紫外-可見分光光度法測(cè)定濃維磷糖漿中總磷量

★ 萬(wàn)安鳳（廣州白云山星群〈藥業(yè)〉股份有限公司 廣州 510288）

濃維磷糖漿收載于《國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》中，適用于植物神經(jīng)功能紊亂引起的頭暈?zāi)垦！⒕衿＞胍约暗土籽Y。處方中含有甘油磷酸鈉，咖啡因，維生素，磷酸，煙酸。其中甘油磷酸鈉、磷酸都含有磷酸根離子［1］。以前的標(biāo)準(zhǔn)中，規(guī)定本品含磷量按［PO43-］計(jì)算，不得少于0.343 %（g/mL）。由于該標(biāo)準(zhǔn)是采用目試比色進(jìn)行測(cè)定，誤差較大。本研究建立了紫外-可見分光光度法［2］，對(duì)濃維磷糖漿中的總磷量進(jìn)行含量測(cè)定，取得了較滿意的結(jié)果。具體試驗(yàn)方法及結(jié)果說明如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器UV-2401PC型紫外-可見分光光度計(jì)（日本島津）；電爐；TDCC-1/0.5型調(diào)壓變壓器。

1.2 試劑高氯酸（GB623-1992，分析純），廣州化學(xué)試劑廠提供；硝酸（GB625-1989，分析純），廣州化學(xué)試劑廠提供；鉬酸銨（GB657-93 XK 13-201 9043，分析純），天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心提供；釩酸銨（HG3-941-76，分析純），廣東西隴化工廠提供。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品磷酸二氫鉀（GB1274-77，分析純，含量不少于99.5%），廣州化學(xué)試劑廠提供。

1.4 供試品濃維磷糖漿，由本公司提供（批號(hào)：BK90023、BK90031、BK90040、DK90010、DK90014、DK90019、DK90025、DK90028、DK90029、DK90031）。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備精密量取供試品溶液2 mL，置125 mL凱氏燒瓶中，加硝酸30 mL、高氯酸10 mL，用直火緩緩加熱至黃煙逸盡，繼續(xù)加熱至冒白煙（不得蒸干）溶液基本無(wú)色［3］，冷卻，加水30 mL，加熱煮沸，冷卻，用水轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2 磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取在105 ℃干燥至恒重的磷酸二氫鉀4.393 9 g，置1 000 mL量瓶中，加硝酸3 mL，用水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置500 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻［4］，即得。（每1 mL含磷20 mg）。

2.3 鉬酸-釩酸銨試劑的制備取20 g鉬酸銨，加入50 ℃的水400 mL使溶解，放冷，備用。另取釩酸銨1 g，加入熱水300 mL使溶解，放冷，加入硝酸140 mL，邊加邊攪拌，放冷。將鉬酸銨溶液加入釩酸銨溶液中，加水至1 000 mL。

2.4 陰性對(duì)照品溶液的制備按處方及制法，制成缺50 %液狀甘油磷酸鈉、磷酸的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品2 mL，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.5 線性范圍考察精密量取磷標(biāo)準(zhǔn)溶液2、5、10、15、20、25 mL,分別置50 mL量瓶中，加入鉬酸-釩酸銨試劑10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置10 min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在400 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以磷濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)、吸光度A值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在磷濃度0.8～10.0 mg/mL范圍內(nèi)，與鉬酸-釩酸銨試劑顯色后的吸光度A值呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為Y=0.086 7X-0.002 7（r=0.999 9）。

2.6 重復(fù)性精密量取供試品溶液2 mL，共6份，分別置125 mL凱氏燒瓶中，加硝酸30 mL、高氯酸10 mL，用直火緩緩加熱至黃煙逸盡，繼續(xù)加熱至冒白煙（不得蒸干）溶液基本無(wú)色，冷卻，加水30 mL，加熱煮沸，冷卻，用水轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取硝酸30 mL、高氯酸10 mL，同法制得消煮空白溶液。精密量取供試品溶液與消煮空白溶液各10 mL，分別置50 mL量瓶中，分別加入鉬酸-釩酸銨試劑10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置10 min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在400 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以供試品溶液吸光度減去消煮空白溶液的吸光度，得磷吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液含磷量，計(jì)算，即得。結(jié)果表明，本法測(cè)定平均總磷量1.206 mg/mL，RSD=0.142 %（n=6），重現(xiàn)性良好。

2.7 精密度精密量取磷標(biāo)準(zhǔn)溶液10 mL，共6份，分別加入鉬酸-釩酸銨試劑10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置10 min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在400 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果表明，平均吸光度A值為0.353，RSD=1.596 %（n=6），精密度良好

