抗鴿巴氏桿菌的中藥有效成分篩選

令狐遠鳳 楊琦 張寶太 廖正波 段世宇 張家莉

（貴州大學動物科學學院 550025）

1 材料與方法

1.1 試驗材料

鴿巴氏桿菌，菊芋、苦參堿、銀杏葉黃酮粗提物、蘆薈大黃素、硫酸黃連素、鹽酸小檗堿、艾葉提取物、白頭翁提取物、黃芩苷，培養基等。

2 方法

2.1 中藥有效成分的抑菌試驗

提前制備好藥敏紙片，用微量移液器吸取鴿巴氏桿菌菌液37℃24h 的培養物50ul，用涂布器將培養物在加有血清的營養瓊脂培養基上均勻分布，放置1h，貼好藥敏紙片，每個平板貼放4 種不同藥敏片，平板中間放置乙醇浸泡的藥敏片作為對照。最后將平板放在恒溫培養箱中37℃培養18h，取出后用直尺測量抑菌圈的直徑。抑菌圈直徑≥20mm 為極敏，15～20mm為高敏，10～14mm 為中敏，≤10mm 為低敏。

采用試管兩倍稀釋法測定9 種中藥液對鴿巴氏桿菌的體外最小抑菌濃度。取8 支滅菌試管，分別加液體血清培養基2ml，第1 管加2ml 硫酸黃連素中藥液，吹吸3 次，讓試管內液體均勻混合后再吸取2ml 加至第2 管，同樣步驟，直至第7 管，第7 管吸取2ml 棄去，使之依次倍比稀釋，然后在1～8 號試管用微量移液器取活菌數較高范圍內計算好濃度好的鴿巴氏桿菌菌液50ul，第8 管不加中藥液，作為空白對照。將8 支試管置于37℃溫箱培養24h。取出試管仔細觀察細菌的生長情況，與8號不加中藥液的空白對照組的濁度相比較，判斷細菌是否在試管中生長，最低濃度的是以肉眼是否能觀察到細菌生長來被判定，沒有細菌生長則為中藥的最小抑菌濃度（MIC）。

3 結果

由表1 可知，硫酸黃連素、鹽酸小檗堿、艾葉提取物、苦參堿、黃芩苷對鴿巴氏桿菌有一定的抑菌作用，蘆薈大黃素、菊芋、白頭翁提取物、銀杏葉黃酮粗提物對鴿巴氏桿菌沒有抑菌效果。幾種有抑菌效果的中藥液從高到低依次為硫酸黃連素＞鹽酸小檗堿＞艾葉提取物＞黃芩苷＞苦參堿。

表1 9 種中藥液對鴿巴氏桿菌的抑菌作用（單位：mm）

由表2 可知，硫酸黃連素的1 號和2 號試管內無細菌生長，3～8 號試管涂布的平板有菌落長出，該中藥的最小抑菌濃度為26.25mg/ml，最小殺菌濃度為52.5mg/ml。鹽酸小檗堿的1～5 號試管內均無細菌生長，只有5 號試管涂布的平板有菌落長出，其最小抑菌濃度為0.16mg/ml。艾葉提取物1～5 號試管內均無細菌生長，只有5 號試管涂布的平板有菌落長出，該中藥的最小抑菌濃度為0.47mg/ml。黃芩苷1～4 號試管內均無細菌生長，只有4 號試管涂布的平板有菌落長出，該中藥的最小抑菌濃度為0.25mg/ml。苦參堿1～4 號試管均無細菌生長，有4號試管涂布的平板有菌落長出，該中藥的最小抑菌濃度為6.25mg/ml。白頭翁提取物、蘆薈大黃素、菊芋和銀杏葉黃酮粗提物涂布的平板均有菌落長出，對鴿巴氏桿菌沒有抑菌效果。

4 討論

目前，治療巴氏桿菌的方法主要采用抗生素和疫苗接種，但使用高濃度抗菌藥物預防、治療細菌性疾病時往往會導致養殖場產生嚴重的耐藥性和抗菌藥物殘留，給人類健康和養殖業帶來危害[1-2]。而且疫苗接種有效期時長較短[3]，隨著對大量抗菌藥物的應用不合理，特別是抗菌生長促進劑被作為抗菌藥物添加到飼料中，使巴氏桿菌表現為耐藥率高、呈多重耐藥、耐藥范圍廣等特點[4]，其結果不僅給治療和控制該病帶來困難，還使抗生素在動物體內的殘留更加嚴重，對動物食品安全造成危害[1,5,6]。本試驗篩選了5 種效果較好的抗巴氏桿菌中藥有效成分，其中鹽酸小檗堿和黃芩苷抑菌效果最好，為臨床防治鴿巴氏桿菌病提供了新的治療方法。