房水中IL-17、VEGF、TNF-α表達水平與先天性白內障摘除術后無晶狀體眼青光眼的相關性

唐曉蕾，張然，李倩，韓雙羽，代艷

(綿陽市中心醫院眼科，四川 綿陽 621000)

無晶狀體眼青光眼(aphakic glaucoma，AG)屬于繼發性青光眼，是先天性白內障摘除后常見的并發癥，嚴重威脅患者視力，發生率高達15.0%～58.7%[1]。AG類型較多，發病機制復雜，主要包括慢性炎癥反應、玻璃體產生毒性物質或房角堵塞導致的白內障合并房角發育不良等[1]。目前，關于AG的研究主要集中在其發生后的治療方面，如藥物及手術治療，而在分子層面對AG病因防治的研究報道極少[2]。雖然國內外研究已經證實包括白細胞介素、血管內皮生長因子等多種因子與某些類型青光眼發病機制關系密切[3]，且針對上述因子采取相應防治措施已取得了較理想的效果，但青光眼發生率及對視功能帶來的不可逆損害得到有效的降低[4]。然而，先天性白內障摘除手術后無晶狀體眼青光眼患者房水中白細胞介素17(interleukin，IL-17)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor，TNF-α)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是否同樣存在異常表達，及其與AG發病之間是否存在一定的相關性尚不清楚[5-6]。本研究擬通過對白內障摘除手術后無晶狀體眼房水中IL-17、TNF-α、VEGF含量測定，探討其與AG發病之間的關系，望為臨床防治青光眼提供新的方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用前瞻性隨機對照研究的方法將2019年8月至2020年8月在綿陽市中心醫院診斷為先天性白內障、并接受白內障摘除手術未植入人工晶狀體的150例患兒納入研究。本研究取得醫院倫理委員會批準及患兒家長知情同意。納入標準：(1)符合白內障診斷標準，即眼球的軸向長度小于正常年齡眼軸長度的兩個標準差，并達到手術指征[7]；(2)年齡≤6歲；(3)先天性白內障、并接受白內障摘除手術未植入人工晶狀體；(4)患兒家長知情同意。排除標準：(1)術前存在青光眼、眼前節發育異常者；(2)患有合并玻璃體增生癥等眼部疾病者。根據術后隨訪期內是否發生青光眼將其分為青光眼組(AG組)及非青光眼組(非AG組)。先天性白內障摘除手術后青光眼的定義[8]：眼壓≥21 mmHg及合并以下至少一項：(1)眼角膜增大；(2)雙眼不對稱合并角膜增大或眼軸增長；(3)視杯進行性增大，杯盤比值增加0.2及以上；(4)必須采用手術控制眼壓。青光眼組(AG組)和非青光眼組(非AG組)性別、年齡等常規臨床資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

1.2 觀察指標

房水采集：所有患兒術中均采集一次房水，手術眼常規眼部消毒、鋪巾，開瞼器開瞼，用帶有25 G針頭的注射器在角膜緣內l mm處行前房穿刺，抽取房水0.1～0.2 mL，置入1.5 mL滅菌eppendof 離心管中，-20 ℃保存。術后隨訪4個月、8個月和12個月，均在口服水合氯醛后進行房水采集，方法同上述操作。采用酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測IL-17、VEGF、TNF-a的水平。所用試劑盒購自R&D公司(貨號：D6050，M6000B，DY206-05)，并根據產品說明書進行相關操作。將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質，加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物，洗滌除去其他未結合的物質。加酶標抗體，使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合，徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時，固相載體上酶的量與標本中受檢物質的量呈正相關。加底物，根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量分析。

表1 兩組一般資料比較

眼壓及相關指標測定：采用Goldmann壓平眼壓計測量年長可配合患兒的眼壓，對于年幼欠配合患兒，可在口服水合氯醛麻醉下，使用Icare回彈式眼壓計進行測定。角膜直徑、眼軸可通過IOL-MASTER測定；視杯形態及杯盤比值可通過直接檢眼鏡、光學相干斷層顯像檢查(optical coherence tomography，OCT)測得。

術后隨訪時間及青光眼處理：術后每隔4個月隨訪一次并采集房水，同時行眼壓及其他相關數據測定，持續至術后1年。隨訪過程中若發現AG患者，均及時給予降眼壓藥物治療，對藥物治療無效者則考慮手術治療。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 兩組房水中IL-17、VEGF、TNF-a水平比較

術中，兩組房水IL-17、VEGF、TNF-a水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；術后4個月、8個月和12個月，AG組患兒房水中IL-17、VEGF、TNF-a水平與術中比較明顯升高，且三者均高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組房水中IL-17、VEGF、TNF-a水平比較

