飼糧精氨酸水平對91～120日齡清遠麻雞生長性能、抗氧化能力、免疫功能和肉品質的影響

范秋麗 葉金玲 林楚曉 林廈菁 李 龍 鄺智祥 國春艷 鄧遠帆 蔣守群* 阮 棟*

(1.廣東省農業科學院動物科學研究所，畜禽育種國家重點實驗室，農業農村部華南動物營養與飼料重點實驗室，廣東省畜禽育種與營養研究重點實驗室，廣州 510640；2.廣東愛健康生物科技有限公司，廣州 511500；3.希杰(上海)商貿有限公司，上海 201107)

精氨酸是家禽生長的必需氨基酸，也是功能性氨基酸，在家禽尿素循環中由于缺少氨甲酰磷酸合成酶和鳥氨酸氨甲酰轉移酶而不能自身合成[1]。它是蛋白質合成的重要底物，也是許多功能性分子(如一氧化氮、肌酸、鳥氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、多胺和脯氨酸)的前體物質，參與很多重要的生理反應，對家禽生長發育起著重要的作用[2]。研究表明，精氨酸對家禽生長性能[3]、畜產品品質[4]、腸道發育與健康[5]、免疫[6]和抗氧化[7]功能都有改善作用。現代化肉雞生產中，精氨酸需要量主要取決于性別、年齡和其他變量，且不同家禽品種對精氨酸的需要量差異很大。黃羽肉雞是以我國地方品種雞為血緣培育的肉雞，按照生長速度可分為快速型、中速型和慢速型。目前關于精氨酸在慢速型黃羽肉雞上的需要量研究報道很少，且我國《雞飼養標準》(NYT 33—2004)中提出的肉用仔雞精氨酸需要量也未按生長速度區分[8]。清遠麻雞是小體型地方優質黃羽肉雞品種，生長速度較慢，飼養周期長，以皮膚金黃、皮爽肉滑、味鮮質優而享譽國內外。目前，有關清遠麻雞能蛋比(代謝能、粗蛋白質需要量)已有研究報道，而清遠麻雞氨基酸需要量的研究報道仍非常少。因此，本試驗以91～120日齡清遠麻雞為對象，研究了飼糧精氨酸水平對清遠麻雞生長性能、抗氧化能力、免疫功能、胴體性狀和肉品質的影響，為科學配制慢速型黃羽肉雞飼糧提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與試驗設計

精氨酸為L型，純度為98.5%。試驗選用1 050只初始體重為(1.352±0.016) kg的91日齡清遠麻雞母雞，采用完全隨機分組設計分為5個組，每組6個重復，每個重復35只。各組飼糧精氨酸水平分別為0.66%、0.78%、0.90%、1.02%、1.14%。試驗期30 d。

1.2 試驗飼糧

試驗采用玉米-豆粕型無抗生素的低精氨酸基礎飼糧，根據《黃羽肉雞營養需要量》(NY/T 3645—2020)和《中國飼料成分及營養價值表》(2018年第29版)配制[9]，基礎飼糧組成與營養水平見表1。各組分別添加0、0.12%、0.24%、0.36%、0.48%的精氨酸，使飼糧精氨酸水平分別為0.66%、0.78%、0.90%、1.02%、1.14%，其他營養水平均保持一致。配制好的試驗飼糧使用氨基酸分析儀(L-8900，Hitachi公司，日本)測定精氨酸實際含量分別為0.68%、0.79%、0.93%、1.04%、1.15%。試驗飼糧采用蒸汽調質的方式制粒，調質溫度為85～90 ℃，環模壓縮比為1∶12，粒徑為3.8 mm。

表1 基礎飼糧組成及營養水平(風干基礎)

1.3 飼養管理

試驗于2020年2月份在廣東愛健康生物科技有限公司清遠試驗場進行，試雞網上籠養(籠規格為長×寬×高=66 cm×39 cm×35 cm，3層設計，每籠5只雞)于封閉式雞舍，自由采食顆粒料和飲水，各組飼養管理和環境條件一致，按照常規操作程序和免疫流程進行飼養和免疫。每天08:00、14:00、20:00測定雞舍溫度和相對濕度。試驗期雞舍內平均溫度和相對濕度分別為16 ℃和50%。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生長性能

