不同養殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞生長性能、腸道形態與盲腸微生物區系的影響

韋曉芳 沈水寶 吳克寧 李修宇 袁汝喜 雷麗莉 張淑芳 章岳軍

(廣西大學動物科學技術學院，南寧 530004)

在我國雞的飼養方式主要分為平養和籠養2種。平養雞舍的飼養密度小，建筑面積大，投資相對較高，目前在我國一般肉雞才使用這種飼養方式。平養又可分為厚墊料地面平養、網上平養和混合地面飼養。其中厚墊料地面平養為直接在土地面或水泥地面上鋪設厚墊料，雞只生活在墊料上面，對設備要求簡單、投資少；但是飼養密度小，雞只接觸糞便，不利于疾病防治?；\養就是將雞飼養在用金屬絲焊成的籠子中,根據雞種、性別和日齡設計不同型號的雞籠?；\養主要優點：提高飼養密度、節省飼料、有利于雞群防疫。其缺點為：設備投資相對大、長期籠養可能會導致雞缺乏運動、受光照不均。已有相關報道表明，不同的養殖方式對雞的生產性能和胃腸道發育產生不同的影響[1-10]。丁酸梭菌為厭氧型革蘭氏陽性菌，在自然環境及動物體內均有分布，可產生丁酸、乳酸和乙酸等。近年來，丁酸梭菌作為益生菌已經廣泛應用于肉雞生產中，具有提高肉質、日增重以及降低料重比等作用，除此之外還起到改善腸道形態、促進腸道有益菌的增殖、抑制病原菌的繁殖、提升腸道對營養物質的消化吸收能力[11-17]。目前針對不同養殖階段于不同養殖方式下，在飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞腸道形態發育以及腸道菌群變化的影響鮮有研究。因此，本試驗針對在不同的養殖階段于不同養殖方式下，在飼糧中添加丁酸梭菌，觀察其對廣西黃雞在生長性能上造成的差異以及對腸道形態、盲腸微生物區系的影響，以期為今后飼糧中添加益生菌及選擇最佳養殖模式以實現生產效益最大化提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

丁酸梭菌來源于湖北某微生物技術有限公司，添加量均為廠家指導劑量，即500 g/t，并于飼糧制粒過程中加入，成品料的活菌測量由北京科為博生物科技有限公司檢測，丁酸梭菌活菌數≥1×109CFU/g，制粒后活菌數≥2.88×105CFU/g，以上數據為實測值。

1.2 基礎飼糧

基礎飼糧依據NRC(1994)的營養需要配制，其組成及營養水平根據廣西黃雞的品種特性、飼養管理和營養需求進行調整。飼糧生產在廣西玉林新天地飼料有限公司進行，每批次生產約夠10 d的飼喂量，每批次生產過程中前后各舍棄10包，以防加工過程中混合不均或帶有其他批次雜質。每批次飼糧生產過程中隨機多次抽樣，檢測營養成分和飼糧活菌數。營養水平在廣西玉林新天地飼料有限公司化驗室檢測?；A飼糧組成及營養水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養水平(風干基礎)

1.3 試驗動物與試驗設計

試驗選取35日齡健康狀態良好的廣西黃雞3 300羽，隨機分為2組，每組5個重復，每個重復330羽。2個組分別為對照組(基礎飼糧)和試驗組(基礎飼糧+500 g/t丁酸梭菌)，分2個階段進行飼養試驗：第1階段35～49日齡，籠養方式；第2階段50～80日齡，轉換為地面散養方式。

1.4 飼養管理

試驗于2019年11月至2020年1月在廣西壯族自治區玉林市容縣黎村溫泉肉雞養殖基地進行。

籠養：籠底面積0.48 m2。飼養密度在試驗1～20 d為85只/m2，試驗21～35 d為51只/m2，試驗36～50 d為40只/m2，全自動水線，暖氣，24 h燈光(試驗1～20 d)，后期燈光時間逐漸減少。雞舍每棟左、右均為4層排列，每層12個雞籠。雞舍內共有8個排氣扇，前后各4個。雞舍均安裝溫濕度報警器，可以24 h監測環境。

散養：散養雞是跑山雞，無法計算散養密度。散養墊料為木屑，1個輪轉周期(30 d)更換1次(50 d后的雞是放在半山腰上活動，80 d后會輪轉至山頂區域直至出欄)，雞只養殖密度會隨著日齡增長而增長。雞棚全自動水線連接，1個雞棚有8個出口，每個出口活動區域內有5個以上的飲水點，雞棚內外均安裝投料設施。

