動態(tài)監(jiān)測VEGF、HBP、NGAL在肺癌手術(shù)前后水平變化及與預(yù)后的關(guān)系

李偉 茹玉航 王林

全球癌癥數(shù)據(jù)統(tǒng)計表明，肺癌在男性惡性腫瘤發(fā)病和死亡率占據(jù)第一位，在女性發(fā)病率、死亡率分別位居第三、第二位［1］。外科手術(shù)是肺癌首選治療方法，早期肺癌術(shù)后5年生存率達70%以上，而局部中晚期肺癌僅約20%［2］。肺癌預(yù)后相關(guān)研究一直備受臨床關(guān)注，隨現(xiàn)代分子生物學(xué)發(fā)展，發(fā)現(xiàn)了多種與肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)的標(biāo)志物，能否用于手術(shù)療效及預(yù)后監(jiān)測尚無明確定論。血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是作用最強、特異性最高的促血管生長因子，在肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用［3］。中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白（Neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）參與炎癥免役應(yīng)答、細(xì)胞分化與凋亡、腫瘤發(fā)生發(fā)展等過程，成為肺癌研究領(lǐng)域新的切入點［4］。另研究證實，肝素結(jié)合蛋白（Heparin-binding protein，HBP）在多種腫瘤組織中表達上調(diào)，可作為獨立預(yù)后因素［5］。本研究嘗試動態(tài)監(jiān)測VEGF、HBP、NGAL 在肺癌手術(shù)前后水平變化，并探究其與預(yù)后的關(guān)系。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年7月至2020年12月本 院80 例肺癌患者作為研究對象，根據(jù)患者術(shù)后復(fù)發(fā)情況分組，未復(fù)發(fā)組（n=68），其中男57 例，女11 例，年齡平均（59.75±7.41）歲，臨床分期：Ⅰ期25 例，Ⅱ期33 例，Ⅲ期10 例；復(fù)發(fā)組（n=12），其中男8 例，女4 例，年齡平均（61.84±6.43）歲，臨床分期：Ⅱ期6 例，Ⅲ期6 例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)明確且首次診斷為進展期肺癌［6］；②預(yù)計生存時間≥6 個月；③采取手術(shù)治療；④術(shù)前均未進行放化療治療；⑤患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②術(shù)前有感染性疾病；③術(shù)后出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥；④合并重要臟器轉(zhuǎn)移；⑤合并肝炎、糖尿病、冠心病、腦血管疾病、高血壓等疾病。兩組年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；本研究經(jīng)本院倫理委員會審批通過。

1.2 方法

①術(shù)前及術(shù)后3 d 取空腹靜脈血3 mL，離心（半徑8 cm，3 500 r/min，9 min），取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測定VEGF、HBP、NGAL，均采用上海江萊生物科技有限公司試劑盒。②Logistic 多因素回歸分析肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素，受試者工作特征（Receiver operating characteristic curve，ROC）曲線分析VEGF、HBP、NGAL 水平對預(yù)后（術(shù)后復(fù)發(fā)為預(yù)后差）的預(yù)測價值。

1.3 觀察指標(biāo)

①不同預(yù)后患者手術(shù)前后VEGF、HBP、NGAL水平。②預(yù)后Logistic 多因素回歸分析。③VEGF、HBP、NGAL 水平對預(yù)后的預(yù)測價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 22.0 處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以n（%）描述，計量資料以（）描述，兩組間比較用t檢驗；影響因素采用Logistic 多因素回歸分析；預(yù)測價值采用ROC 曲線，獲取AUC、置信區(qū)間、敏感度、特異度及cut-off 值，聯(lián)合預(yù)測實施Logistic二元回歸擬合，返回預(yù)測概率logit（p），將其作為獨立檢驗變量。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同預(yù)后患者手術(shù)前后VEGF、HBP、NGAL水平

兩組術(shù)前VEGF、HBP、NGAL 水平相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），術(shù)后復(fù)發(fā)組VEGF、HBP、NGAL 水平均高于未復(fù)發(fā)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 預(yù)后Logistic 多因素回歸分析

以肺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)情況為因變量（未復(fù)發(fā)=0，復(fù)發(fā)=1），將表1中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的因素作為自變量，納入Logistic 多因素回歸模型，結(jié)果顯示，術(shù)后VEGF、HBP、NGAL 水平均為肺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素（P＜0.05）。見表2。

表1 不同預(yù)后患者手術(shù)前后VEGF、HBP、NGAL 水平（±s）Table 1 The levels of VEGF，HBP，and NGAL in patients with different prognosis before and after surgery（±s）

表1 不同預(yù)后患者手術(shù)前后VEGF、HBP、NGAL 水平（±s）Table 1 The levels of VEGF，HBP，and NGAL in patients with different prognosis before and after surgery（±s）

