菌毒清膠囊制備工藝及質量研究*

李卓亞，李運景，唐 蕾，趙偉國，梁鎮標

（廣東省中山市人民醫院，廣東 中山 528400）

菌毒清顆粒（粵藥制字Z20070531）是由中山市人民醫院研制的中藥復方制劑。筆者參與了探索菌毒清顆粒穩定性和分散片處方優選的前期工作[1－2]。研究發現，菌毒清顆粒具有滋陰降火、涼血利咽等功效，對流行性感冒、咽炎、EB病毒陽性患者有較好療效[3－7]。動物研究顯示，菌毒清提取物對鼻咽癌細胞CNE－2Z荷瘤裸鼠的病情有改善作用[8]。但菌毒清顆粒蔗糖含量較大，在潮濕條件下易結塊。硬膠囊劑可掩蓋藥物的不良氣味，提高藥物的穩定性和生物利用率，減弱藥物的刺激性[9－12]，且制備工藝成熟。本研究中參考了其他中藥制劑硬膠囊制備工藝[13－15]，將菌毒清顆粒改造為藥效更理想、服用與攜帶更方便的硬膠囊劑，旨在擴大該藥的使用人群，提高患者的用藥依從性。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1200型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；超聲儀（天津市奧特賽恩斯有限公司）；AUW220D型電子分析天平（日本Shimadzu公司）；電熱鼓風干燥箱（上海實驗儀器廠有限公司）；XL－MINI型旋轉式制粒機（常州市海江藥化機械廠）。

1.2 試藥

玄參（批號為20161115）、茜草（批號為20161012）、板藍根（批號為20161013）、丹參（批號為20161022）、金銀花（批號為20160906）、穿心蓮（批號為20161207）均購自廣州康圣藥業有限公司；微晶纖維素（河南正弘藥用輔料有限公司，批號為170803）；玉米淀粉（批號為170706）、麥芽糊精（批號為171106），均購自安徽山河藥用輔料有限公司；乳糖（批號為161215）、糖粉（批號為171210）、羧甲基淀粉鈉（批號為160922）、交聯羧甲基纖維素鈉（批號為170113），均購自湖州展望藥業有限公司；滑石粉（南昌白云藥業有限公司，批號為20161021）；乙醇（天津市永大化學試劑有限公司，批號為160625）；菌毒清膠囊（自制品，批號分別為20190706，20190713，20190720）；丹酚酸B對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111562－201917，含量＞98%），甲醇、乙腈為色譜純，甲酸為分析純，水為雙蒸水。

2 方法與結果

2.1 制備工藝

將玄參、穿心蓮、茜草、板藍根、丹參和金銀花分別粉碎成粉末。穿心蓮粉末用適量85%乙醇浸潤、攪勻后浸泡24 h，再以15倍量的85%乙醇滲漉提取，收集合并滲漉液，減壓回收乙醇至適量。其余5味藥加8倍量水煎煮1.5 h，煎2次，濾過，合并煎液，濃縮成稠膏，與穿心蓮浸膏充分混勻，置70℃烘箱內干燥0.5 h，稱取處方量的浸膏和微晶纖維素混合后拌勻，以適量的90%乙醇溶液為潤濕劑制軟材，18目篩制粒，70℃熱風干燥約1.5 h，測定含水量小于6%后冷卻，加適量交聯羧甲基纖維素鈉及滑石粉后混勻，先過20目篩去除粗粉，再過80目篩去除細粉，以顆粒外觀、吸濕率、休止角和膠囊的崩解時限為考察指標，進行工藝優選。

2.2 制劑工藝條件篩選

填充劑種類：通過查閱相關參考文獻和預試驗，選用微晶纖維素、玉米淀粉、麥芽糊精、糖粉和乳糖為填充劑，其余制備工藝不變，測定其吸濕率[16]。當選擇玉米淀粉和微晶纖維素作為填充劑時，顆粒外觀和吸濕性均符合要求，故選用玉米淀粉與微晶纖維素作為填充劑做進一步優化。詳見表1。

表1 填充劑種類Tab.1 Selection of filler types

崩解劑種類：以交聯羧甲基纖維素鈉和羧甲基淀粉鈉為崩解劑，其余制備工藝不變，測定其崩解時限[17]和吸濕率。結果可優選交聯羧甲基纖維素鈉崩解時限為320 s，吸濕率為5.19%，羧甲基淀粉鈉崩解時限為440 s，吸濕率為9.71%。

