軟棗獼猴桃多糖對小鼠免疫系統的影響

劉怡菲

(遼寧省林業科學研究院，遼寧 沈陽 110032)

軟棗獼猴桃Actinidiaarguta屬獼猴桃科，是大型落葉藤本植物。軟棗獼猴桃含有多種功能性成分，如黃酮、多糖、多酚和花青素等，是富含優質營養物質的食療果實[1-3]。同時軟棗獼猴桃具有豐富的藥用價值，其活性成分能夠強身健體[4-6]。多糖，廣泛存在自然界，是具有重要生理功能的天然大分子物質，軟棗獼猴桃多糖逐漸受到消費者青睞[7-8]。本研究以軟棗獼猴桃多糖為對象,通過對小鼠進行灌胃軟棗獼猴桃多糖，分析小鼠外周血中總T細胞、總B細胞、輔助T細胞、毒性T細胞和NK細胞變化情況，為軟棗獼猴桃多糖對小鼠免疫系統影響的進一步研究提供理論基礎及科學指導。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為購于遼寧長生生物技術有限公司的6周齡雌性小鼠，共20只，將小鼠隨機分為試驗組和對照組，對照組即健康小鼠，試驗組即軟棗獼猴桃多糖灌胃處理小鼠。試驗組和對照組小鼠均飼養于無菌動物房中，動物房中設置12 h光/暗環境交替處理，自由飲水，汲食。

軟棗獼猴桃多糖制備：參照王美月等[9]方法，采取超聲輔助乙醇提取法制備軟棗獼猴桃多糖。取軟棗獼猴桃粉末5 g，超聲提取一定時間，待提取液回收濃縮至原體積的1/10時，加10倍體積的乙醇，靜置12 h，離心，干燥，取適量熱水超聲溶解，100 mL容量瓶定容，取上清液1.0 mL，干燥后提取多糖，反復多次重復上述步驟制備多糖。

1.2 試驗方法

1.2.1 軟棗獼猴桃多糖灌胃處理

軟棗獼猴桃多糖處理組：每只小鼠灌胃200 μL制備好的軟棗獼猴桃多糖(4 mg·mL-1)；對照組：每只小鼠灌胃200 μL無菌水。兩組小鼠每日灌胃1次，連續灌胃7 d。

1.2.2 外周血收集和免疫細胞分離

采用面靜脈采血法收集小鼠外周血，采血時間分別為0、7、14和28 d。外周血采集后用紅細胞裂解液裂解紅細胞，PBS磷酸鹽緩沖液清洗2次，收集淋巴細胞。用流式細胞儀進行檢測，用FlowJo軟件進行結果分析。

2 結果與分析

2.1 軟棗獼猴桃多糖灌胃處理對總T細胞和總B細胞的效應

從圖1可以看出，軟棗獼猴桃多糖灌胃處理7天后，試驗組總T細胞比例與對照組沒有明顯差異。然而，第14天檢測發現，外周血中總T細胞比例明顯上升，此時試驗組總T細胞比例為55.01%±3.17%，對照組為45.23%±0.21%，兩者差異顯著(P<0.05)。第21天，試驗組小鼠外周血中總T細胞含量降低至49.15%±1.26%，與對照組46.23%±0.77%沒有顯著差異(P>0.05)。因此，軟棗獼猴桃多糖灌胃處理對小鼠外周血中總T細胞比例有短暫的促進作用。

軟棗獼猴桃多糖灌胃處理7 d后，試驗組外周血中總B細胞比例明顯下降，試驗組總B細胞比例為18.77%±2.13%，對照組為27.81%±0.15%，兩者差異顯著 (P<0.05)。第14天檢測發現，試驗組小鼠外周血中總B細胞含量降低至14.86%±1.25%，與對照組31.23%±0.73%沒有顯著差異(P>0.05)。因此，軟棗獼猴桃多糖處理對小鼠外周血中B細胞比例有著長效的抑制作用。

圖1 灌胃處理對小鼠外周血中總T細胞和總B細胞的效應

2.2 軟棗獼猴桃多糖灌胃處理對輔助T細胞和毒性T細胞的效應

從圖2可以看出，軟棗獼猴桃多糖灌胃處理7 d后，試驗組外周血中輔助T細胞比例明顯上升，試驗組總T細胞比例31.022%±1.24%，對照組26.25%±1.25%，兩者差異顯著(P<0.05)。14 d時，試驗組小鼠外周血中輔助T細胞含量升至42.88%±1.32%，與對照組31.25%±0.35%差異不顯著(P>0.05)。因此，軟棗獼猴桃多糖灌胃處理對小鼠外周血中輔助T細胞比例有短暫的促進作用。

圖2 灌胃處理對小鼠外周血中輔助T細胞和毒性T細胞的效應

軟棗獼猴桃多糖灌胃處理7 d后，試驗組毒性T細胞比例為12.13%±0.56%，健康對照組為9.56%±0.21%，兩者差異顯著 (P<0.05)。14 d，試驗組毒性T細胞含量升高至14.11%±0.28%，與對照組13.56%±0.13%無顯著差異 (P>0.05)。因此，軟棗獼猴桃多糖處理對小鼠外周血中毒性T細胞比例有長效的抑制作用。

2.3 軟棗獼猴桃多糖灌胃處理對NK細胞的效應

軟棗獼猴桃多糖灌胃處理7 d后，試驗組外周血中NK細胞比例有所上升，試驗組毒性T細胞比例為26.32%±0.23%，對照組為23.95%±0.17%，兩者差異不顯著(P>0.05)。14 d試驗組小鼠外周血中NK細胞含量升高至29.56%±0.48%，與對照組18.98%± 0.46%差異顯著(P<0.05)。因此，軟棗獼猴桃多糖處理對小鼠外周血中NK細胞的比例有著一個延遲且瞬時的促進效應。

圖3 灌胃處理對小鼠外周血中NK細胞的效應

3 結 論

本研究結果顯示軟棗獼猴桃多糖對小鼠外周血中不同類型免疫細胞有顯著的差異效應。軟棗獼猴桃多糖灌胃處理之后T細胞的比例逐漸升高然后下降至接近未處理組水平，然而B細胞的比例劇烈下降而后緩慢恢復。軟棗獼猴桃多糖連續灌胃處理7天后，小鼠外周血中B細胞含量降低，外周血中總T細胞的比例在軟棗獼猴桃多糖灌胃處理1周后明顯增加，這表明軟棗獼猴桃多糖對T細胞的增殖分化有著瞬時的促進作用。軟棗獼猴桃多糖刺激毒性T細胞和輔助T細胞的合成，因此推測軟棗獼猴桃多糖可能有利于機體免疫系統功能的提升。