試驗結束前1天17:00斷料供水，次日08:00以重復為單位稱重，統計耗料量，計算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。每天觀察雞只健康狀況，一旦出現死雞及時稱量所在欄剩料量。

1.4.2 胴體性狀和肉品質

試驗結束時，每個重復選取接近重復平均重的2只雞，翅靜脈采血后頸部放血致死，去除羽毛、腳皮、趾殼和喙殼后稱重即為屠體重量，計算以活體重為基礎的屠宰率；完整剝離兩側無骨、無皮、無脂肪的胸肌，分離包括肌胃周圍的脂肪得到腹脂，胸肌和腹脂稱重，計算以屠體重為基礎的胸肌率和腹脂率。稱重后的左側胸肌用于測定剪切力和滴水損失，右側胸肌用于測定pH和肉色[亮度(L*)、紅度(a*)、黃度(b*)值]，各指標具體檢測方法參考范秋麗等[10]。

1.4.3 血漿、空腸黏膜抗氧化和免疫指標

翅靜脈采集全血4 mL于加有抗凝劑(肝素鈉)的采血管，1 500×g離心10 min后取上清即為血漿。取空腸中部5 cm腸段，剪開，并用磷酸鹽緩沖液將內容物沖洗干凈后平鋪于濾紙上，用載玻片刮取黏膜樣于1.5 mL無菌離心管，按照黏膜樣品重量(mg)∶生理鹽水(μL)=1∶9的比例勻漿，3 000×g離心10 min后取上清即為10%黏膜勻漿，二喹啉甲酸(bicinchoninic acid，BCA)蛋白定量試劑盒測定空腸黏膜總蛋白含量，試劑盒購買于賽默飛世爾科技(上海)有限公司。

抗氧化指標：總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量的測定均參考范秋麗等[11]的方法；5-硫代二硝基苯甲酸法測定谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，試劑盒購買于南京建成生物工程研究所。

免疫指標：雙抗夾心法測定免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、白細胞介素-2(IL-2)、白細胞介素-6(IL-6)含量，試劑盒購買于北京方程生物科技有限公司。

以上所有指標均在多功能酶標儀(SYNERGY H1，BioTek公司，美國)上測定，各指標測定過程和結果計算嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4.4 空腸形態

空腸形態測定參考聞治國等[12]方法：取空腸中部1 cm腸段于4%的多聚甲醛溶液固定7 d，取出固定后的樣品經修剪、脫水、包埋、切片、蘇木精-伊紅(HE)染色以及封片等步驟，應用CaseViewer 2.2圖像掃描軟件選取目的區域進行50倍成像，成像時盡量讓組織充滿整個視野，保證每張照片的背景光一致，成像完成后使用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件，統一以微米(μm)作為標準單位，每張切片選取5根完整腸絨毛測量絨毛高度和其對應位置的隱窩深度，計算絨毛高度/隱窩深度。

3.3 突出學生魅力風格 主動發揮學生的創新意識與想象力，個性特征與主題相融，增添民族特色的舞蹈元素，充分利用身體動作的不同層次、不同形式及不同軌跡來表現動作連接的過程美；利用器械動作是身體的延伸，根據各項器械的典型特點，增加器械運用的動作元素，創編不同身體部分，不同方向的器械動作運用來展現動作連接的多維空間效果。鼓勵學生在進行動作時敢于展現自己，淋漓盡致的表現在成套動作的每一細膩環節之中，有助于樹立學生自信心，增強學生的表現欲望。

1.4.5 空腸相關基因表達

剪取0.1 g空腸樣品于1.5 mL無RNase離心管中，加入1 mL Trizol試劑(上海Sigma-Aldrich公司)提取總RNA，具體提取方法參照試劑盒說明書。提取的RNA依照試劑盒(TaKaRa，日本)說明書取用1 μg進行cDNA反轉錄。使用Primer Premier 5.0軟件并按照GenBank中雞的基因序列設計試驗所需引物(表2)。實時熒光定量PCR(RT-qPCR)反應體系為20 μL：2 μL cDNA(1∶9)，10 μL SYBR Green 2×Mix，1 μL(100 nmol/L)上游引物工作液，1 μL(100 nmol/L)下游引物工作液，6 μL ddH2O。反應條件為：95 ℃預變性3 min；95 ℃變性10 s，退火30 s，72 ℃延伸30 s，40個循環。內參基因為β-肌動蛋白(β-actin)，采用2-ΔΔCt法計算目的基因表達量。

