廣西德保黃精炮制前后的液相圖譜變化研究

趙秋華 黃元河 潘喬丹 陸海峰

【摘 要】 目的：比較分析黃精炮制前后的液相圖譜變化。方法：以薯蕷皂苷元為考察指標，采用HPLC法分析比較，色譜條件為Eclipse XDB-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-水，梯度洗脫，波長200 nm，柱溫30 ℃。結果：廣西德保黃精炮制前后均有薯蕷皂苷元，但是炮制后薯蕷皂苷元含量有所下降，液相圖譜炮制前后有顯著差異，黃精炮制后產生新的色譜峰。結論：HPLC建立的黃精液相圖譜穩定性、重復性較好，為黃精的質量標準研究提供參考依據。

【關鍵詞】 黃精;炮制;高效液相色譜;薯蕷皂苷元

【中圖分類號】R284.1 ? 【文獻標志碼】 A ? ?【文章編號】1007-8517（2021）12-0039-03

Abstract：Objective To compare and analysis The changes of liquid chromatogram of Rhizoma Polygonati before and after processing. Methods Taking diosgenin as the index，HPLC was used to analyze and compare，The chromatographic conditions were eclipse XDB-C18 column （150 mm × 4.6 mm，5μm），mobile phase was Acetonitrile-water，gradient elution，the wavelength was 200 nm，and the column temperature was 30 ℃.Results The content of diosgenin was determined by HPLC. There were diosgenin before and after processing，but the content of diosgenin decreased after processing. There were significant differences in HPLC chromatogram before and after processing，and new chromatographic peaks appeared after processing Rhizoma Polygonati.Conclusion The results showed that the HPLC chromatogram of semen luteum was stable and reproducible，which could provide reference for the quality standard research of Rhizoma Polygonati.

Keywords：Rhizoma Polygonati; Processing; High Performance Liquid Chromatography; Diosgenin

黃精為百合科植物滇黃精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.黃精Polygonatum sibiricum Red.或多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖。按形狀不同，習稱“大黃精”“雞頭黃精”“姜形黃精”，其性平、味甘，具有補氣養陰、健脾、潤肺、益腎的功效[1]。近年來有關黃精化學成分研究報道日趨增多，至今已確定其中主要含有多糖、低聚糖、皂苷、氨基酸等活性成分，其中薯蕷皂苷是黃精屬植物主要成分之一[2]。現代藥理研究表明，黃精具有抗氧化和抗衰老、改善學習記憶、降血糖、抗動脈粥樣硬化、抗菌抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[3]。蘇仕林[4]對德保黃精進行植物學研究，發現由于山地開發，重采輕護，黃精資源銳減，而且生產周期長，產量非常有限。本研究通過對比德保黃精炮制后的液相圖譜變化分析，以期為德保黃精藥材質量標準和進一步開發研究奠定基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-20A高效液相色譜儀，Eclipse XDB-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5μm），sartorius CPA64分析天平，HC-5002S數控型臺式超聲波清洗機，超純水機。

1.2 材料 黃精藥材（購于靖西端午藥市，采自德保縣），經右江民族醫學院基礎醫學院黃元河副教授鑒定為百合科植物黃精的根莖。黃酒（紹興女兒紅釀酒有限公司，酒精度%vol：14.0），薯蕷皂苷元（111539-200001），購于中國食品藥品檢定研究所。色譜級乙腈（MACKLIN），色譜級甲醇（TEDIA），其余試劑為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

2.1.1 色譜條件 島津LC-20A高效液相色譜儀，Eclipse XDB-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈和水為流動相，采用二元梯度洗脫（梯度洗脫程序見表1），流速1 mL/min，檢測波長200 nm，柱溫30 ℃，進樣量20 μL。

2.2 對照品溶液的制備 精確稱取薯蕷皂苷元適量，加甲醇溶解后配制成0.18 mg/mL的對照品溶液，0.22 μm微孔濾膜濾過，備用。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 生品黃精 將黃精除去雜質，洗凈，略潤，切厚片，干燥，得生品黃精。將黃精藥材粉碎成粗粉，精確稱取黃精粉末2 g，加入70%乙醇40 mL，超聲提取2次，每次30 min，抽濾，合并濾液，旋干，浸膏加10 mL甲醇定容，放置過夜，0.22 μm微孔濾膜濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.3.2 酒黃精 將生品黃精，加入黃酒燜潤（每100 g黃精，用黃酒20 g）， 高壓鍋蒸制2 h，取出稍晾，干燥。將酒黃精粉碎成粗粉，精確稱取黃精粉末2 g，加入70%乙醇40 mL，超聲提取2次，每次30 min，抽濾，合并濾液，旋干，浸膏加10 mL甲醇定容，放置過夜，0.22 μm微孔濾膜濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.4 方法學考察

2.4.1 精密度試驗 精密吸取薯蕷皂苷元對照品10 μL，按照2.1.1色譜條件，連續進樣5次進行測定，測得峰面積RSD為0.46%，表明儀器精密度良好。

2.4.2 重復性試驗 取生品黃精5份，制備成供試品溶液，按照2.1.1色譜條件，重復進行測定，計算RSD值，測得峰面積RSD為1.85%，表明該方法重復性良好。

