急性胰腺炎患者血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB表達水平及臨床意義

袁燕文 陳孟君 許哲 黃妙興 陳至操 葉襯軒

急性胰腺炎為消化內科常見急癥，具有較高病死率，盡早給予急性胰腺炎患者有效治療對改善患者預后至關重要［1-2］。急性胰腺炎患者體內有強烈的炎癥應答，可能有促炎和抗炎反應失衡紊亂的現象［3］。新近研究［4］證實，中性粒細胞胞外誘捕網（Nertrophil extracellular traps，NETs）參與多種疾病的發生、發展，可捕殺人體內病原體，但同時也可造成自身細胞或組織損傷，急性胰腺炎患者血清中游離DNA/NETs（Cellfree DNA/NETs，cf-DNA/NETs）明顯升高，且隨著病情加重而升高。微管相關蛋白1 輕鏈3（Microtubuleassociated protein 1 light chain 3，MAP1-LC3）、維生素D 結合蛋白（Vitamin D binding protein，DPB）也被證實參與急性胰腺炎的發生發展，可能有助于評估病情［5-6］。本研究嘗試探究血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 在急性胰腺炎患者中的表達水平及臨床意義，旨在為臨床治療本病提供參考。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年9月至2020年9月本院收治的急性胰腺炎患者150 例，隨訪30 d，根據預后分為生存組（138 例）與死亡組（12 例），死亡組入院時間13～30d，平均（19.25±3.12）d。

納入標準：①患者臨床診斷符合《急性胰腺炎診治指南（2014）》標準［7］。②年齡＞18 歲；③發病48 h入院并維持相關檢測；④就診前未進行任何治療；⑤入院前3 個月內無嚴重外傷或手術史；⑥患者及家屬均知曉同意。排除標準①伴有嚴重顱腦損傷、心臟驟停等可能成為主要死因疾病者；②惡性腫瘤患者；③膿毒癥患者；④自身免疫性疾病患者；⑤傳染性疾病患者；⑥精神疾病患者；⑦合并原發性嚴重心腦肝腎功能障礙者；⑧妊娠或哺乳期女性；⑨貧血及營養不良。本實驗經醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 血清指標檢測方法

所有患者入院后均立即采集外周靜脈血6 mL，取其中3 mL 離心處理（8 cm 半徑，3 500 r/min 轉速）10 min 后取血清，置于-80℃冷藏室保存，由專業人員統一檢測，采用PicoGreen 熒光染料法，用熒光酶標儀（購自上海美谷分子儀器有限公司）測定熒光值，按照標準曲線計算血清cf-DNA/NETs 水平；采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清MAP1-LC3、DPB 水平，試劑盒購自北京百奧萊博科技有限公司。

1.2.2 治療方法

所有采集靜脈血標本后立即開展對癥治療，主要包括禁食、胃腸減壓、糾正水電解質紊亂、改善微循環、預防性應用抗生素、并發癥對癥治療等，并給予生長抑素治療，劑量3 mg/12 h，通過微量注射泵持續靜脈給藥，單位輸液量0.25 mg/h，在患者臨床癥狀緩解3 d 后停藥。病情進展者根據患者具體情況積極調整治療方案，治療30 d 后統計預后情況。

1.3 觀察指標

①兩組臨床資料，包括性別、年齡、身體質量指數（Body mass index，BMI）、發病原因、合并癥。②兩組入院時、治療3、7 d 后血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 水平。③兩組入院時、治療3 d、7 d 后急性生理與慢性健康評價系統Ⅱ（APACHEⅡ）評分［8］、Ranson 評分［9］。④分析血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 與APACHEⅡ、Ranson 評分的相關性。⑤分析血清各指標與急性胰腺炎患者預后的關系。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件進行數據處理，計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗，計量資料以（）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，相關性分析采用Pearson 相關系數模型，通過Logistic 進行多因素回歸分析，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床資料

兩組年齡、性別、BMI、發病原因、合并癥比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組臨床資料比較［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of clinical data between two groups［（±s），n（%）］

表1 兩組臨床資料比較［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of clinical data between two groups［（±s），n（%）］

資料年齡（歲）性別男女t/χ2值0.723 0.014 P 值0.471 0.907發病原因0.418 0.001 0.676 0.981合并癥BMI（kg/m2）膽源性非膽源性低氧血癥糖尿病高血壓生存組（n=138）52.17±6.13 95（68.84）43（31.16）22.79±1.81 80（57.97）58（42.03）12（8.70）44（31.88）58（42.03）死亡組（n=12）53.52±7.08 9（75.00）3（25.00）23.02±2.03 7（58.33）5（41.67）2（16.67）3（25.00）6（50.00）0.157 0.029 0.287 0.694 0.866 0.592

2.2 兩組治療前后血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 水平

死亡組入院時、治療3、7 d 后血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3 較生存組高，DPB 較生存組低，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組治療前后血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB水平比較（±s）Table 2 Comparison of serum cf-DNA/NETs，MAP1-LC3，DPB levels before and after treatment in 2 groups（±s）

表2 兩組治療前后血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB水平比較（±s）Table 2 Comparison of serum cf-DNA/NETs，MAP1-LC3，DPB levels before and after treatment in 2 groups（±s）

