LC-MS/MS 測定蔬菜中苯醚甲環唑殘留的研究

馮 濤 阮世勇 羅苑銘 許貞侃 陶 森

（陽江市檢測檢驗中心，廣東陽江 529500）

農藥具有除草、防治病蟲害、提高作物產量等作用，農藥的不規范使用，會使農產品存在農藥殘留超標的風險，對人體和環境造成危害。為規范農藥的使用，國家衛健委等部門頒布了農藥殘留安全標準，農業等部門一直在加強農藥殘留的檢測。因此研究農藥殘留檢測技術，對環境和人體的健康與安全具有重要意義。本試驗以苯醚甲環唑為研究對象，大白菜為試驗樣品，采用試驗室經典的提取凈化方法對樣品進行前處理，通過對比回收率以選取出最優的前處理方法，研究結果可為蔬菜中苯醚甲環唑的檢測提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑、耗材與儀器

苯醚甲環唑標準品，SB05-170-2008，農業部環境保護科研所；乙腈、丙酮、正己烷、甲酸、甲醇、二氯甲烷，均為色譜純，德國默克公司；乙酸銨，色譜純，上海安普；氯化鈉，分析純，廣州試劑；QuEChERS 凈化柱、氨基凈化柱、弗羅里硅凈化柱、C18凈化柱，上海安普科學儀器有限公司；0.22 μm 微孔濾膜，天津市津騰實驗設備有限公司。

LCMS－8050 高效液相色譜串聯質譜儀，日本島津公司；31-8KS 離心機，美國Sigma 公司；MFV-24 氮吹儀，廣州得泰儀器科技有限公司；KS130 振蕩器，德國IKA 公司；KQ2200DE 超聲儀，昆山超聲儀器有限公司；T25 均質機，德國IKA 公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 儀器參數

1.2.1.1 液相色譜參數

色譜柱：C18（75 mm×3.0 mm，2.7 μm）；流動相：A 相為2 mmol 乙酸銨-0.1%甲酸水溶液，B 相為乙腈；流速：0.4 mL/min；柱溫：40 ℃；采用梯度洗脫，洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.2.1.2 質譜參數

離子源：ESI；離子化方式：ESI+；離子源溫度：300 ℃；加熱氣：10 L/min；霧化氣：3.0 L/min；干燥氣：10 L/min；DL 管溫度；250 ℃；定量離子對；405.90>251.00 CE -21V；定性離子對405.90 >337.00 CE-21V。

1.2.2 方法學驗證

配制質量濃度為0 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L 的系列苯醚甲環唑標準溶液進行測定，驗證其線性，對50 μg/L 標準溶液重復測定6 次，記錄峰面積計算RSD 表示精密度，記錄10 μg/L 標準溶液儀器測定的信噪比，評價儀器檢出限；在提取凈化試驗的基礎上進行重現性試驗和加標回收試驗，評價檢測方法的精密度和準確度。

1.2.3 提取凈化方法篩選

選取QuEChERS 凈化柱、氨基凈化柱（NH2）、弗羅里硅凈化柱（Florisil）、C18凈化柱4 種試驗室常用凈化小柱，向陰性樣品基質溶液加入10 mg/L苯醚甲環唑標準儲備液0.04 mL 定容至10 mL，制備成40 μg/L 的基標準溶液，取2.0 mL 基質標準溶液分別過4 種凈化柱，測定基質凈化液濃度，計算回收率，通過回收率評價凈化效果。

在凈化試驗的基礎上，選取振蕩、超聲、均質3 種常見的提取方法，對基質加標樣品分別提取，經凈化后上機測定，通過對比回收率評價提取效率。

2 結果與分析

2.1 方法學驗證試驗結果

以苯醚甲環唑標準溶液質量濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標進行一次線性回歸擬合，線性方程為y=27 679x -17 320，R2=0.999，表明苯醚甲環唑在質量濃度為0 μg/L～200 μg/L 范圍內線性良好，10 μg/L 標準溶液信噪比S/N=2 876，遠大于3，儀器檢出限低于10 μg/L，滿足分析要求。

