維吾爾藥復方羅布麻合劑質量標準研究

汗克孜.吐爾遜 趙廷勇 熱孜萬古麗·阿木提 姜湘英 帕爾哈提.吐爾遜 沙代提古麗·買合蘇提

摘要：目的：建立復方羅布麻合劑的質量標準。方法：采用TLC法鑒別金絲桃苷;采用HPLC法檢測金絲桃苷含量。色譜柱：WondaSil C18（150 mm×4.6 mm 5 μm）;流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（17：83）;柱溫：30℃;流速：1.0 ml＼min;檢測波長：360 nm;結果：薄層色譜法對金絲桃苷的鑒別效果好，重現性好，陰性對照無干擾。高效液相色譜法測定金絲桃苷的含量，其線性范圍8.4825～127.2375 μg＼ml（r=0.99998），回收率為103.2%（RSD=1.9%）。結論：薄層色譜法操作簡單、準確、重現性好，可以用于復方羅布麻合劑的質量控制。

維吾爾醫藥學是中華醫藥學寶庫的璀璨明珠，她自成體系，獨樹一幟，具有顯著的地域特色和民族特征，是經長期實踐證明能戰勝疾病、維護健康的有效利器。維吾爾藥復方羅布麻合劑為庫爾勒市中醫醫院（庫爾勒市第三人民醫院）（原庫爾勒市維吾爾醫醫院）驗方，由羅布麻葉、羅布麻花、菟絲草、對葉大戟果、甘松、牛舌草等6味藥材組成，具有利尿消腫，改善血液循環作用，臨床上主要用于高血壓、動脈硬化。以現配現用形式少量供應臨床，多年臨床使用過程中以其明顯的療效得到廣大患者好評。復方羅布麻合劑無質量標準，因此生產過程中很難保證其技術指標的穩定性。本研究通過對復方羅布麻合劑中的主要成分金絲桃苷進行研究，采用TLC法鑒別金絲桃苷，采用HPLC法測定金絲桃苷的含量，可以用于復方羅布麻合劑的質量控制，并通過實驗確定穩定性、質量，為取得制劑批準文號做前期研究工作提供科學依據。

1儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（LC-20AT，日本島津），包含自動進樣器和LC Solution色譜數據工作站，紫外檢測器;數控超聲波清洗器（KQ-500 DE）;電子分析天平（XS205 DU）;半自動薄層點樣儀（LinoMAT5）;薄層照相系統（CAMAG TLC Visualizer）。

1.2 材料

復方羅布麻合劑3批（批號：20180910，20180912，20180914），庫爾勒市中醫醫院（庫爾勒市第三人民醫院）（原庫爾勒市維吾爾醫醫院）;對照品：金絲桃苷（批號：111521-201708，供含量測定用，含量為95.1%），購于中國食品藥品檢定研究院;硅膠G薄層板（天津思利達科技有限公司，批號170612），乙腈（色譜純，Fisher公司，美國），水為超純水（自制），其他試劑均為分析純。

2鑒別

復方羅布麻合劑中金絲桃苷薄層色譜鑒別。按《中國藥典》2015年版四部通則（0502）下方法，取本品20 ml，置分液漏斗中，用乙酸乙酯提取3次，每次30 ml，合并提取液，蒸干，殘渣加1 ml甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取金絲桃苷對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液和對照品溶液各10 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。

3含量測定

復方羅布麻合劑中金絲桃苷含量照高效液相色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則（0512）進行測定。

3.1 色譜條件的確定與系統適用性實驗

填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（17：83），檢測波長為360 nm。按金絲桃苷峰計算理論板數應不低于3000，取對照品溶液、供試品溶液各20 ?l，分別注入液相色譜儀，金絲桃苷的理論塔板數均大于3000，分離度大于1.5，符合要求。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取金絲桃苷對照品適量，精密穩定，加甲醇制成每1 ml含100 μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備

取本品10 ml，加水10 ml混勻，用乙酸乙酯提取5次（40 ml、30 ml、30 ml、30 ml、30 ml），合并提取液，85℃水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至20 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.4 陰性對照溶液的制備