崩解劑和填充劑用量：以微晶纖維素和浸膏用量的比值為因素A，以玉米淀粉和浸膏用量的比值為因素B，以交聯羧甲基纖維素鈉占處方百分率為因素C，因素水平見表2。以吸濕率為考察指標，采用L16（45）正交試驗表進行試驗，結果見表2及表4。可見，各因素對處方影響的大小順序為A＞B＞C，其中A有顯著性影響，結合生產實際情況最優配方選擇A2B1C2，即微晶纖維素和浸膏用量的比值為3∶1，交聯羧甲基纖維素鈉占處方的5%。以微晶纖維素為填充劑，以交聯羧甲基纖維素鈉為崩解劑，用滑石粉為潤滑劑，以90%乙醇為潤濕劑制備3批顆粒，測定吸濕率和觀察顆粒外觀，結果批號為20190706，20190713，20190720的樣品均為棕黃色顆粒，吸濕率分別為5.26%，5.28%，5.22%。

表2 因素水平表Tab.2 The levels of factors

表4 方差分析結果Tab.4 Results of the ANOVA

潤濕劑：以體積分數為85%，90%，95%的乙醇作潤濕劑，其余制備工藝不變，測定其崩解時限。結果，顆粒外觀分別為長條狀、棕黃色、棕黃色，崩解時限分別為284 s，320 s，356 s。故優選90%乙醇作潤濕劑。

潤滑劑：以4%，5%，6%的滑石粉作潤滑劑，其余制備工藝不變，測定其休止角[18]。結果分別為35.1°，33.4°，31.2°，差異不大，故優選4%滑石粉作潤滑劑。

膠囊殼型號：測定3批樣品的平均堆密度為0.83 g/mL，每粒膠囊裝0.40 g，所占體積約0.48 mL，與1號膠囊（0.50 mL）接近，故選用1號膠囊殼。

表3 正交試驗設計及結果Tab.3 Design and results of the orthogonal test

2.3 處方工藝驗證

基于上述篩選和優化，菌毒清膠囊的最優處方工藝為：以1 000粒投料量計算，菌毒清浸膏91 g，微晶纖維素273 g，交聯羧甲基纖維素鈉20 g，滑石粉16 g。浸膏在70℃條件下干燥0.5 h，與微晶纖維素混合，拌勻。以適量的90%乙醇為潤濕劑制軟材，18目篩制粒，70℃熱風干燥約1.5 h，測定干顆粒含水量小于6%，冷卻后加入交聯羧甲基纖維素鈉以及滑石粉混合均勻，先過20目篩除去粗粉，再過80目篩除去細粉，整粒，在相對濕度小于60%環境中裝入1號膠囊。檢測3批樣品，結果各項指標均符合2015年版《中國藥典（四部）》對膠囊劑的質量要求[19]，表明該工藝可行。詳見表5。

表5 工藝驗證試驗結果Tab.5 Results of the validation test of the technology

2.4 丹酚酸B含量測定

色譜條件：色譜柱為Eclipse XDB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相為甲醇－乙腈－0.5%甲酸水溶液（28∶10∶62，V/V/V）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為286 nm；柱溫為25℃；進樣量為10μL。

樣品處理：取樣品內容物2.0 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加75%甲醇適量，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理30 min，用75%甲醇定容，搖勻，濾過，即得。

方法學考察：精密度、穩定性、重復性試驗的RSD均小于2.0%，符合規定。

樣品含量測定：經測定，批號20190706，20190713，20190720的樣品中丹酚酸B含量分別為0.213，0.186，0.203 mg/g，平均0.201 mg/g。

3 討論

預試驗中，曾采用正交試驗法考察乙醇體積分數、乙醇用量、提取時間、浸泡時間對處方中丹酚酸B含量的影響，結果發現丹酚酸B含量均太低，其為丹參中主要水溶性活性成分[20]，且其含量較高，故選用正式研究中的提取工藝并以丹酚酸B為含量測定指標。以微晶纖維素和浸膏用量比值為3∶1，2∶1，1∶1，0進行考察，結果發現比值為3∶1時制備效果最好，于是加大微晶纖維素和浸膏用量比為4∶1時，發現仍然是3∶1時制備效果最佳，故選擇微晶纖維素和浸膏用量比值為3∶1。同時發現，相對濕度超過60%時，顆粒含水量明顯增多，因此膠囊應在相對濕度小于60%的環境中分裝和保存。曾嘗試以甲醇－乙腈－5%甲酸水（31∶10∶59，V/V/V）[21]為流動相，但分離效果欠佳，改用正交試驗的流動相，結果較滿意。

菌毒清顆粒是我院用量較大的驗方制劑，但大量蔗糖的加入嚴重影響了該藥的適用人群，菌毒清膠囊可有效避免上述缺點。本方法可行性較強，重復性較好，為菌毒清膠囊的進一步研究奠定了理論基礎。