慢性丙型肝炎患者肝纖維化程度與TLR2、TLR4 mRNA的關系

賈國昌 劉春江 劉東坡 柯近 郭敬超

肝纖維化是慢性肝病向肝硬化發展的關鍵階段，因而對反映慢性丙型肝炎(CHC)患者肝纖維程度相關指標的研究成為臨床熱點話題[1-2]。Toll樣受體(TLR)是固有免疫模式識別受體的重要組成部分，目前被認為參與人體組織纖維病變的過程[3-4]。本研究通過對Toll樣受體2(TLR2)、Toll樣受體4(TLR4)進行觀察，探討其與CHC患者肝纖維化程度的關系，現作以下表述。

資料與方法

一、基礎資料

對2019年1月到2019年12月因慢性HCV感染來舞鋼市人民醫院接受治療的185例患者進行選擇納入試驗，收錄進CHC組，再收集相同時期來醫院進行體格檢查的185名健康志愿者來做對照試驗，收錄進對照組。兩組中的CHC組存在男性患者104例，女性患者81例；年齡位于41～76歲，平均年齡(52.15±4.67)歲；體質量指數(BMI)19～26 kg/m2，平均值為(22.47±2.05)kg/m2；患病年數1～7年，平均年數(3.86±0.74)年。兩組中的對照組包括男性96名，女性89名；年齡位于42～75歲，平均年齡(51.89±4.74)歲；BMI 18～26 kg/m2，平均值為(22.39±1.96)kg/m2。對照不同組別病例的人口特征及入院相關信息，無明顯差異(P>0.05)，可比度良好，本研究在倫理審核后方通知患者和志愿者進行相關操作。

二、納入與排除標準

納入標準：①根據《丙型肝炎防治指南(2015更新版)》[5]有關標準，CHC患者經相關檢查被確診，且均合并不同程度肝纖維化；②41～76歲；③患者和家屬知曉研究目的、方法并簽字同意。

排除標準：①由于甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒等非HCV的其他慢性肝炎病毒而引起的肝纖維化；②曾經有肝移植史或肝臟相關手術史；③已患有惡性腫瘤，且預計死亡時間在1年內；④心臟、腦血管、腎臟等重要臟器組織發生異常或曾經因為血液系統疾病入院。

三、研究方法

(一)血液采集 在所有患者(或志愿者)入院時即對其空腹靜脈血進行采集，收集5 mL血液后以2 000 r/min速度離心后進行細胞培養，采取實時熒光定量法(PCR)測量TLR2轉錄物(mRNA)、TLR4 mRNA表達，TLR2、TLR4的基因mRNA相對含量以目的基因TLR2、TLR4產物與內參基因β-action產物的條帶灰度值之比表示。

(二)肝纖維化程度分級 所有CHC患者均在MRI掃描后通過穿刺進行檢查，找出患者右邊一側的腋前到鎖骨中線之間肝臟切面較大的位置來刺入并抽取樣本，把抽取得到的樣本通過甲醛進行固定，采用石蠟將其進行包埋處理。按照Scheuer法[6]將肝纖維化分成F1(匯管區纖維化擴增，但只局限于竇周及小葉內)、F2(匯管區周圍纖維化，有間隔形成，但小葉結構仍然完整)、F3(肝小葉結構被破壞，大量纖維間隔形成，但無肝硬化)、F4四期(早期肝硬化)；按照CHC患者肝纖維化不同分期將其分別納入F1組、F2組、F3組、F4組。

(三)觀察指標：①對兩組TLR2 mRNA、TLR4 mRNA檢測結果進行比較；②對不同肝纖維化程度CHC患者TLR2 mRNA、TLR4 mRNA檢測結果進行比較；③通過Spearman系數分析肝纖維化程度分級F1、F2、F3、F4與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平的相關性。

四、統計學分析

結 果

一、兩組TLR2 mRNA、TLR4 mRNA檢測結果對照

CHC組TLR2mRNA、TLR4mRNA水平顯著高于對照組，有顯著差異(P<0.05)。見表1。

表1 兩組TLR2 mRNA、TLR4 mRNA檢測結果對照(±s)

二、不同肝纖維化程度CHC患者TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達情況比較

經肝纖維化分級發現185例患者中有35例為F1，63例為F2，58例為F3，29例為F4，分別將其納入納入F1組、F2組、F3組、F4組；比較CHC患者不同纖維化程度TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平F1組

表2 不同肝纖維化程度CHC患者TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達情況比較(±s)

三、肝纖維化程度與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達Spearman系數分析

經相關性分析，CHC患者肝纖維化程度分級F1、F2、F3、F4與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達呈正相關(P<0.05)。見表3。

表3 肝纖維化程度與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達Spearman系數分析

討 論

本研究結果顯示，CHC組TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平顯著高于對照組，提示TLR2、TLR4在CHC患者體內已呈現異常表達。TLR胞內區結構域的氨基酸序列缺失或突變會中斷信號繼續傳導，從而影響機體免疫系統，而TLR2、TLR4是TLR家族中較為活躍的成員，通常分布于細胞膜，從而識別多種病原體的表面結構[7-10]。HCV感染患者細胞基質后，分布于其中的TLR2、TLR4結合受體大量增加，激活髓樣分化因子依賴性信號轉導通路，使得直接或間接的抗病毒細胞因子大量生成，誘導機體天然免疫應答[11]。

比較CHC患者不同纖維化程度TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平F1組

經相關性分析，CHC患者肝纖維化程度分級F1、F2、F3、F4與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達呈正相關，提示TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平與CHC患者肝纖維化有明顯相關性。TLR2、TLR4都能和HCV蛋白進行反應使得其往更深層傳導的過程受到阻礙，由此使得其介導的獲得性免疫反應受到抑制，同時在此過程中調節了炎性因子的分泌使得肝纖維化不斷進展[15]。

綜上，CHC患者肝纖維化程度與TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達呈明顯正相關，臨床醫師在對其肝纖維化程度進行評估時可將其作為參考指標，及時干預，以減緩肝纖維化向肝硬化的進展。