陰性對照不含羅布麻葉、羅布麻花、菟絲草，其他成分均按復方羅布麻合劑的處方比例及制備方法配制，陰性對照溶液制備方法同供試品溶液。

3.5 標準曲線的制備

分別精密吸取上述金絲桃苷（濃度為169.65 μg/ml）對照品儲備液，精密量取對照品儲備液1，2，5，10，15 ml分別置于20 ml的量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混合均勻，即得8.4825，16.9650，42.4125，84.8250，127.2375 μg/ml等系列質量濃度的對照品溶液。按照色譜條件，對系列質量濃度的對照品溶液取20 μl體積進樣，記錄金絲桃苷色譜峰的面積。以金絲桃苷對照品系列質量濃度x（μg/ml）對金絲桃苷峰面積值y進行線性回歸，得線性回歸方程y=ax+b（a=41538.2，b=-7866.16，r=0.99998），結果表明金絲桃苷質量濃度在8.4825～127.2375 μg/ml范圍內與峰面積線性關系良好。

3.6 儀器精密度試驗

金絲桃苷對照品溶液（濃度為20 μg/ml）分別進樣5次，每次20 μl，金絲桃苷峰面積值分別為875918、873750、870893、871695、871636，平均為872778，RSD%為0.2%，結果表明儀器精密度良好。

3.7 陰性對照試驗

分別取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照溶液20 μl進樣，記錄各樣品色譜圖，結果如圖所示，在對照品色譜峰保留時間處陰性對照的色譜圖中無色譜峰出現，表明陰性樣品無干擾。

3.8 重復性試驗

取同一批復方羅布麻合劑樣品6份，按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，按上述方法測定金絲桃苷的含量，結果得出供試品中金絲桃苷的含量分別為38.68 μg/ml，39.50 μg/ml，40.09 μg/ml，40.24 μg/ml，39.99 μg/ml，39.93 μg/ml，平均含量為39.74 μg/ml，計算RSD值為1.4%，結果表明方法重復性良好，HPLC色譜圖。見圖1。

3.9 加樣回收率試驗

精密量取已知含量的同批復方羅布麻合劑樣品（樣品金絲桃苷含量39.7 μg/ml）6份各5.0 ml，分別精密加入一定質量濃度（13.69 μg/ml）的對照品溶液3 ml，按供試品項下方法操作，制備供試品溶液，按色譜條件分別進樣20 μl測定，計算回收率，平均回收率為103.1%，RSD為1.9%。見表1。

3.10 供試品穩定性試驗

取1號樣品，按含量測定項下的方法制成供試品溶液，分別取20 μl于配制后0，2，4，8，16，24 h測定金絲桃苷峰面積積分值，分別為817219，820226，830432，827049，833384，835693，平均值為827334，計算RSD值為0.9%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

3.11 空白干擾試驗

在各自色譜條件下，分別以流動相與甲醇作為空白供試品溶液。從液相色譜圖可看出，空白供試品溶液與對照品溶液在相同時間無相同的保留峰，對金絲桃苷的含量測定無干擾。

3.12 樣品的測定

分別取3個不同批次的復方羅布麻合劑樣品，按上述方法將每批樣品制得編號為1，2和3的樣品溶液，經高效液相法測定，計算得出金絲桃苷的峰面積。根據標準曲線方程，計算樣品中金絲桃苷的含量，結果3批樣品溶液中金絲桃苷的平均質量濃度分別為38.68，39.50，40.09 μg/ml。

4討論

4.1 流動相的確定

除了采用含量測定項下的流動相，還使用了乙腈-0.2%磷酸溶液（15：85）為流動相;檢測波長為256 nm。實驗結果表明，含量測定項下的流動相是測定復方羅布麻合劑中金絲桃苷含量的較為理想的流動相。

4.2 色譜柱的選擇

利用WondaSil C18中藥分析專用柱，柱長150 mm與250 mm及島津Shim-Pack VP-ODS色譜柱分別比對檢測，結果表明，三種色譜柱的分離效果都很好。柱長150 mm的WondaSil C18中藥分析專用柱分離效果好，分離相對較短。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中國藥典2015年版[M].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2015.

[2]新疆維吾爾自治區食品藥品監督管理局.新疆維吾爾自治區中藥維吾爾藥飲片炮制規范2010年版[S].一部.新疆：新疆人民衛生出版社，2010.