滅菌效果各異，一次性投入大，使用成本高[3]。二氧化氯消毒劑是國際上公認的高效消毒滅菌劑，該消毒劑為無色、無特殊氣味液體，pH值為6.5,二氧化氯濃度為0.501%。其可以殺滅一切微生物，包括細菌繁殖體、細菌芽孢、真菌、分枝桿菌、病毒等，并且這些細菌不會產生抗藥性。二氧化氯對微生物細胞壁有較強的吸附穿透能力，可有效氧化細胞內含巰基的酶，還可以快速抑制微生物蛋白質的合成來破壞微生物。本研究目的是通過比較二氧化氯、甲醛、次氯酸鈉在高海拔組培室的熏蒸消毒效果，找到一種適合高海拔組培室的消毒效果且成本低的組培室空氣消毒方法。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料包括甲醛、次氯酸鈉、二氧化氯、無菌培養皿等。

1.2 試驗地點

試驗地點為西藏日喀則市農業科學研究所薯類脫毒中心。

1.3 方法

1.3.1 熏蒸滅菌

試驗在3間組培室進行，分別為次氯酸鈉、二氧化氯、甲醛熏蒸(對照)。根據組培室的面積，次氯酸鈉消毒劑含有效氯和表面活性劑，對細菌、芽孢、病毒、結核桿菌有較強的殺滅作用。經過次氯酸鈉空氣噴霧后，空氣細菌含量顯著下降，其是一種純天然原料配制成的含氯消毒劑，能滲透各種有機物，快速殺滅多種細菌、病毒，作用快、效果好，是一種高效消毒劑。次氯酸鈉為含氯消毒劑，高效廣譜，為國內外廣泛使用[4]。次氯酸鈉溶液在300～500ppm，環境消毒時間約為30min左右，但次氯酸鈉溶液有極強的腐蝕性。二氧化氯無色無味、無毒無殘留，安全可靠，屬于生態安全環保型消毒劑，殺菌效果顯著，使用簡單便捷，重要的是對操作人員的健康不會產生危害。根據組培室的面積，二氧化氯熏蒸按10mL B劑倒入含2片A劑玻璃容器中后放在高度1.5m左右的臺子上后撤離，關閉門窗。甲醛為無色氣體，易溶于水，40%甲醛的溶液稱為福爾馬林，有很強的還原作用和特殊刺激性氣味。甲醛和高錳酸鉀為2∶1濃度，按照甲醛(40%)410mL·m-3、高錳酸鉀5g·m-3，將甲醛倒入裝有高錳酸鉀的容器后趕緊撤離實驗室，關好門窗。

1.3.2 菌落數量與統計

本次試驗設3次重復，相同面積的組培室為單位，面積18m2，采用自然沉降法檢測菌落數量，每個組培室采用5個點，分別是組培室4個角落(離墻1.5m)和中間，離地面1.5m高度，將準備好的培養皿在同一高度打開蓋放60min后再進行采樣，熏蒸前采樣和熏蒸6d后采樣的培養皿蓋上蓋后放在恒溫箱工作溫度為35℃，培養時間為3d，然后按真菌、細菌進行菌落數量統計和分類。

1.3.3 統計方法

根據奧氏公式計算組培室空氣的含菌數(cfu·m-3)，再計算出殺菌率，分析各方法的滅菌效果。

空氣菌落總數(cfu·m-3)=50000N/A×T

式中，A為培養皿大小，cm2；T為環境中培養的時間，min；N為平均培養皿的菌落數量(cfu/皿)。

殺菌率=(消毒前組培室平均菌落數-消毒后組培室平均菌落數)/消毒前組培室平均菌落數×100%

2 結果與分析

2.1 次氯酸鈉的熏蒸效果

從表1可以看出，用次氯酸鈉熏蒸后，組培環境熏蒸前后真菌、細菌含量明顯減少，真菌的滅菌率達72.83%，細菌的滅菌率達76.59%。組培室平均滅菌率達到73.75%，而且次氯酸鈉對細菌的滅殺效果要優于真菌。

2.2 二氧化氯的熏蒸效果

從表2可以看出，使用二氧化氯熏蒸后，對組培環境起到明顯的殺菌效果，熏蒸前后細菌、真菌含量明顯減少。真菌的滅菌率達85.71%，細菌的滅菌率達81.06%，平均滅菌達到83.93%，并且對真菌滅殺效果優于細菌。

表1 次氯酸鈉在組培室的熏蒸效果

表2 二氧化氯在組培室的熏蒸效果

2.3 甲醛的熏蒸效果

從表3可以看出，使用甲醛熏蒸后，對組培環境具有明顯殺菌效果，熏蒸前后真菌、細菌數量明顯減少。真菌滅菌率達78.11%，細菌的滅菌率達73.84%，平均滅菌達到76.92%，并且甲醛對真菌的滅殺效果要優于細菌，但對細菌的滅菌稍微低。

表3 甲醛在組培室的熏蒸效果

3種熏蒸消毒方法都對組培室環境中真菌、細菌起到很好的殺菌效果。其中，二氧化氯消毒殺菌效果最好，其次是甲醛，次氯酸鈉較差。從真菌和細菌的滅菌效果來看，二氧化氯對真菌的殺菌效果優于細菌，甲醛對真菌的效果優于細菌，次氯酸鈉對細菌的效果優于真菌。

3 結論

總體來說，二氧化氯、甲醛、次氯酸鈉3種環境消毒方法都對環境起到明顯的殺菌效果，對環境中的細菌、真菌都能達到滅菌的效果。從滅菌效果、工作人員健康影響、進入實驗室時間、成本各方面考慮，二氧化氯最適合于組培室環境消毒。

針對高海拔地區組培實驗室的污染源進行消毒是植物組織培養的重要環節[5]，高效安全、低毒無害、環境友好是組培實驗室消毒的本質要求和發展趨勢。馬鈴薯組培室的空氣清潔度是減少組培污染的重要條件，用于組培室消毒的常規消毒試劑次氯酸鈉，不僅味道刺鼻而且對人體有毒害作用,這些氣體強烈刺激眼角膜、上呼吸道粘膜等，可引起喉痙孿、喉水腫、支氣管炎和急性腦炎等；甲醛熏蒸法會對人體造成一定的危害，長期在組培室工作可能會產生致癌等問題；而使用二氧化氯消毒劑，沒有刺鼻的氣味，不傷皮膚，經北京市疾控中心檢測為實際無毒級產品，優良的殺菌效果及可靠的安全性能，是食用菌生產用消毒劑首選，使用簡便，價格低廉，效果顯著，既能達到消毒效果，又不會造成人體危害。通過本次試驗數據證明，二氧化氯的消毒效果顯著且消毒后18h后可以進組培室，實現高海拔組培室消毒劑高效安全、低毒無害、環境友好是組培消毒的本質要求和發展趨勢，綜合考慮二氧化氯適合用于高海拔地區組培室的消毒，通過二氧化氯消毒劑可減少組培室組培苗的污染，提高組培苗的質量，從根本上解決了馬鈴薯病蟲害造成的減產。而甲醛氣味存留時間長，一般消毒后7d左右才能進組培室且對人體會造成一定危害，成本也高；次氯酸鈉熏蒸后3d后可以進組培室，消毒結束后應將消毒廢液及時倒掉，防止有害氣體揮發。消毒操作時須戴好口罩，不宜用手揉眼摸臉等動作，以免對眼睛或皮膚造成傷害。組培室實驗的消毒要進行全方位考慮，包括消毒效果、消毒時間、對人體的傷害、成本等方面，以達到最想要的效果。