HPLC法測定潮州“三寶”中山梨酸、苯甲酸和糖精鈉的含量

劉志聰，張文浩

(韓山師范學院 生命科學與食品工程學院，廣東 潮州 521000)

1 引言

潮州“三寶”分別是老香黃，老藥桔、黃皮鼓，是潮州涼果特產中的極品，在潮汕地區的涼果界中，具有舉足輕重的地位，深受潮人的青睞并享譽海內外，故被譽為潮州“三寶”。食品添加劑是一把“雙刃劍”，它能保持食品的新鮮，增加食品可食性，但同時若食用過多就會影響人體新陳代謝甚至危害健康[1]。所以添加劑的使用需要有一個量的控制，只要按照國家關于《食品添加劑使用衛生標準》的相關規定，是不會對人體健康造成損害的，人們大可放心食用。潮州“三寶”在其工藝制作過程中常用的防腐劑有苯甲酸、山梨酸、和糖精鈉等，所以在其成品中防腐劑量的控制在質控中尤為重要。

目前所見報道主要采用液相色譜法、氣相色譜法、離子色譜法等用于測定食品中的防腐劑、甜味劑和著色劑[2～7]。高效液相色譜因其應用廣泛、分離效率高及定量準確等優點被廣泛應用到食品中添加劑的檢測[8～12]。本文以潮州市售的潮州“三寶”(老香黃、老藥桔、黃皮)為研究對象，旨在建立和開發出適用于蜜餞食品中甜味劑色譜法和防腐劑的樣品前處理方法，并同時測定苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的高相液相色譜(HPLC法)。

2 材料與設備

2.1 實驗材料

潮州“三寶”(老香黃、老藥桔、黃皮)，購于當地超市。

2.2 實驗試劑

苯甲酸，山梨酸和糖精鈉標準品、氫氧化鈉(分析純)、硼砂(分析純)、亞鐵氰化鉀(分析純)、乙酸鋅(分析純)、濃鹽酸(12 mol/L)、甲醇(色譜純)、乙酸銨(分析純)等。

2.3 實驗設備

高效液相色譜儀(Agilent 1200)、TGW16臺式高速離心機(長沙市英泰儀器有限公司)、電子天平FA2004(上海精密科學儀器有限公司)、組織搗碎機JJ-2(江蘇金壇市億通電子有限公司)、TKA-GenPure超純水系統(廣東丹利科技有限公司)、25 mL具塞比色管、80目篩、 0. 45 μm微孔濾膜等。

3 實驗方法

3.1 操作條件

色譜柱：Agilent HC-18，150 mm×4.6 mm；柱溫:25 ℃;流速：1 mL/min；進樣量：10 μL；流動相：甲醇∶乙酸銨溶液(0.02 mol/L) =5∶95；檢測波長：230 nm。

3.2 樣品的預處理

稱取適量樣于85 ℃下烘干至恒重，然后用組織搗碎機粉碎過80目篩，取2. 0 g粉碎均勻樣品于25 mL具塞比色管中，加蒸餾水12.5 mL溶解浸泡，加入0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液0.5 mL放置過夜。再加入5.0 mL飽和硼砂溶液，搖勻后，加入0.25 mol/L亞鐵氰化鉀溶液2.5 mL、1.0 mol/L乙酸鋅溶液2.5 mL，用1 mol/L鹽酸調節pH值至中性，加水定容至25.0 mL，振蕩使其充分混合，轉移至離心管中高速離心，取上清液，用0. 45 μm微孔濾膜過濾，收集濾液于樣品瓶中，做好標簽備用。

3.3 液相色譜測定樣品

將樣品瓶放置于自動進樣器，聯機設置相應的色譜實驗參數，待儀器穩定后即可自動進樣測定。分析完成后進行實驗數據分析。

4 實驗項目

4.1 線性關系

以苯甲酸，山梨酸和糖精鈉對照品三種對照品的混合標準溶液為母液，分別配制成 0.02、0.04、0.08、0.10(mg/mL)不同的濃度梯度，用液相色譜進行上樣分析，以峰面積為縱坐標，相對含量為橫坐標繪制校正曲線，結果顯示3 種組分線性關系良好。結果如表1、圖1～7所示。

表1 線性關系

圖1 苯甲酸、山梨酸和糖精鈉色譜圖

圖2 苯甲酸色譜圖

圖3 山梨酸色譜圖

圖4 糖精鈉色譜圖

圖5 苯甲酸校正曲線

圖6 山梨酸校正曲線

圖7 糖精鈉校正曲線

4.2 穩定性試驗

以0.04 mg/mL的標準品混合液按3.1的操作條件分別于 0、2、4、8、12時進行檢測，測定峰面積，然后分別計算苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的峰面積RSD (相對標準偏差)(表2)。

表2 苯甲酸、山梨酸、糖精鈉5個時間段的峰面積

注：相對標準偏差(RSD)=標準偏差(SD)/計算結果的算術平均值(X)×100%，該值通常用來表示分析測試結果的精密度。

經計算，所測得的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的RSD值分別為0.072%、0.12%、0.097%，從結果可以看出，該檢測方法在12 h內是穩定的。

4.3 精密度試驗

取黃皮樣品(經測定，含有苯甲酸、山梨酸)，以3.1的操作條件重復進樣測定5 次，計算出各次苯甲酸、山梨酸的含量，然后計算相對標準偏差(RSD)(表3)。

表3 5次平行試驗結果

經5次平行試驗，所測得的黃皮樣品中的苯甲酸、山梨酸的RSD值分別為0.29%、9.05%，計算結果表明該方法精密度良好。

注：對相對標準偏差的要求，一般主要取決于被測對象的含量，含量越高要求相對標準偏差越低。由于本次測定中黃皮中山梨酸含量較低，故相對標準偏差較大，但仍小于10%，屬于可被允許范圍。

4.4 回收率實驗

以黃皮為本實驗樣品，在其中加入濃度由低到高3個梯度的標準樣品，檢測后，計算各種添加劑的回收率，結果如表4。

表4 各種添加劑的回收率

5 結果討論

本實驗結果表明，用HPLC法可以同時測定蜜餞中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的含量，是一種簡單快速的測定方法。3種待測組分能有效分離且能準確定量，適用范圍廣，準確度好，可作為一種快捷方法用于蜜餞類食品的日常檢測。

實驗結果表明，老香黃測定含有山梨酸和糖精鈉兩種儀器添加劑成分，含量分別為0.016 mg/g和0.64 mg/g；老藥桔測定含有山梨酸和糖精鈉兩種成分，含量分別為0.02 mg/g和2.3 mg/g：黃皮中含有苯甲酸和山梨酸兩種成分，含量分別為1.037 mg/g和0.013 mg/g。參照國家關于《食品添加劑使用衛生標準》的標準，知苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的最大使用量分別為0.5 g/kg、0.5 g/kg和1 g/kg。對比得出本次實驗所隨機購買市售的原材料中，老藥桔中的糖精鈉和黃皮中的苯甲酸含量超過了標準的最大使用量限定，這可能是由于在制作潮州“三寶”過程中，所使用的工藝流程沒有標準化，食品防腐劑的添加具有隨意性，所以對于其生產工藝流程的標準化尤為迫切。