2.2 兩組不同時間點眼壓情況比較

術后4個月、8個月和12個月，AG組患兒眼壓高于非AG組患兒各時間點的眼壓，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組不同時間點眼壓情況比較

2.3 房水IL-17、VEGF、TNF-a水平與眼壓的相關性分析

經Pearson相關性分析表明，AG組患兒術后4個月、8個月和12個月房水IL-17、VEGF、TNF-a水平與眼壓呈正相關(P<0.05)。見表4。

表4 房水IL-17、VEGF、TNF-a水平與眼壓的相關性分析

2.4 房水IL-17、VEGF、TNF-a對無晶狀體眼青光眼患者的診斷價值

IL-17、VEGF、TNF-a的ROC曲線下面積(area under curve，AUC)分別為0.714，0.708，0.724，均大于0.7，具有一定的診斷價值。此外，三者聯合檢測的AUC值為0.792，診斷價值較單個指標高，見表5及圖1。

表5 房水IL-17、VEGF、TNF-a對無晶狀體眼青光眼患者診斷的ROC參數

3 討論

無晶狀體青光眼發生后，常用藥物治療，其中包括β受體阻滯劑、前列腺素類藥物、碳酸酐酶抑制劑等。但因患者多為兒童[9]，藥物的選擇需依循低濃度、影響小等原則，治療效果不盡理想，因此不少患兒最終需進行手術治療[9]。小梁切開術是較常用的術式，臨床效果較明顯，然而手術有一定的風險，易對患兒眼球造成不可規避的創傷和術后并發癥，術后仍需維持藥物治療，并須終身隨訪眼壓，給患兒家庭帶來了一定的經濟負擔[10]。青光眼是由眼壓(intraocular pressure，IOP)升高引起一系列的機體應激病癥，譬如，IOP升高誘發的視網膜神經節細胞(retinal ganglion cells，RGCs)進行性損傷可導致視神經退化、視神經軸突受損、視網膜神經節細胞進行性喪失[11]；視神經軸突受壓，軸漿流被阻斷，逆行神經營養因子的運輸受干擾，進而引發細胞凋亡[12]。因此，青光眼的治療可通過滴眼液、口服藥物、激光治療或手術等手段以降低眼壓。但僅依靠眼壓的降低并不能抑制視神經細胞調亡[13]，生長因子和炎癥反應在青光眼相關組織維持眼內穩態中也起著重要作用[14-15]。

青光眼多由眼房水流出紊亂引起IOP升高，降低眼壓是減緩或阻止其進行性損害的方法之一，而監測房水中多種細胞因子的表達水平可為青光眼及其他眼部疾病發生發展及防治提供一定的借鑒[16]。在青光眼的發病機制中，VEGF可促進炎癥反應，增加血管的通透性，誘導新血管的形成。IL-17作為T細胞誘導的炎癥反應的早期啟動子，可通過促炎因子IL-1和TNF-α而加重炎癥[17]。TNF是一種具有多種生物學作用的細胞因子，與細胞膜上的特定受體結合，誘導凋亡通路、NF-kappaB通路、JNK信號通路，實現細胞生長、分化、凋亡和炎癥反應。其中，TNF-α作為一種促炎因子，與炎癥、凋亡和細胞增殖密切相關，可激活多種下游級聯反應，如通過誘導細胞凋亡和炎癥等損害小梁細胞的生物功能。本研究發現，AG患者術后4個月、8個月和12個月房水IL-17、VEGF、TNF-a水平、眼壓與術中比較明顯升高，且高于對照組。IL-17、VEGF、TNF-a水平與眼壓呈正相關，表明房水IL-17、VEGF、TNF-a在先天性白內障摘除手術后無晶狀體眼青光眼發生發展過程中發揮著重要作用。此外，本研究還發現，術后4個月房水IL-17、VEGF、TNF-a的ROC下AUC值分別為0.714，0.708，0.724，均大于0.7，具有一定的診斷價值，而三者聯合檢測的AUC值為0.792，診斷價值更高。但本研究所涉及的樣本量有限，且僅為單中心研究，具體結果仍需要進行大樣本量的多中心研究加以驗證。

綜上所述，房水IL-17、VEGF、TNF-a水平在先天性白內障摘除手術后無晶狀體眼青光眼患者中異常表達，且與眼壓呈正相關，三者聯合檢測的診斷價值較高，有望成為無晶狀體眼青光眼早期診斷和治療的生物檢測指標之一。