非小細胞肺癌患者血漿LncRNA UCA1與吉西他濱耐藥相關性研究

韋瑞富

肺癌為全球發病率及致死率較高的惡性腫瘤，其中非小細胞肺癌占比較高。吉西他濱聯合順鉑為中晚期肺癌患者的常用方案，但個體耐藥性、化療敏感性有差異，因而篩選與化療藥物敏感相關分子標志物，選擇適宜方案是研究重點［1］。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，LncRNA）在癌癥發展過程中發揮重要作用，LncRNA 異常表達可廣泛調控基因表達，經參與X 染色體沉默、基因組印跡及轉錄激活等途徑，調控細胞增殖、分化及凋亡，參與腫瘤發生發展［2］。尿路上皮癌胚抗原1（urothelial carcinoma associated 1，LncRNA UCA1）為尿路上皮癌中一類LncRNA，經靶向調控微小RNA（microRNA，miRNA）而影響癌癥［3］。研究發現，LncRNA UCA1 在非小細胞肺癌中有重要臨床意義，且對caspase-3/7 活化和細胞凋亡誘導有一定影響［4］。本文主要分析LncRNA UCA1 與非小細胞肺癌患者吉西他濱耐藥的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年4月至2020年10月本院收治的非小細胞肺癌患者84 例。納入標準：①符合非小細胞肺癌的相關診斷標準［5］，且經病理組織學檢查確診；②臨床分期為ⅢB～Ⅳ期，且預計生存期＞2年，卡氏評分（karnofsky performance status，KPS）［6］＞60 分；③均有可客觀評價的病灶，且美國東部腫瘤協作組（Eastern Cooperative Oncology Group，ECOG）全身功能狀態評分［6］≤2 分。排除標準：①合并嚴重心、肝、腎功能不全者；②合并惡性腫瘤或有精神障礙性疾病者；③未完成既定化療方案或因不耐受化療而中途退出者。研究經本院倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。84例患者隨機分為吉西他濱組（n=43，予以吉西他濱/順鉑治療）、紫杉醇組（n=41，予以紫杉醇/順鉑治療）。見表1。

表1 一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general information［n（%），（±s）］

表1 一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general information［n（%），（±s）］

組別吉西他濱組紫杉醇組χ2/t 值P 值n 性別男28（65.12）24（58.54）0.385 0.535女中高43 41 15（34.88）17（41.46）年齡（歲）54.15±5.63 54.26±5.57 0.090 0.928臨床分期ⅢB 23（53.49）21（51.22）0.043 0.835Ⅳ期20（46.51）20（48.78）吸煙31（72.09）26（63.41）0.725 0.394飲酒22（51.16）18（43.90）0.443 0.505分化程度低20（46.51）18（43.90）2.078 0.354 22（51.16）19（46.34）1（2.33）4（9.76）病理類型腺癌10（23.26）8（19.51）0.175 0.676鱗癌33（76.74）33（80.49）

1.2 方法

1.2.1 治療方法

吉西他濱組予以吉西他濱/順鉑治療：吉西他濱1 000 mg/m2，第1 d、第8 d 靜滴；順鉑25 mg/m2，d1～d3 靜滴，以21 d 為1 個周期，連續治療2 個周期。紫杉醇組予以紫杉醇/順鉑治療：紫杉醇150 mg/m2，d1 靜滴；順鉑25 mg/m2，d1～d3 靜滴。均以21 d 為1 個周期，連續治療2 個周期。

1.2.2 化療療效評定

依據世界衛生組織（world health organization，WHO）的實體瘤近期療效評價標準［6］，分為完全緩解（complete response，CR）、部分緩解（partial response，PR）、疾病穩定（stable disease，SD）、疾病進展（progressive disease，PD）。以CR+PR 為化療有效/敏感，以SD 為化療效果中介，以PD 為化療耐藥。