表2 實時熒光定量PCR引物序列

1.5 數據統計分析

試驗數據采用SAS 9.3軟件中GLM程序進行方差分析，在差異顯著的基礎上采用Duncan氏法進行多重比較以及線性(linear)和二次曲線(quadratic)趨勢分析，試驗數據均以平均值和均值標準誤(SEM)表示，P<0.05為差異顯著，0.05≤P<0.10為有顯著趨勢。對評價需要量的敏感指標應用REG程序進行二次曲線回歸分析[13]：

Y=A×X2+B×X+C；
X0=-B/(2×A)。

式中：Y代表對應指標測定值；X代表飼糧精氨酸水平；A和B分別為回歸方程二次項和一次項的系數；C為方程的常數項；X0為飼糧精氨酸適宜水平。

2 結 果

2.1 飼糧精氨酸水平對91～120日齡清遠麻雞生長性能的影響

由表3可知，飼糧精氨酸水平對平均日采食量、平均日增重、料重比和死亡率均無顯著影響(P>0.05)。

表3 飼糧精氨酸水平對91～120日齡清遠麻雞生長性能的影響

2.2 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞血漿和空腸黏膜抗氧化指標的影響

由表4可知，血漿T-SOD和GSH-Px活性隨飼糧精氨酸水平的升高呈線性和二次曲線增加(P<0.05)，血漿T-AOC隨飼糧精氨酸水平的升高呈二次曲線增加(P<0.05)，血漿MDA含量隨飼糧精氨酸水平的升高呈線性和二次曲線降低(P<0.05)。此外，空腸黏膜T-SOD活性隨飼糧精氨酸水平的升高呈線性和二次曲線增加(P<0.05)。

表4 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞血漿和空腸黏膜抗氧化指標的影響

2.3 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞血漿和空腸黏膜免疫指標的影響

由表5可知，飼糧精氨酸水平對血漿IgA和IgM含量無顯著影響(P>0.05)，對空腸黏膜SIgA、IL-2和IL-6含量無顯著影響(P>0.05)。隨著飼糧精氨酸水平的升高，血漿IgG含量有升高的趨勢(P=0.083)。

表5 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞血漿和空腸黏膜免疫指標的影響

2.4 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞空腸形態的影響

由表6可知，飼糧精氨酸水平對空腸絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度均無顯著影響(P>0.05)。

表6 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞空腸形態的影響

2.5 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞空腸相關基因表達的影響

由表7可知，空腸TLR4和MYD88 mRNA表達量隨飼糧精氨酸水平的升高呈二次曲線降低(P<0.05)；空腸GPX1 mRNA表達量隨飼糧精氨酸水平的升高呈線性和二次曲線升高(P<0.05)；空腸ZO-1 mRNA表達量隨飼糧精氨酸水平的升高呈二次曲線升高(P<0.05)。

表7 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞空腸相關基因表達的影響

2.6 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞胴體性狀和肉品質的影響

由表8可知，屠宰率隨飼糧精氨酸水平的升高呈線性和二次曲線增加(P<0.05)，與0.66%精氨酸水平組相比，0.90%精氨酸水平組屠宰率顯著升高了1.71%(P<0.05)，1.14%精氨酸水平組屠宰率顯著降低了1.89%(P<0.05)。此外，隨著飼糧精氨酸水平的升高,胸肌滴水損失有降低趨勢(P=0.062)。飼糧精氨酸水平對剪切力、pH 和肉色均無顯著影響(P>0.05)。

