高原地區阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征與Hypocretin蛋白的相關性分析

字海靜，杜建平，陳 英，席 瑞，李尚存，高云鹍，肖 瑜

（1云南省楚雄州大姚縣人民醫院內四科 云南 楚雄 675400）

（2云南省楚雄州大姚縣人民醫院辦公室 云南 楚雄 675400）

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征以打鼾、呼吸暫停和白天嗜睡為主要表現。OSA患者睡眠時反復發生上氣道塌陷、阻塞，會造成通氣不足，間歇性缺氧、高碳酸血癥以及睡眠結構紊亂，嚴重者甚至會出現高血壓、心律失常、認知功能障礙等多器官系統損害[1]。國內相關研究顯示，14歲以上男性和女性中OSA患病率分別為4.1%和2.4%，隨著生活方式和生活習慣的改變，這種患病率可能被低估[2]。近年研究顯示OSA發病率在不斷增加。越來越多的研究證實OSA是動脈粥樣硬化、高血壓、心肌梗塞、心律失常、糖尿病等眾多心血管、代謝疾病的獨立危險因素，因此對于早期診斷認識OSA具有重要的意義[3]。Hypocretin又稱Orexin，于1998年首次被發現，Orexins又稱為Hcrts，是下丘腦腹后外側區某種特異神經元合成的前體裂解成兩個成熟的33氨基酸多肽Orexin A和28氨基酸多肽Orexin。本文旨在了解高原地區OSA患者HCRT蛋白的變化情況，并探討OSA患者血HCRT水平變化及其對OSA診斷的價值。

1.資料與方法

1.1 對象

選取我院2019年3月—2020年3月 期 間 收 治的30例OSA患者與健康體檢的30例健康者，分別納入實驗組和對照組。實驗組中，男性17例，女性13例，年齡39～79歲，平均年齡（55.98±3.20）歲；對照組中，男性18例，女性12例，年齡40～78歲，平均年齡（56.43±3.19）歲。經統計學分析比較，兩組人群各項基線資料的比較差異不顯著。入選、排除標準如下。

1.1.1 入 選 標 準 （1）年 齡30～80歲 之 間；（2）行全夜便攜式睡眠監測及睡眠問卷的受試者；（3）簽署知情同意書。

1.1.2 排除標準 （1）有嚴重心腦血管病變、肝腎功能不全等慢性疾病史；（2）有代謝綜合征，胰島素抵抗，糖耐量異常以及糖尿病患者；（3）有甲狀腺基礎疾病的患者；（4）明顯攝食障礙以及營養狀況不良的患者；（5）無法配合監測及回答問題；（6）近3個月外傷、手術史者。

1.1.3 所需的研究材料 基本信息：年齡、身高、體重、性別、職業、生活環境及方式、藥物使用情況等。生物標本：血液標本（10 mL/人次），于便攜式睡眠監測之后的清晨6點空腹抽血。

1.2 測量方法、指標及統計學方法

1.2.1 測量方法 運用酶聯免疫吸附實驗（ELISA）法檢測血清HCRT水平，實驗采用雙抗夾心法，加入樣本和標準品與目標抗體結合，洗去游離成分，加入生物素化的目標抗體形成免疫復合物，加入辣根過氧化物酶標記的親和素，生物素與親和素特異性結合，加入顯色劑，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑顯藍色，加終止液變黃，在450 nm下測OD值，通過繪制標準標準曲線計算出樣本中目標抗體濃度。

1.2.2 操作方法 根據待測樣品和標準品數量計算所需板條數，實驗設空白對照孔，37℃溫箱孵育90 min。洗板4次，注入洗滌液200 mL靜置30 S后甩盡液體，在吸水紙上拍干。加入生物素抗體工作液（100 mL/孔）37℃溫箱孵育60 min。洗板4次，加入辣根過氧化物酶工作液（100 mL/孔）37℃溫箱孵育30 min。洗板4次，加入顯色劑100 mL/孔，避光，37℃溫箱孵育10～20 min。加入終止液100 mL/孔，混勻后即刻測量OD450值。

