紅陽獼猴桃的組培快繁研究

武月園，邵穎利，張可源，周金蓮，湯曉麗

(魯東大學農學院，山東煙臺 264025)

獼猴桃是雌雄異株植物，利用獼猴桃種子苗嫁接生產雌株苗周期長[1]，且實生苗的性狀不穩(wěn)定，準確辨別幼株的性別較難，且實生苗嫁接雌株后差異較大。經組織培養(yǎng)得到的雌株性狀穩(wěn)定，生長整齊，結果一致，繁殖速度快，是目前迅速繁育良種的方式[2-5]。

紅陽獼猴桃是由四川省自然資源研究所選育的中華獼猴桃優(yōu)良紅肉型品種，果肉黃綠色，果心呈紅色放射狀，肉質細滑，每100 g鮮果維生素C含量135 mg，總糖含量13.45%，超出海沃德近5%[6]，深受消費者的喜愛[7]。筆者以紅陽獼猴桃為試材進行組培繁育，研究不停種類、不同濃度的植物生長調節(jié)物質對其增殖和生根的影響，以篩選各階段最適的培養(yǎng)條件，為建立紅陽獼猴桃組培快速繁育技術體系提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為魯東大學農學院農林遺傳改良中心實驗基地栽植的紅陽獼猴桃，剪取2年生植株的新梢幼嫩莖段做組培材料，于4 ℃低溫保存24 h。

1.2 試驗方法

組培苗增殖用MS為基本培養(yǎng)基，生根用1/2 MS為基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)基蔗糖濃度30 g/L，瓊脂濃度7 g/L，pH值5.80～5.85。組培室培養(yǎng)條件：采用日光燈管模擬光照，培養(yǎng)溫度 (25±2) ℃，空氣相對濕度50%～60%，光周期為12 h光照、12 h黑暗。

初代無菌苗的培養(yǎng)。將4 ℃低溫保存的幼嫩新梢剪成3.0～5.0 cm的帶芽莖段，先用流水沖洗2 h；將莖段轉移到無菌超凈工作臺上，無菌水浸泡莖段，搖晃1 min左右，倒掉水；然后用75%乙醇浸泡30 s；無菌水沖洗3～4遍；0.1%的氯化汞消毒10 min；無菌水沖洗5～6次，最后用無菌濾紙吸干莖段表面水分。將單芽莖段剪成1.5～2.0 cm，接種于初代培養(yǎng)基上，每瓶接種3個莖段。1周后察看外植體的污染情況，2周后察看外植體是否成活，成活的莖段會從腋芽處冒出新芽。

繼代增殖培養(yǎng)。當初代培養(yǎng)基莖段上的腋芽生長至3 cm時，用解剖刀或剪刀從新發(fā)腋芽的基部切下或剪下，接種到以MS為基本培養(yǎng)基、添加不同濃度6-BA(0.3、0.4、0.5 mg/L)和GA3(0.3、0.4、0.5 mg/L)配合的9種繼代培養(yǎng)基上(表1)，每種培養(yǎng)基接種20瓶、每瓶接種3株，每處理重復3次。30 d統(tǒng)計增殖情況，計算單株的平均增殖數(shù)。研究不同成分培養(yǎng)基對紅陽獼猴桃增殖的影響。

平均增殖數(shù)=增殖的新幼苗總株數(shù)/接種苗株數(shù)

表1 不同植物生長調節(jié)劑組合的增殖培養(yǎng)基配方

生根培養(yǎng)。將繼代培養(yǎng)所得叢生苗中生長健壯，高4～6 cm的組培苗移栽到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的IBA(0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mg/L)，計5個處理，分別記作B1、B2、B3、B4、B5。每處理接入20瓶，每瓶3株，每處理重復3次。45 d后調查生根情況，統(tǒng)計獲得單株的平均生根數(shù)量，計算生根率。

生根率(%)=生根苗株數(shù)/接種苗總株數(shù)×100

煉苗與移栽。將組培瓶擰開瓶蓋但不敞開，使生長健壯、生根良好的組培苗煉苗1周左右，慢慢適應外界環(huán)境，提高移栽成活率。煉苗完成后，將組培苗小心取出，去除根部殘留的培養(yǎng)基，移栽至裝有無菌基質(100%蛭石)的營養(yǎng)缽中，置于溫度和濕度恒定的溫室中，基質中澆灌Hoagland營養(yǎng)液。3周統(tǒng)計移栽苗成活率。