表8 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞胴體性狀和肉品質的影響

2.7 二次曲線回歸分析估測飼糧精氨酸適宜水平

由表9可知，通過二次曲線回歸方程估測，以平均日增重和料重比為效應指標，91～120日齡清遠麻雞飼糧精氨酸適宜水平分別為0.88%和0.94%。

表9 二次曲線回歸模型估測飼糧精氨酸適宜水平

3 討 論

3.1 飼糧精氨酸水平對91～120日齡清遠麻雞生長性能的影響

研究表明，精氨酸可通過促進肌肉蛋白質的合成和多胺的產生影響肉雞生長性能[1]。陳西風等[14]研究發現，飼糧0.40%～1.20%精氨酸水平可提高21～42日齡愛拔益加(AA)肉雞平均日增重，且平均日增重隨精氨酸水平的增加而增加，飼糧0.40%和0.80%的精氨酸水平可降低料重比。郭祎瑋[15]研究發現，飼糧0.97%～1.05%精氨酸水平可影響1～42日齡AA肉雞平均日增重和料重比，且平均日增重隨飼糧精氨酸水平呈線性或二次曲線升高，料重比呈二次曲線降低。Emadi等[16]研究發現，飼糧0.52%～2.77%精氨酸水平可顯著提高1～49日齡科寶肉雞平均日采食量和平均日增重。朱偉等[17]研究發現，飼糧添加0.50%精氨酸顯著降低循環高溫環境下1～49日齡櫻桃谷肉鴨料重比。本試驗結果顯示，飼糧精氨酸水平對平均日采食量、平均日增重和料重比無顯著影響，與前人研究結果不一致，可能是由于試驗雞的品種、周齡、飼養環境等因素不同引起。

3.2 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞抗氧化能力的影響

精氨酸有提高機體抗氧化功能作用，主要表現為提高T-SOD、GSH-Px活性和T-AOC，降低MDA含量。本試驗結果顯示，清遠麻雞血漿T-SOD、GSH-Px活性和T-AOC，空腸黏膜T-SOD活性和血漿MDA含量隨飼糧精氨酸水平的升高而呈先升高后降低的二次曲線變化，這與晏利瓊等[18]和楊書慧等[4]飼糧添加0.50%精氨酸在1～35日齡熱應激科寶肉仔雞上的研究結果相似，且回歸分析結果顯示，91～120日齡清遠麻雞達到最佳抗氧化狀態下的精氨酸水平分別為0.93%、0.95%、0.98%和1.01%。血紅素加氧酶-1(HO-1)和GPX1 mRNA表達量也可反映機體抗氧化功能，其mRNA表達量升高，抗氧化功能增強[19]。本試驗結果顯示，飼糧1.14%精氨酸水平降低了清遠麻雞空腸HO-1 mRNA表達量，說明飼糧精氨酸水平在提高91～120日齡清遠麻雞腸道抗氧化功能方面并非越多越好。

3.3 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞免疫功能的影響

精氨酸不僅參與機體內各種營養物質的合成和分解代謝，還可作為免疫調節介質調節機體免疫功能，可刺激不同免疫球蛋白和免疫細胞因子的產生[20]。Perez-Carbajal等[21]研究發現，飼糧添加0.30%和0.60%精氨酸可提高艾美球蟲攻毒情況下1～21日齡科寶肉仔雞血清IgM和IgG含量，但對血清IgA含量無顯著影響。陳西風等[14]也有類似發現，飼糧0.40%～1.20%精氨酸水平可顯著提高21～42肉雞血清IgG和IgM含量。張燦菲[22]研究報道，飼糧1.30%和1.60%精氨酸水平可提高急性應激肉雞小腸黏膜SIgA含量。本試驗結果顯示，飼糧0.66%～1.14%精氨酸水平有提高91～120日齡清遠麻雞血漿IgG含量的趨勢，但對血漿IgA、IgM和空腸黏膜SIgA含量均無顯著影響，說明在本試驗條件下，精氨酸對育成階段清遠麻雞體液免疫調節無影響，可能由于精氨酸對前B淋巴細胞的分化無影響有關，而B淋巴細胞又和免疫球蛋白的分泌相關[14]。吳天佑[23]研究發現，補充精氨酸可抑制脂多糖誘導的促炎性細胞因子IL-6的產生。彭眾[24]研究發現，每日灌服40 mL(250 mg/kg)精氨酸可降低斷奶應激仔豬回腸黏膜IL-2含量。本試驗結果顯示，飼糧066%～1.14%精氨酸水平對空腸黏膜IL-2和IL-6含量無顯著影響，可能與本試驗為非應激環境有關。研究表明，飼糧0.50%和1.00%精氨酸水平可通過抑制TLR4和MYD88基因表達緩解沙門氏菌血清膽堿C500對斷奶仔豬造成的免疫應激[25]。本試驗結果顯示，飼糧0.90%精氨酸水平可顯著降低空腸TLR4 mRNA表達量，飼糧1.14%精氨酸水平可顯著升高空腸MYD88 mRNA表達量，與前人研究結果相似，說明飼糧0.90%精氨酸水平可通過下調TLR4 mRNA表達量提高免疫功能，飼糧1.14%精氨酸水平可通過上調MYD88 mRNA表達量降低免疫功能。