2.8 穩(wěn)定性精密量取同一批供試品溶液（批號(hào)：DK90010）2 mL，照前述方法制成供試品溶液，取供試品溶液10 mL，加入鉬酸-釩酸銨試劑10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置10 min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在400 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，繼續(xù)放置1、2、3、4、5、6、7、8 h后，再在400 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果表明，供試品溶液顯色在放置0～8 h內(nèi)，平均吸光度A值為0.452，RSD=0.452 %（n=9），穩(wěn)定性良好。2.9 加樣回收試驗(yàn) 精密量取同一批供試品溶液（批號(hào)：DK90010）1 mL，共6份，分別置125 mL凱氏燒瓶中，分別加入磷酸二氫鉀溶液（精密稱取磷酸二氫鉀0.561 9 g，置100 mL量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻）1 mL，加硝酸30 mL、高氯酸10 mL，用直火緩緩加熱至黃煙逸盡，繼續(xù)加熱至冒白煙（不得蒸干）溶液基本無(wú)色，冷卻，加水30 mL，加熱煮沸，冷卻，用水轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取硝酸30 mL、高氯酸10 mL，同法制得消煮空白溶液［5］。精密量取供試品溶液與消煮空白溶液各10 mL，分別置50 mL量瓶中，分別加入鉬酸-釩酸銨試劑10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置10 min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在400 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以供試品溶液吸光度減去消煮空白溶液的吸光度，得磷吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液含磷量，分別計(jì)算回收率。結(jié)果表明，本法測(cè)定總磷量，平均回收率101.90 %，RSD=1.691 %（n=6），回收率良好。

2.10 專屬性試驗(yàn)精密量取供試品溶液、磷標(biāo)準(zhǔn)溶液、陰性對(duì)照品溶液各10 mL，分別置50 mL量瓶中，加入鉬酸-釩酸銨試劑10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置10 min，以相應(yīng)的試劑為空白［6］，照紫外-可見分光光度法在360～500 nm波長(zhǎng)間掃描，結(jié)果，供試品溶液及磷標(biāo)準(zhǔn)溶液在400 nm波長(zhǎng)處有吸收，陰性對(duì)照品溶液在400 nm波長(zhǎng)處未有干擾。

2.11 供試品含量測(cè)定結(jié)果取十批供試品（批號(hào)分 別 為BK90023、BK90031、BK90040、DK90010、DK90014、DK90019、DK90025、DK90028、DK90029、DK90031），分別照前述方法測(cè)定總磷量，結(jié)果測(cè)得10批濃維磷糖漿含總磷量為1.204 mg/mL，RSD=2.56 %（n=10）。結(jié)果見下表1。

表1 十批供試品含量測(cè)定結(jié)果

按處方量計(jì)算，濃維磷糖漿含總磷量應(yīng)為1.204 mg/mL，根據(jù)以上十批樣品的總磷量測(cè)定結(jié)果，建議控制濃維磷糖漿含總磷量應(yīng)為1.08～1.33 mg/mL。

3 討論

3.1 硝酸及高氯酸用量的選擇精密量取同一批供試品溶液2 mL，共三份，分別加不同量的硝酸、高氯酸（15 mL、5 mL；30 mL、10 mL；45 mL、15 mL），照供試品溶液的制備方法操作。結(jié)果：取供試品溶液2 mL，加入硝酸15 mL、高氯酸5 mL消煮后，溶液燒干，呈黑色塊狀物。說明硝酸和高氯酸加入量少，消煮不完全。加入硝酸30 mL、高氯酸10 mL消煮后，呈無(wú)色透明狀溶液，效果較好。說明硝酸和高氯酸加入量足夠使消煮完全。加入硝酸45 mL、高氯酸15 mL消煮后，呈無(wú)色透明狀溶液，效果較好。說明硝酸和高氯酸加入量足夠，消煮完全。以上試驗(yàn)結(jié)果表明，取供試品溶液2 mL，加入硝酸30 mL、高氯酸10 mL進(jìn)行消煮，最合適。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取鉬酸-釩酸銨試劑10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，放置10 min。以純化水為空白，照紫外-可見分光光度法在360～500 nm波長(zhǎng)間掃描，結(jié)果，在400 nm波長(zhǎng)處雖沒有吸收峰，但是測(cè)得吸光度值為0.002。因此，在供試品測(cè)定時(shí)，應(yīng)取鉬酸-釩酸銨試劑10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，放置10 min，作為空白。

精密量取供試品溶液及磷標(biāo)準(zhǔn)溶液各10 mL，分別置50 mL量瓶中，加入鉬酸-釩酸銨試劑10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置10 min。以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法在360～500 nm波長(zhǎng)間掃描，結(jié)果，供試品溶液及磷標(biāo)準(zhǔn)溶液在400 nm波長(zhǎng)處有吸收峰，因此選擇400 nm為本品的測(cè)定波長(zhǎng)。