1.2.3 血漿LncRNA UCA1 表達水平測定

采集化療前、化療1 個周期、化療2 個周期時的靜脈血4 mL，4 000 r/min 速率離心10 min，取上層血漿置于無RNA 酶的5 mL 離心管，-80℃冰箱保存備用。采用TrizolTM LS Reagent（中國賽默飛世爾科技有限公司）提取總RNA 后對RNA 濃度進行檢測，應用逆轉錄cDNA 合成試劑盒（中國賽默飛世爾科技有限公司）合成cDNA。qRT-PCR 儀檢測血清中LncRNA UCA1 表達水平，其引物序列為：上游引物為5′-TGCCAGCCTCAGCTTAATCC-3′，下游引物5′-TCCCTGTTGCTAAGCCGATG-3′，內參選擇GAPDH，其上游引物為5′-AAGATGTTGCCAGGGAGGAC-3′，下游引物5′-TGGTCAGAAGACTTCCCTGG-3′。反應條件：95℃預變性60 s，1 個循環；95℃變性30 s，62℃退火30 s，72℃延伸20 s，共45 個循環。采用實時熒光定量儀對LncRNA UCA1 水平進行測定，以2-△△CT法計算LncRNA UCA1 的相對表達量。

1.3 統計學方法

采用SPSS 23.0 軟件對數據進行處理。計數資料采用n（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以（）表示，采用獨立樣本t檢驗、單因素方差分析及LSD-t檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血漿LncRNA UCA1 表達水平及與臨床參數的關系

耐藥亞組LncRNA UCA1 表達水平高于中介亞組、敏感亞組，差異具有統計學意義（P＜0.05），三組其他臨床參數比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 血漿LncRNA UCA1 表達水平及與臨床參數的關系［n（%），（±s）］Table 2 Expression level of plasma LncRNA UCA1 and its relationship with clinical parameters［n（%），（±s）］

表2 血漿LncRNA UCA1 表達水平及與臨床參數的關系［n（%），（±s）］Table 2 Expression level of plasma LncRNA UCA1 and its relationship with clinical parameters［n（%），（±s）］

臨床資料性別敏感亞組（n=19）中介亞組（n=8）耐藥亞組（n=16）χ2/F 值P 值男女3.161 0.206年齡（歲）臨床分期ⅢBⅣ期吸煙飲酒分化程度10（52.63）9（47.37）53.78±5.46 5（62.50）3（37.50）53.69±5.42 13（81.25）3（18.75）54.83±5.57 11（57.89）8（42.10）12（63.16）10（52.63）5（62.50）3（37.50）6（75.00）4（50.00）7（43.75）9（56.25）13（81.25）8（50.00）0.194 1.019 1.454 0.029 0.825 0.601 0.483 0.985低中高9（47.37）9（47.37）1（5.26）3（37.50）5（62.50）0（0）8（50.00）8（50.00）0（0）1.706 0.841病理類型腺癌鱗癌LncRNA UCA1 5（26.32）14（73.68）0.43±0.06 1（12.50）7（87.50）0.64±0.07 4（25.00）12（75.00）0.75±0.09 0.645 83.033 0.724＜0.001

2.2 不同化療效果患者的LncRNA UCA1表達水平

化療后吉西他濱組不同化療效果患者的LncRNA UCA1 表達水平比較差異有統計學意義（P＜0.05）。紫杉醇組不同化療效果患者的LncRNA UCA1 表達水平比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表3。

表3 不同化療效果患者的LncRNA UCA1 表達水平［n（%），（±s）］Table 3 Expression level of LncRNA UCA1 in patients with different chemotherapy effects［n（%），（±s）］

表3 不同化療效果患者的LncRNA UCA1 表達水平［n（%），（±s）］Table 3 Expression level of LncRNA UCA1 in patients with different chemotherapy effects［n（%），（±s）］

注：與PD 比較，aP＜0.05；與SD 組比較，bP＜0.05；與PR 比較，cP＜0.05。

化療效果CR PR SD PD F 值P 值吉西他濱組（n=43）例數9（20.93）10（23.26）8（18.60）16（37.21）表達水平0.38±0.05abc 0.47±0.06ab 0.64±0.07a 0.75±0.09 60.573＜0.001紫杉醇組（n=41）例數6（14.63）8（19.51）14（34.16）13（31.70）表達水平0.53±0.07 0.55±0.06 0.58±0.07 0.60±0.07 1.825 0.159

2.3 LncRNA UCA1 表達水平隨化療周期變化

化療1 個周期、2 個周期，吉西他濱耐藥亞組的LncRNA UCA1 表達水平增加，敏感亞組的LncRNA UCA1 表達水平下降（P＜0.05），而中介亞組的LncRNA UCA1 表達水平無明顯變化（P＞0.05）。化療1 個周期、2 個周期耐藥亞組LncRNA UCA1 表達水平高于敏感亞組，中介亞組化療2 個周期LncRNA UCA1 表達水平高于敏感亞組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 LncRNA UCA1 表達水平隨化療周期變化（±s）Table 4 Changes of the expression level of LncRNA UCA1 with chemotherapy cycle（±s）