時間入院時例數12 138治療3 d 后12 138治療7 d 后組別死亡組生存組t 值P 值死亡組生存組t 值P 值死亡組生存組t 值P 值12 138 cf-DNA/NETs（μg/L）1482.35±304.58 1108.28±251.39 4.860＜0.001 1423.57±426.59 928.28±264.20 5.887＜0.001 1379.40±403.86 620.71±202.55 11.262＜0.001 MAP1-LC3（ng/L）1.10±0.23 0.81±0.20 4.761＜0.001 1.13±0.21 0.72±0.16 8.295＜0.001 1.06±0.17 0.57±0.13 12.206＜0.001 DPB（mg/L）401.37±56.71 469.16±80.25 2.861 0.001 398.10±73.45 487.53±102.77 2.945 0.004 405.48±76.29 506.22±113.43 3.013＜0.001

2.3 兩組治療前后APACHEⅡ、Ranson 評分

死亡組入院時、治療3、7 d 后APACHEⅡ、Ranson 評分較生存組高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組治療前后APACHEⅡ、Ranson 評分比較（±s，分）Table 3 Comparison of APACHEⅡand Ranson scores between 2 groups before and after treatment（±s，分）

表3 兩組治療前后APACHEⅡ、Ranson 評分比較（±s，分）Table 3 Comparison of APACHEⅡand Ranson scores between 2 groups before and after treatment（±s，分）

組別死亡組生存組t 值P 值n APACHEⅡ評分Ranson 評分12 138入院時21.89±2.41 18.03±2.05 7.850＜0.001治療3 d 后22.30±2.56 17.68±3.11 4.996＜0.001治療7 d 后21.75±2.38 15.19±2.92 7.560＜0.001入院時4.73±1.40 2.24±0.71 10.573＜0.001治療3 d 后5.06±1.54 2.03±0.66 13.225＜0.001治療7 d 后4.82±1.31 1.69±0.52 16.919＜0.001

2.4 血 清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 與APACHEⅡ、Ranson 評分相關性

Pearson 相關性分析，發現入院時、治療3、7 d后血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3 與APACHEⅡ、Ranson評分間存在正相關關系，DPB與APACHEⅡ、Ranson 評分間存在負相關關系（P＜0.05）。見表4。

表4 血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 與APACHEⅡ、Ranson 評分相關性Table 4 Correlation of serum cf-DNA/NETs，MAP1-LC3，DPB with APACHEⅡ，Ranson score

2.5 血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 與急性胰腺炎患者預后的關系

以急性胰腺炎患者預后作為因變量（生存=0，死 亡=1），入 院時、治 療3、7 d 后血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 作為自變量，納入Logistic回歸方程，結果顯示，入院時、治療3、7 d 后血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 與急性胰腺炎患者預后顯著相關（P＜0.05）。見表5。

表5 血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 與急性胰腺炎患者預后的關系Table 5 The relationship between serum cf-DNA/NETs，MAP1-LC3，DPB and the prognosis of patients with acute pancreatitis

3 討論

NETs 是活化的中性粒細胞與顆粒蛋白結合形成細胞外網狀結構，在病原體入侵或感染人體過程中，中性粒細胞被激活，導致血液中cf-DNA/NETs 含量明顯升高，而NETs 可通過捕獲血液及組織中病原體發揮良好抗菌作用，但也會引起機體上皮及內皮細胞損傷［10］。閆雪梅［11］通過對48例膿毒癥患者開展的一項健康對照研究，發現膿毒癥患者血漿cf-DNA/NETs 水平明顯升高，可作為膿毒癥某時期反映炎癥損傷程度的標志物。支持本研究結果。

相關研究［12］指出，急性胰腺炎發生發展過程中自噬信號通路參與胰酶的激活，MAP1-LC3 介導了自噬的形成過程。本研究結果推斷MAP1-LC3可能參與急性胰腺炎的病情進展。MAP1-LC3 是自噬信號通路的關鍵蛋白，具有調控自噬體形成的作用，其表達量越高表明自噬程度越高［13］，胰腺組織的自身消化作用越嚴重，從而促進急性胰腺炎病情進展，增加患者病死風險。

本研究還發現不同預后急性胰腺炎患者的血清DPB 水平存在明顯差異，患者預后越差血清DPB 水平越低，與國內相關研究［14］結果一致。DPB 是機體內參與維生素D 合成與代謝的重要因子，在機體異常患者體內肌動蛋白、內毒素和異常細胞的清除過程中并發揮重要作用。筆者認為，急性胰腺炎發生后胰腺內存在明顯炎癥，病情嚴重者甚至發生胰腺組織壞死，導致胰腺細胞內肌動蛋白被釋放，DPB 因與大量肌動蛋白結合導致血液系統中DPB 含量明顯減少，且DPB 在發揮清除內毒素的過程中被大量消耗，因此血清DPB 水平可在一定程度上反映胰腺損傷情況。

此外，本研究通過Logistic 回歸分析，發現隨著血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3 水平的升高、血清DPB 水平的降低，患者病死風險逐漸增加，進一步證實各指標參與急性胰腺炎的病情進展。APACHEⅡ、Ranson 評分均為評估急性胰腺炎患者病情程度的工具，本研究進一步通過相關性分析發現急性胰腺炎早期血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3 與APACHEⅡ、Ranson 評分呈正相關，DPB 與APACHEⅡ、Ranson 評分呈負相關，提示早期檢測各指標有助于評估患者疾病程度。

綜上可知，血清cf-DNA/NETs、MAP1-LC3、DPB 水平與急性胰腺炎患者疾病轉歸情況密切相關，早期檢測各指標表達水平可在一定程度上指導醫生預測患者預后情況，具有較高臨床應用價值。但本研究仍存在一定不足，如未設置健康對照、樣本量較少，研究結果仍需通過多中心大樣本研究進一步驗證。