2 結果與分析

2.1 植物生長調節(jié)劑對紅陽獼猴桃增殖的影響

將組培成活的無菌苗接種在含有不同濃度6-BA和GA3組合的繼代增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)10 d后腋芽開始萌生。30 d后平均增殖數(shù)如表2。 不同濃度的6-BA和GA3組合對紅陽獼猴桃組培增殖情況不同，平均增殖數(shù)為處理A9(3.76)>A1(3.00)=A5(3.00)>A8(2.94)>A4(2.77)>A6(2.59)>A7(2.31)>A3(2.14)>A2(2.07)。可知，6-BA與GA3濃度相等(同為0.3、0.4、0.5 mg/L)時，增殖效果好。

6-BA濃度為0.3 mg/L時，增大GA3濃度，平均增殖數(shù)減少；6-BA濃度為0.4 mg/L時，增大GA3濃度，平均增殖數(shù)先增加后減少；6-BA濃度為0.5 mg/L時，增大GA3濃度，平均增殖數(shù)增大。由此可見，6-BA濃度一定，GA3濃度與平均增殖數(shù)無線性關系。紅陽獼猴桃莖段增殖培養(yǎng)所用培養(yǎng)基的植物生長調節(jié)劑配方以MS+0.5 mg/L GA3+0.5 mg/L 6-BA為佳。

表2 紅陽獼猴桃在9種增殖培養(yǎng)基上的增殖數(shù)

2.2 不同濃度IBA對接種后生根的影響

如表3，IBA對獼猴桃組培苗的生根作用明顯。平均生根數(shù)：處理B1(1/2 MS+0.3 mg/L IBA，8.81條)<處理B2(1/2MS+0.4 mg/L IBA，10.41條)<處理B3(1/2 MS+0.5 mg/L IBA，10.61條)<處理B5(1/2MS+0.7 mg/L IBA，11.25條)<處理B4(1/2MS+0.6 mg/L IBA，12.00條)。IBA濃度增大，有利于根的分化，生根數(shù)增多。但IBA濃度達到0.7 mg/L時，生根數(shù)減少。

生根率：處理B2(1/2 MS+0.4 mg/L IBA，63.33%)<處理B5(1/2MS+0.7mg/L IBA，66.67%)<處理B4(1/2MS+0.6mg/L IBA，68.33%)<處理B3(1/2MS+0.5mg/L IBA，78.33%)<處理B1(1/2MS+0.3 mg/L IBA，86.67%)。表明IBA濃度與生根率無線性關系。IBA濃度為0.3 mg/L時，平均生根數(shù)較低，但生根率最高；IBA濃度0.4 mg/L和0.5 mg/L的平均生根數(shù)相近，生根率63.33%、78.33%；IBA濃度0.6 mg/L和0.7 mg/L時，生根率分別為68.33%和66.67%，平均生根數(shù)分別為12.00和11.25。隨著IBA濃度的升高，雖然生根數(shù)有所增加，但生根率開始下降，表明獼猴桃對IBA較敏感，濃度超過0.5 mg/L生根率開始降低。綜合考慮獼猴桃的生根數(shù)和生根率，最適的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L IBA。

表3 不同濃度IBA對紅陽獼猴桃組培苗生根的影響

2.3 組培苗的移栽

將在生根培養(yǎng)基中生根良好的幼苗經1周左右的開蓋煉苗后，移栽至100%蛭石基質中，通過澆灌營養(yǎng)液，提供幼苗生長所需的養(yǎng)分，同時保證合適的溫度和濕度，幼苗的成活率可達95%以上，長勢良好，葉片鮮綠(圖1)。

圖1 移栽60 d的獼猴桃幼苗

3 小結與討論

不同的獼猴桃品種所需的組織培養(yǎng)條件不同，培養(yǎng)基中植物生長調節(jié)劑不同配比、培養(yǎng)環(huán)境對于外植體的增殖和根分化發(fā)育等都有重要影響[8]。對紅陽獼猴桃組培增殖和生根的研究表明，6-BA與GA3濃度相等時增殖效果好。當6-BA濃度一定時，GA3濃度與平均增殖數(shù)并未表現(xiàn)出線性關系。當6-BA和GA3各為0.5 mg/L時，增殖效果顯著優(yōu)于其它處理，平均增殖數(shù)最大。不同IBA濃度對健壯叢生苗生根培養(yǎng)的影響為：IBA濃度在(0.3～0.6 mg/L)范圍內，濃度升高，平均生根數(shù)隨之增加，但生根率逐漸降低。在0.6 mg/L IBA濃度下平均生根數(shù)最多，但生根率較低；0.5 mg/L IBA濃度下，生根數(shù)較多，生根率也較高，莖基部愈傷組織最小，根較長。所以紅陽獼猴桃適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.5 mg/L IBA。

通過正交試驗和單因素試驗獲得了紅陽獼猴桃增殖和生根培養(yǎng)的最優(yōu)植物生長調節(jié)劑種類和配比濃度，可為紅陽獼猴桃組培苗的增殖，提供技術支持。