表4 LncRNA UCA1 表達水平隨化療周期變化（±s）Table 4 Changes of the expression level of LncRNA UCA1 with chemotherapy cycle（±s）

注：與化療前比較，aP＜0.05；與化療1 周比較，bP＜0.05；與敏感亞組比較，cP＜0.05；與中介亞組比較，dP＜0.05。

化療2 個周期0.43±0.06ab 0.64±0.07c 0.75±0.09acd 18.697＜0.001組別敏感亞組中介亞組耐藥亞組F 值P 值n 19 8 16化療前0.64±0.07 0.61±0.07 0.65±0.07 456.712＜0.001化療1 個周期0.57±0.08a 0.62±0.07 0.70±0.06acd 22.357＜0.001

3 討論

多數非小細胞肺癌患者在確診時已處于晚期，吉西他濱為其一線化療方案，但有效率僅25%左右，聯合用藥療效也在50%左右［7］。LncRNA 為一類因缺乏開放閱讀框架導致缺乏蛋白編碼能力的非編碼RNA，其中LnRNA UCA1 可在多種腫瘤中表達上調。Wang 等［8］發現LncRNA UCA1在較多腫瘤抗癌藥物耐藥中起著關鍵作用，下調LncRNA UCA1 可恢復藥物敏感性。

本研究結果這表明非小細胞肺癌患者LncRNA UCA1 表達水平可能與其接受吉西他濱化療的效果有相關性，與順鉑無相關性。吉西他濱為細胞周期特異性抗代謝類藥物，其主要作用于DNA 合成期的腫瘤細胞，有抗瘤譜廣、毒副反應輕等特點。LncRNA UCA1 可通過調節上皮細胞-間充質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）及細胞凋亡參與腫瘤發生發展，且和多種腫瘤耐藥有關，也可能參與吉西他濱耐藥發展［9］。早期Liu 等［10］發現沉默LncRNA UCA1 可抑制肺癌細胞株A549 細胞遷移和侵襲，其作用機制可能與下調EMT 有關。Jun 等［11］則發現，LncRNA UCA1 可通過調節microRNA-143 表達來調控肺癌細胞增殖、遷移和侵襲。

本研究也發現，化療1 個周期、2 個周期，吉西他濱耐藥亞組的LncRNA UCA1 表達水平增加，敏感亞組的LncRNA UCA1 表達水平下降，而中介亞組的LncRNA UCA1 表達水平無明顯變化，表明在化療期間對非小細胞肺癌患者予以血漿LncRNA UCA1 水平監測可能有利于幫助判斷其化療效果。吉西他濱在細胞內代謝過程較復雜，有多種相關蛋白及因子參與，近年來臨床對肺癌耐藥研究逐漸從蛋白質拓展至RNA 及DNA 水平［12］。LncRNA UCA1 主要通過表觀遺傳學轉錄及轉錄后水平調控基因表達與翻譯，從而參與腫瘤生物學功能［13-14］。本次也得出了相似結論，因此認為LncRNA UCA1可能是未來非小細胞肺癌防治新策略的潛在靶點，對其進行監測有重要意義。既往有研究［15］發現，LncRNA UCA1 可抑制糖代謝的關鍵酶并促進肺腺癌的轉移能力，其可能成為肺癌新診斷指標及治療靶點。Wu 等［16］發現，Lnc RNA UCA1 可通過microRNA-193a/HMGB1 軸促進肺癌細胞增殖、遷移。蔡華榮等［17］的研究顯示，LncRNA UCA1 可通過靶向調控miR-185-5p 而促進非小細胞肺癌增殖、侵襲和轉移，其作用機制可能與Wnt1/β-catenin 信號通路激活有關。本研究因條件限制，未作此方面的研究，后期將進一步開展體外實驗進行探討。

綜上所述，非小細胞肺癌患者LncRNA UCA1與吉西他濱耐藥有密切關系，LncRNA UCA1 可能是未來非小細胞肺癌防治新策略的潛在靶點。