試驗過程中全程人工喂料，并根據黃雞品種特性以及遵循養殖場的飼養管理。采取限量飼喂(通過限飼梯度飼養試驗得出最佳限飼量：35～49日齡平均日采食限飼量為52 g/d，50～80日齡平均日采食限飼量為62 g/d)，自動飲水但進行適量控制，防止欄舍濕度過高。第1階段單日投料量為1次，時間為08:00，舍內溫度從28 ℃逐漸降到26 ℃，濕度控制在60%～65%；第2階段單日投料量為2次，時間為08:00與15:00，籠養欄溫度控制在20～25 ℃，相對濕度在60%～70%。

1.5 指標測定與方法

1.5.1 飼糧營養含量測定

參照GB/T 6432—1994方法測定飼糧中粗蛋白質含量；參照GB/T 6434—1994方法測定飼糧中粗脂肪含量；參照GB/T 6434—2006方法測定飼糧中粗纖維含量；參照GB/T 6434—1992方法測定飼糧中粗灰分含量；參照GB/T 6434—1994方法測定飼糧中氨基酸含量；參照GB/T 6434—1992方法測定飼糧中水溶性氯化物含量；參照GB/T 6434—2002方法測定飼糧中鈣含量；參照GB/T 6434—2002方法測定飼糧中總磷含量。

1.5.2 生長性能測定

由于黃雞前期飼養采取限量飼喂，每次投喂2 h內投料量均會被完全采食，因此本試驗采食量的計算以投料量計算。

平均日采食量(ADFI)=總投料量/試驗天數；
平均日增重(ADG)=(末體重-
初體重)/試驗天數；
料重比(F/G)=試驗期內總采食量/
試驗期內總增重。

1.5.3 腸道形態測定

本試驗有3個采樣時間點，分別為試驗開始前(35日齡)、轉散養欄時(49日齡)、試驗結束時(80日齡)。采樣前空腹12 h，每個重復選取1羽體況健康并接近均重的雞只頸部放血處死。在未經擠壓的狀況下取每個腸段同一位置的十二指腸、空腸、回腸各1 cm左右，用生理鹽水輕輕沖洗后放入甲醛溶液中常溫保存，固定24 h以上后，取出固定瓶中腸道組織，常規石蠟切片制作，顯微鏡鏡檢，圖像在專業成像系統測量40倍視野下，測量隱窩深度、絨毛高度，計算絨毛高度/隱窩深度。

1.5.4 盲腸食糜16S rRNA測序

試驗結束前，禁食12 h，每個重復選取1羽，進行屠宰，收集盲腸食糜，放入無菌的2 mL離心管中，液氮速凍，送樣至生工生物工程(上海)股份有限公司委托測序，獲得有效數據，并對數據進行分析。

1.6 數據處理與分析

生長性能、腸道形態數據收集后使用WPS軟件匯總，用SPSS 22.0軟件進行t檢驗分析，數據均以平均值±標準誤表示，以P<0.05作為差異顯著的判定標準。

2 結 果

2.1 不同養殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞生長性能的影響

由表2、表3可知，35～49日齡廣西黃雞在籠養方式下，試驗組的初體重、末體重、平均日增重、料重比與對照組相比均無顯著差異(P>0.05)，但料重比有低于對照組、平均日增重有高于對照組的趨勢(P>0.05)；49日齡試驗組平均日增重比對照組高10.12%，料重比比對照組低9.40%。50～80日齡廣西黃雞在散養方式下，飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞生長性能造成的差異同樣不顯著(P>0.05)，但呈提高的趨勢；80日齡試驗組末體重比對照組高1.91%，平均日增重比對照組高5.04%，料重比比對照組低5.06%。

表2 籠養方式下飼糧中添加丁酸梭菌對35～49日齡廣西黃雞生長性能的影響

表3 散養模式下飼糧中添加丁酸梭菌對50～80日齡廣西黃雞生長性能的影響

2.2 不同養殖方式下飼糧添加丁酸梭菌對廣西黃雞腸道形態的影響

2.2.1 籠養方式下飼糧添加丁酸梭菌對廣西黃雞腸道形態的影響

由表4可知，49日齡時，與對照組相比，試驗組十二指腸、空腸、回腸的絨毛高度顯著提高(P<0.05)，分別提高24.21%、27.71%、28.54%；同時，試驗組空腸、回腸絨毛高度/隱窩深度分別比對照組提高22.76%、45.14%(P<0.05)，十二指腸的絨毛高度/隱窩深度有升高趨勢。