3.4 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞腸道形態和屏障功能的影響

絨毛高度和隱窩深度是衡量小腸消化和吸收的重要指標，絨毛高度增加、隱窩深度降低說明腸道對營養物質的消化吸收增加[26]。Tahmasebi等[27]研究發現，灌服精氨酸對孵化期蛋雞十二指腸絨毛高度和隱窩深度無明顯改善作用。本試驗結果顯示，飼糧0.66%～1.14%精氨酸水平對空腸絨毛高度和隱窩深度無顯著影響，可能在育成階段清遠麻雞腸道已發育完整，額外添加精氨酸對腸道形態并無促進作用。ZO-1和Claudin1等外周胞漿蛋白參與緊密連接的形成，在家禽腸道機械屏障中發揮著重要的作用[28]。Xia等[29]研究發現，精氨酸可提高應激狀態下腸道緊密連接蛋白ZO-1和Claudin1 mRNA表達量。張貝貝[30]研究發現，飼糧1.87%精氨酸水平可抑制21和28日齡產氣莢膜梭菌攻毒下肉雞腸道ZO-1和Claudin1 mRNA表達量的降低。本試驗結果顯示，飼糧0.90%精氨酸水平顯著升高ZO-1 mRNA表達量，與前人研究結果相似，但飼糧1.14%精氨酸水平顯著降低空腸ZO-1和Claudin1 mRNA表達量，飼糧1.02%精氨酸水平顯著降低Claudin1 mRNA表達量，表明高水平的精氨酸可能對清遠麻雞腸道物理屏障有負面影響。

3.5 飼糧精氨酸水平對120日齡清遠麻雞胴體性狀和肉品質的影響

屠宰率、胸肌率和腹脂率是反映家禽產肉性能的重要指標，屠宰率和胸肌率越高、腹脂率越低，產肉性能越好[31-32]。本試驗結果顯示，雖然飼糧0.66%～1.14%精氨酸水平對胸肌率和腹脂率無顯著影響，但飼糧0.90%精氨酸水平可提高屠宰率，此結果與Ai-Daraji等[33]應用0.04%、0.06%精氨酸提高1～46日齡羅斯肉雞屠宰率的研究結果相似，說明精氨酸可通過提高屠宰率改善胴體性狀，可能與精氨酸改變生長期整個機體脂肪代謝有關[34]。

剪切力、滴水損失、pH和肉色可反映肉的口感和外觀狀況，也是影響肉品質和消費者消費的主要因素[35]。剪切力越小，肉質越嫩；滴水損失越小，系水力越高；a*值越高，L*和b*值越低，肉品質越好[36]。施展等[37]研究發現，妊娠母豬飼糧添加1.00%的精氨酸對子代生長育肥豬肌肉剪切力、滴水損失、pH 和肉色均無顯著影響。本試驗結果顯示，飼糧0.66%～1.14%精氨酸水平對120日齡清遠麻雞胸肌剪切力、pH 和肉色均無顯著影響，與前人研究結果相似。楊書慧等[4]研究發現，飼糧添加0.50%精氨酸可顯著降低1～35日齡熱應激狀態下科寶肉仔雞胸肌滴水損失。李燕舞等[38]研究發現，飼糧0.95%和1.04%精氨酸水平可線性降低肥育豬肌肉滴水損失。本試驗中，隨著飼糧精氨酸水平的升高，胸肌滴水損失有降低趨勢。

4 結 論

本試驗條件下，飼糧添加精氨酸可改善91～120日齡清遠麻雞腸道抗氧化功能和屠宰率，但對免疫功能和肉品質無明顯影響。以平均日增重和料重比為主要評價指標，依據二次曲線模型估測，91～120日齡清遠麻雞飼糧精氨酸適宜水平分別為0.88%和0.94%。