組別復(fù)發(fā)組未復(fù)發(fā)組t 值P 值n 12 68 VEGF（pg/mL）術(shù)前824.69±65.20 809.37±60.26 0.852＜0.001術(shù)后536.41±47.83 488.25±45.36 3.575＜0.001 t 值13.339 34.588 P 值＜0.001＜0.001 HBP（μg/L）75.69±13.41 70.12±15.43 1.253＜0.001 49.31±8.82 32.87±5.94 8.584＜0.001 t 值6.150 18.303 P 值＜0.001＜0.001 NGAL（ng/mL 77.52±10.84 75.94±9.38 0.557＜0.001 47.82±5.24 38.42±5.69 5.687＜0.001 t 值9.230 27.784 P 值＜0.001＜0.001

表2 預(yù)后Logistic 多因素回歸分析Table 2 Logistic multivariate regression analysis of prognosis

2.3 VEGF、HBP、NGAL 水平對預(yù)后的預(yù)測價值

繪制ROC 曲線，術(shù)后VEGF、HBP、NGAL 水平聯(lián)合對預(yù)后的預(yù)測AUC 最大，具有良好預(yù)測效能。見表3，圖1。

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

表3 VEGF、HBP、NGAL 水平對預(yù)后的預(yù)測價值Table 3 The prognostic value of VEGF，HBP and NGAL levels

3 討論

肺癌惡性程度高，即使在早期行根治性手術(shù)，5年生存率仍較低。腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移與肺癌預(yù)后有關(guān)。隨現(xiàn)代分子生物學(xué)發(fā)展，發(fā)現(xiàn)多種與肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物，如VEGF、HBP、NGAL，能否作為腫瘤標(biāo)志物用于肺癌手術(shù)療效及預(yù)后監(jiān)測是一直困擾我們的問題。

血管生成是癌癥轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的主要原因，幾乎所有實體瘤生長、轉(zhuǎn)移均依賴于腫瘤血管生成［7］。新生腫瘤血管不僅是癌細(xì)胞增殖的內(nèi)部條件，也是癌細(xì)胞浸潤和血行轉(zhuǎn)移的第一路徑。VEGF 是作用最強的促血管生長因子，大量研究證實，VEGF 可作為評估肺癌惡性程度及預(yù)后的參考指標(biāo)［8-9］。本研究結(jié)果提示VEGF 可能與肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)。VEGF 可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生間質(zhì)膠原酶、蛋白水解酶等促進血管生成，且可提高血管通透性，引起腫瘤間質(zhì)水腫，利于腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移［10］。因此，VEGF 與肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)。

NGAL 是lipocalin 家族成員之一，其氨基酸序列及DNA 內(nèi)含子和外顯子的排列有著高度保守性，在免疫調(diào)節(jié)及維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮重要作用［11］。目前，已發(fā)現(xiàn)NGAL 與多種疾病有關(guān)，其對急性腎損傷、膿毒癥有明確預(yù)測價值，也參與慢性阻塞性肺疾病、冠心病等發(fā)生發(fā)展［12］。近年來，NGAL 與腫瘤的關(guān)系愈發(fā)受到重視，在食管癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌等惡性腫瘤中呈顯著高表達［13］。在肺癌中，研究證實，NGAL 在患者原位腫瘤、血清、胸腔積液均有明顯高表達［14-15］。本研究數(shù)據(jù)顯示，肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)患者NGAL高表達，為肺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素。

HBP 在凝血、細(xì)胞分化及腫瘤發(fā)生發(fā)展等過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。目前，關(guān)于HBP 在肺癌中的研究鮮有報道。本研究探討HBP 與肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)，HBP 為肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素。抗凝藥物肝素（HP）及其結(jié)構(gòu)類似物硫酸乙酰肝素（HS）均為高度硫酸化糖胺聚糖家族成員，研究證實，HS/HP 通過糖鏈中大量精細(xì)寡糖片段與HBP 相互作用，發(fā)揮抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用［16］。此可能為HBP 參與肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)鍵機制，但臨床尚無相關(guān)驗證，有待進一步證實。ROC 曲線是兼顧靈敏度和特異性的診斷試驗評價工具，而基于Logistic 回歸的ROC 曲線可用于聯(lián)合指標(biāo)預(yù)測效能評價。本研究ROC 曲線顯示，結(jié)果提示臨床可同時檢測VEGF、HBP、NGAL，為肺癌患者預(yù)后預(yù)測提供更全面、可靠的參考信息。因此，建議肺癌患者術(shù)后應(yīng)定期檢測VEGF、HBP、NGAL，準(zhǔn)確估計其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的可能性，在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移前即得到及時治療，以有效延長生存期。

綜上可知，動態(tài)監(jiān)測VEGF、HBP、NGAL 可有效預(yù)測肺癌患者術(shù)后預(yù)后情況，利于評估復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險，開展針對性防治措施。本研究所選病例中復(fù)發(fā)率符合以往文獻復(fù)發(fā)比例，但本研究存在一定不足，如樣本量較小，還需臨床多中心、多渠道取樣，做進一步證實。