表4 籠養方式下飼糧添加丁酸梭菌對35～49日齡廣西黃雞腸道形態的影響

續表4項目 Items日齡 Days of age試驗組 Test group對照組 Control group空腸 356.04±0.096.04±0.09Jejunum496.31±0.55a5.14±0.18a回腸 355.08±0.115.08±0.11Ileum492.99±0.18a2.06±0.13b

2.2.2 散養方式下飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞腸道形態的影響

由表5可知，散養方式下，80日齡時試驗組十二指腸絨毛高度、絨毛高度/隱窩深度分別比對照組提高45.38%、37.40%(P<0.05)；空腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度分別比對照組提高22.49%、34.16%(P<0.05)；回腸絨毛高度/隱窩深度比對照組提高45.14%(P<0.05)。

表5 散養方式下飼糧中添加丁酸梭菌對50～80日齡廣西黃雞腸道形態的影響

2.3 不同養殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞盲腸食糜中微生物區系的影響

對廣西黃雞盲腸微生物區系在門水平上的分布(圖1、圖2)進行分析發現，在門水平上的優勢菌門為厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、變形菌門(Proteobacteria)。厚壁菌門在早期(35日齡)占據絕對的優勢，比例在80%以上；49日齡籠養時試驗組的厚壁菌門相對豐度顯著高于對照組(P<0.05)；隨著厚壁菌門相對豐度的降低，擬桿菌門所占比例對應增高，49日齡時對照組的擬桿菌門相對豐度顯著高于試驗組(P<0.05)。對比49日齡籠養，80日齡散養時試驗組的厚壁菌門相對豐度下降，但還是高于對照組(P>0.05)；2組的變形菌門和放線菌門(Actinobacteria)相對豐度均為上升趨勢(P>0.05)。

M35為35日齡籠養試驗組，M49LA為49日齡籠養試驗組，M80SA為80日齡散養試驗組。圖3同。The M35 was the 35-day-old caged-raising test group, the M49LA was the 49-day-old caged-raising test group, and the M80SA was the 80-day-old free-raising test group. The same as Fig.3。

M35為35日齡籠養對照組，M49LC為49日齡籠養對照組，M80SC為80日齡散養對照組。圖4同。

對35～80日齡廣西黃雞盲腸微生物區系在屬水平上的分布(圖3、圖4)進行分析發現，在屬水平上的優勢菌屬主要以擬桿菌屬(Bacteroides)、乳酸桿菌屬(Lactobacillus)、另枝菌屬(Alistipes)、梭菌屬(Clostridium)和瘤胃球菌屬(Ruminococcus)為主。除未分類(Unclassified)外，試驗組的擬桿菌屬相對豐度隨日齡增長而提高，逐漸變成第1優勢菌屬；試驗組另枝菌屬相對豐度在49日齡時顯著低于對照組(P<0.05)，而后呈現為下降趨勢；對照組則整體表現為先上升后下降趨勢。49日齡時試驗組梭菌屬相對豐度顯著高于對照組(P<0.05)，散養至80日齡時發現擬桿菌屬依舊是第1優勢菌屬。綜上所述，與對照組相比，35～49日齡籠養方式下飼糧中添加丁酸梭菌顯著降低了腸道內擬桿菌屬和另枝菌屬相對豐度(P<0.05)，顯著提高梭菌屬相對豐度(P<0.05)；與籠養方式對比，散養至80日齡瘤胃球菌屬相對豐度呈升高趨勢，試驗組顯著高于對照組(P<0.05)。

Unclassified：未分類；Bacteroides：擬桿菌屬；Lactobacillus：乳酸桿菌屬；Alistipes：另枝菌屬；Clostridium Ⅳ：梭菌屬Ⅳ；Ruminococcus 2：瘤胃球菌屬2；Faecalibacterium：糞桿菌屬；Subdoligranulum：罕見小球菌屬；Pseudoflavonifractor：假黃桿菌屬；Butyricicoccus：丁酸球菌屬；Sporobacter：孢桿菌屬；Clostridium ⅩⅣa：梭菌屬ⅩⅣa；Flavonifractor：黃桿菌屬；Acetanaerobacterium：厭氧醋菌屬；Intestinimonas：腸菌素屬；Clostridium ⅩⅧ：梭菌屬ⅩⅧ；Blautia：布勞特氏菌屬；Clostridium ⅩⅣb：梭菌屬ⅩⅣb；Oscillibacter：顫桿菌屬；Lachnospiracea_incertae_sedis：毛螺菌；Barnesiella：巴恩斯氏菌；Ruminococcus：瘤胃球菌屬；Prevotella：普氏菌屬；Coprococcus：糞球菌屬；Coprobacter：糞球菌屬。圖4同。The same as Fig.4.