1.2.3 質控標準 確保試劑配制充分混勻，避免試劑產生大量氣泡。對于不同濃度的標準品，在取樣本時需更換吸頭。在實驗開始前需進行預實驗，若預實驗結果顯示樣本OD值高于標準曲線上限，則應適當稀釋后重新檢測，計算濃度時應乘以相應的稀釋倍數。結果重復性，板間，板內變異系數均＜10%。靈敏度：最低檢測樣本目標抗體劑量小于標準品最低濃度。方法：20個零標準的平均OD值增加兩個標準差，在計算相應濃度。特異性：該試劑盒克檢測天然和重組目標抗體，與其他細胞因子及蛋白均不反應。

1.2.4 統計學方法 使用統計學軟件SPSS 20.0分析HCRT水平與OSA嚴重程度指標，如：睡眠呼吸暫停低通氣指數（AHI）、夜間最低血氧飽和度等的相關性，計量資料經t檢驗、計數資料經χ2檢驗，以P＜0.05表示數據的比較差異有統計學意義。

2.結果

統計學結果顯示，OSA患者血HCRT水平顯著低于正常（P＜0.05）。通過對實驗數據作標準曲線，發現實驗組較正常組低，且與OSA嚴重程度呈負相關，即OSA越嚴重，食欲素蛋白越低，見表1。

表1 實驗組與正常組HCRT水平比較表（±s, ng/mL）

表1 實驗組與正常組HCRT水平比較表（±s, ng/mL）

組別 例數 HCRT水平實驗組 30 0.62±0.31正常組 30 2.92±0.87 t 13.472 P＜0.05

3.討論

OSA為高原地區較為常見的一種睡眠呼吸障礙性疾病，指在睡眠過程中出現的，因為呼吸道反復塌陷、阻塞而造成的反復微覺醒、睡眠結構異常的癥狀，在反復覺醒的過程中患者還伴有不同程度的低氧血癥，屬于典型的典型的缺氧-復氧模式。此外，人體為了應對反復出現的上氣道阻塞，在睡眠時機體會自主增加呼吸肌做功，導致胸腔負壓因此增大；同時，因為呼吸不暢導致的低氧和二氧化碳潴留，將直接影響到中樞交感神經的調控部位，促使交感神經興奮，導致自主神經功能紊亂。基于上述病理機制，患者在臨床上多表現為不同程度的打鼾、夜尿增多、自覺憋氣，且晨起后有明顯的頭痛頭暈、口咽干燥感，長此以往，患者的生活質量、性功能等將因此顯著下降，嚴重者甚至還將伴隨認知功能異常、行為異常。作為一種全身性疾病，OSA對于人體的傷害是巨大的，是導致猝死的危險因素，只有明確OSA的發病機制、探明OSA的進展特點，才能針對性用藥，確保疾病得到有效控制，保證患者的身體健康和生命安全。

目前OSA的發病率呈逐漸上升，數據表明，我國成人人群中，呼吸睡眠疾病的患病率為3.5%～4.8%，而在患有呼吸睡眠疾病的人群中，約有42.7%的人為呼吸睡眠障礙。調查數據表明，我國人口基數大，失眠人口總數接近3億，其中，大約有5 000萬的失眠人口患有呼吸睡眠障礙[4]。以往研究證實，睡眠呼吸暫停綜合征會進一步加重呼吸衰竭，使得血管意外、心肌梗死、高血壓及內分泌代謝性疾病等發生率上升，嚴重威脅著人民的身體健康。導致OSA原因眾多，除了常見的肥胖、年齡以外，OSA還可通過集體炎癥、氧化應激反應、自主神經功能障礙等途徑發生。此外，凝血系統和抗凝系統的異常也是OSA的重要致病機制，研究認為凝血系統和抗凝系統與慢性阻塞性肺疾病（COPD）、支氣管哮喘、支氣管炎等呼吸道疾病的發生和發展密切相關，而呼吸道疾病又將進一步增加OSA的發生率。

本文結果發現OSA與Hypocretin蛋白具有相關性，OSA患者的HCRT水平顯著低于正常人（P＜0.05）。對此，通過檢測OSA患者血HCRT水平變化對OSA及時診斷具有一定幫助。

綜上所述，現代社會工作節奏的不斷加快，導致睡眠相關疾病逐漸增多[5]。睡眠呼吸監測技術在大姚區域內無人開展，此技術操作簡便、技術成熟、使用性廣，設備投入成本不大，可用于阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征的診斷初篩，可提早發現、提早治療。