2.4.3 穩定性試驗 取生品黃精藥材制備成供試品溶液，按照2.1.1色譜條件，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h進行測定，測得峰面積RSD為1.74%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.5 結果 將德保黃精樣品分別按2.3方法制成供試品溶液，按色譜條件測定。通過色譜圖結果分析比較，生品黃精檢測出19個色譜峰，其中3號為薯蕷皂苷元;酒黃精檢測出20個色譜峰，其中8號為薯蕷皂苷元。通過色譜圖綜合對比（色譜圖1 為薯蕷皂苷元標準品，在條件探索中發現其在20 min左右出峰，后面無色譜峰，故保留時間設置為30 min，樣品保留時間設置為65 min），生品黃精及酒黃精均含有薯蕷皂苷元，但是炮制后薯蕷皂苷元含量下降，且酒黃精產生了新的色譜峰，生品黃精有的色譜峰在酒黃精中也未檢測到。如圖1所示，生品黃精的7、13、16、17號峰在酒黃精中未檢測到，生品黃精的3、11號峰的峰面積明顯變小;另外，酒黃精中產生2、4、5、6、7號新的色譜峰。由實驗結果可推斷德保黃精炮制前后，化學成分發生了變化，有待進一步研究，以確定消失或新產生的是何化學成分。

3 討論

3.1 黃精的炮制 黃精生用刺激咽喉，接觸過生黃精或其汁液的皮膚會產生瘙癢感，故須經過炮制后才可用于臨床[5]。有文獻報道高壓蒸制酒黃精的外觀色澤、質地、氣味、口感等性狀與常壓蒸制酒黃精無差異，可以達到傳統蒸制的要求，而且高壓蒸制酒黃精技術可顯著節省炮制時間，有效提高生產效率[6]，因此本次實驗采取高壓蒸制的方法。通過對比黃精炮制前后色譜圖，推斷黃精炮制后原有的一些色譜峰消失與降低刺激性相關。

3.2 黃精的液相圖譜變化 黃精藥材在廣西德保以野生為主，采挖后大多泡酒服用。薯蕷皂苷元藥理作用明顯，具有抗腫瘤、抗心血管系統及雌激素樣作用，是合成甾體激素類藥物的前體[7]，被認為是黃精發揮作用的真正有效成分[8]。通過對比生品黃精與酒黃精色譜圖，炮制后薯蕷皂苷元含量下降。有研究認為[9] ，薯蕷皂苷元是其它許多皂苷元的前體，而通過炮制是否將使其轉化為其它皂苷元而使炮制品中薯蕷皂苷元含量下降？ 本實驗結果發現，此推斷可能性較大，黃精炮制后在降低刺激性副作用的同時，能增強藥物補脾潤肺、益腎的作用。黃精炮制后藥效增強是否還與黃精中其它成分的含量變化有關，則有待后續研究確定。

3.3 黃精的質量評價 在本實驗中，對比等度洗脫和梯度洗脫的色譜圖，黃精炮制后黃精的色譜峰有變化，表明薯蕷皂苷元含量并不能作為衡量黃精質量的唯一標準，黃精中尚有多糖、人參皂苷等多種活性成分。黨艷妮等[10]通過中藥網絡藥理學數據庫和分析平臺，發現黃精中已鑒定的39個化合物，其中18個具有良好的藥物代謝性質的化合物，黃精可通過多成分、多靶點及多通絡的作用機制發揮其抗腫瘤活性。因此對德保黃精進行化學成分檢測和多成分綜合分析，可為德保黃精藥材質量標準和進一步開發研究奠定基礎。

參考文獻

[1]中國藥典國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫藥出版社，2015：306-307.

[2]鐘凌云，周曄，龔千鋒.炮制對黃精薯蕷皂苷元的影響研究[J].中華中醫藥學刊，2009，27（3）：538-540.

[3]姜程曦，張鐵軍，陳常青，等.黃精的研究進展及其質量標志物的預測分析[J].中草藥，2017，48（1）：1-16.

[4]蘇仕林，馬博，黃珂.廣西百色德保黃精的民族植物學研究[J].安徽農學通報，2012，18（1）：56-57，83.

[5]孫婷婷，張紅，李曄，等.陜西產黃精不同炮制品中薯蕷皂苷元含量含量分析[J].中國藥房，2017，20（1）：158-160.

[6]王永祿，王麗瑤，朱欣佚，等.常壓蒸制和高壓蒸制對酒黃精化學成分的影響研究[J].中國生化藥物雜志，2014，34（8）：173-175.

[7]羅靜，沈昱翔，周濃，等. HPLC 法測定14 個不同產地滇重樓中薯蕷皂苷元的含量[J].中國藥房，2015，26（21）：2965-2967.

[8]孫隆儒，王素賢，李銑.中藥黃精化學成分的研究（I）[J].中草藥，1997，28（增刊）：47.

[9]張潔，馬百平，楊云，等.黃精屬植物甾體皂苷類成分及藥理活性研究進展[J].中國藥學雜志，2006，41（5）：330-332.

[10]黨艷妮，黃壯壯，蘇英英，等.基于網絡藥理學的黃精抗腫瘤成分篩選研究[J].藥物評價研究，2020（3）：468-472.

（收稿日期：2020-11-15 編輯：程鵬飛）