圖4 對照組35～80日齡廣西黃雞盲腸微生物區系在屬水平上的分布

3 討 論

3.1 不同養殖方式飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞生長性能的影響

有關使用丁酸梭菌提高廣西黃雞生長性能的報道較多。在肉雞養殖中，部分試驗表明丁酸梭菌可以提高雞的生長性能[14]，杜云平等[12]分別在肉雞和種雞的飲水中添加1.5×109CFU/mL的丁酸梭菌，發現肉雞平均日增重提高4.62%，料重比下降了9.26%，并且可以很好地預防仔雞腸炎。在麻羽肉雞中添加0.2%丁酸梭菌,平均日增重提高8.34%，料重比降低6.49%[11]。但是也有研究發現，添加丁酸梭菌后對肉雞的平均日增重、料重比無顯著影響[15]，這與本研究結果相似，即在不同養殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌對不同日齡廣西黃雞的生長性能未產生顯著變化。這可能是與本試驗全程限飼有關，黃雞采食量不足，導致生長性能差異不顯著，但均有提高平均日增重以及降低料重比的趨勢。

3.2 不同養殖方式飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞腸道形態的影響

腸道是動物消化和吸收營養物質的重要場所，飼糧停留在腸道的時間和腸道的營養吸收對于飼糧消化率尤為重要。常用絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度評估腸道對營養的吸收能力。飼糧中添加丁酸梭菌會影響黃雞對飼糧中養分的利用率，農斯偉等[18]發現飼糧中添加丁酸梭菌能顯著提高雞各腸段的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度；徐晨希等[19]研究發現，丁酸梭菌顯著降低了肉雞十二指腸的隱窩深度，提高了絨毛高度/隱窩深度及絨毛高度；丁酸梭菌可以通過分泌代謝產物來增強腸道抗氧化酶活性，降低腸道上皮細胞可能引起的腸道損傷；同時能夠明顯修復因抗生素引起的腸道黏膜完整性損壞、絨毛破壞、上皮細胞腫脹脫落等癥狀[20-21]；本研究中，籠養方式下飼糧中添加丁酸梭菌可以提高35～49日齡廣西黃雞十二指腸、空腸、回腸的絨毛高度，降低隱窩深度，提高絨毛高度/隱窩深度。49日齡籠養時對比，80日齡散養時廣西黃雞的十二指腸、空腸、回腸腸絨毛高度均呈提高趨勢。從不同時期不同養殖模式來對比，籠養加散養的養殖式下，飼糧中添加丁酸梭菌可以促進黃雞腸道形態更好的發育。

3.3 不同養殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞盲腸微生物區系的影響

本研究發現，不同養殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌可以提高腸道內梭菌屬、瘤胃球菌屬的相對豐度，籠養轉散養后會促進瘤胃球菌屬相對豐度的提升。這可能是因為籠養初期飼喂丁酸梭菌飼糧，有部分丁酸梭菌定植在腸道內，促進了同類菌群的繁殖，而散養后雞會因采食某些粗纖維含量高的食物(可能是墊料或者是山上植物等)，導致腸道降解粗纖維的瘤胃球菌屬菌群提高[22]?；\養轉散養至80日齡，各組變形菌門和放線菌門相對豐度均為上升趨勢。這說明散養的環境可能更適合有益菌的繁殖。這與鄭青[23]研究結果相似，可能是散養后復雜的飼養環境影響腸道菌群的適應性，提高腸道菌群的相對豐度。因此，不同養殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌均可提高盲腸菌群的相對豐度，且籠養轉散養后，菌群的相對豐度可以得到進一步的提升。

4 結 論

① 籠養加散養的養殖方式下，飼糧中添加丁酸梭菌對不同日齡廣西黃雞的生長性能未產生顯著變化，但有提高平均日增重以及降低料重比的趨勢。

② 不同日齡按照籠養加散養的養殖方式，飼糧中添加丁酸梭菌可以促進黃雞腸道形態更好的發育。

③ 籠養加散養的養殖方式下，飼糧中添加丁酸梭菌均可提高盲腸主要菌群的相對豐度，且籠養轉散養后，盲腸菌群的相對豐度可以得到進一步的提高。