儀器測定的穩定性是檢測方法穩定有效使用的重要方面，影響液相色譜-串聯質譜儀測定穩定性的因素主要有液相端的色譜條件，包括柱溫、柱壓、流動相pH、流動相比例等，通過影響分離度和出峰時間影響測定穩定性；質譜端離子化條件，包括霧化氣溫度、離子源溫度、加熱氣溫度等。本試驗采用重復測定的方法評價儀器測定的穩定性，對50 μg/L 苯醚甲環唑標準溶液重復測定6 次，測定結果見表2。

表2 儀器測定穩定性試驗測定結果

由表2 可知，峰面積RSD=1.01%，表明儀器檢測穩定性良好。

2.2 凈化柱篩選

不同凈化柱處理試樣的回收率如圖1 所示。

由圖1 可知，QuEChERS 凈化效果最好，QuEChERS 小柱中包含Mg2SO4、PSA、GCB、C18等多種凈化填料，對色素、脂肪、蛋白質、纖維等均具有良好的凈化效果；C18凈化柱凈化效果最差，回收率僅為19.08%，可能的原因為苯醚甲環唑在C18凈化小柱上保留能力差，凈化過程中流失嚴重。因此本試驗選用QuEChERS 凈化小柱，該凈化方法回收率高、操作簡單、高效，適用于苯醚甲環唑檢測中的凈化。

2.3 提取方法的選擇

在凈化試驗的基礎上，采用振蕩、超聲、均質3 種提取方法進行試驗，基質加標樣品分別采用3種方法提取后，均使用QuEChERS 凈化上機，通過對比回收率選取最佳提取方法，試驗結果見圖2。由圖2 可知，3 種提取方法的回收率在77.30%～91.26%之間，均滿足農殘檢測回收率應在70%～120%的要求。其中振蕩提取效率最高，但所需時間一般為30 min，比超聲和均質時間長，對于回收率要求高的檢測任務可采取該方法。均質提取回收率最低，但時間最短，2 min 內即可完成提取操作，適用于食物中毒應急檢測等對時效性要求高的檢測任務。

圖2 不同提取方法回收率

2.4 重復性試驗

重復性試驗是評價檢測方法穩定性的有效方式，取大白菜陰性樣品6 份，每份10 g，加入10 mg/L 的標準儲備液0.1 mL，制備0.1 mg/kg 的加標樣品，向加標樣品中加入10 mL 乙腈，5 g 氯化鈉，采用振蕩提取，QuEChERS 凈化方法對加標樣品進行前處理，上機測定，樣品溶液理論值為100 μg/L，重復試驗6 次，記錄測定濃度和峰面積，計算測定結果RSD，衡量檢測方法精確度，試驗結果見表3。

表3 重復性試驗測定結果

由表3 可知，測定結果中過半數據結果大于理論值，回收率高于100%，可能是基質效應引起的，即使用該方法測定大白菜中的苯醚甲環唑時基質會增大苯醚甲環唑在儀器上的響應值，但基質效用小于10%，影響不顯著，通過使用空白基質溶液配制標準曲線的方式可以控制基質效用。

2.5 回收率試驗

取陰性樣品7 份，其中1 份為空白對照，其余6 份分成2 組，每組3 份，按低、中、高三水平加標，加標樣品4 ℃冷藏過夜使農藥同基質充分接觸。取出樣品使之恢復至室溫，加20 mL 乙腈，5 g氯化鈉，10 000 r/min 均質提取30 s，離心取上清液至QuEChERS 凈化小柱中，振搖1 min，8 000 r/min離心10 min，取上清過孔徑0.22 μm 微孔濾膜上機測定。加標回收試驗結果如表4 所示。

表4 加標回收試驗測定結果

由表4 可知，低、中、高三水平回收率為77.59%～96.63%，回收率表現出隨加標濃度增大而增大的趨勢，組內平行樣品平行性良好，可滿足農殘檢測要求。

3 結論

試驗結果表明，蔬菜中苯醚甲環唑的測定中QuEChERS 凈化效果好、效率高，3 種提取方法沒有顯著差異，振蕩提取方法的回收率略高于其他2種，對于大白菜中的苯醚甲環唑最優的前處理方式為振蕩提取、QuEChERS 凈化。通過重復性試驗和加標回收試驗可知，運用LC-MS/MS 法測定蔬菜中的苯醚甲環唑，具有靈敏度高、精密度良好，檢測結果準確高效的優點，能夠滿足國家規定的要求。