臭氧對銀耳標準菇房的消毒效果及其安全性研究

鄭峻

（福建省食用菌技術(shù)推廣總站 福州350003）

銀耳（Tremella fuciformisBerk.）又名白木耳，具有滋陰、潤肺、養(yǎng)胃生津的功效，被人們譽為“菌中之冠”。銀耳在我國已有悠久的栽培歷史，寧德市古田縣是銀耳的主產(chǎn)區(qū)，全國90%左右的銀耳來源于寧德市古田縣袋料栽培。2012年古田縣銀耳栽培規(guī)模達3.68億袋，銀耳產(chǎn)量達28萬t，成為當?shù)剞r(nóng)戶的主要經(jīng)濟來源之一[2-3]。農(nóng)戶栽培由于投入小、條件簡陋，通常是接種間和出菇房經(jīng)過簡單的煙霧消毒后就進行接種使用，造成銀耳在生產(chǎn)過程中易遭受病蟲害的危害[4]，一方面破壞培養(yǎng)基造成壞包，另一方面侵染子實體降低產(chǎn)量和品質(zhì)，給生產(chǎn)帶來極大的損失，已成為困擾廣大菇農(nóng)的一個重要問題[5]。目前銀耳栽培過程受到的危害有病害和蟲害2種，病害包括木霉、鏈孢霉、曲霉、青霉等霉菌，蟲害主要為害螨、蚊蠅和跳蟲，這些病蟲害經(jīng)常同時發(fā)生[6-7]。

針對銀耳生產(chǎn)中病蟲害的危害，消毒殺菌是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)方法是采用化學消毒劑進行空間消毒，最常用的是采用甲醛-高錳酸鉀、二氯異氰尿酸鈉等熏蒸殺菌，或用敵敵畏和魚藤精等農(nóng)藥噴灑消毒[8-10]，這種化學消毒方法會強烈刺激使用者的眼睛和呼吸道，嚴重影響生產(chǎn)者的身體健康，同時會產(chǎn)生部分化學藥物的殘留，對銀耳造成二次污染，極大的影響了采摘銀耳的品質(zhì)[11-12]。近年來食用菌產(chǎn)品的質(zhì)量安全問題越來越受到重視，對農(nóng)藥的殘留把控也越來越嚴格，因此尋找新的空間消毒滅菌方法是銀耳栽培的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。臭氧是一種高效、廣譜的殺菌劑，利用其強氧化性，可以在較短的時間內(nèi)破壞各種細菌、霉菌、原蟲孢體卵囊和其他微生物的生物結(jié)構(gòu)，臭氧的滅殺率與過氧乙酸相當，強于甲醛-高錳酸鉀、二氯異氰尿酸鈉等消毒劑，并且其氧化消毒后的產(chǎn)物是氧氣[13-14]，不會造成二次污染，且在有效殺菌濃度范圍內(nèi)幾乎不會對彩鋼板造成腐蝕。本試驗對臭氧在銀耳標準菇房中的殺菌消毒效果和安全性進行了研究，以期對銀耳栽培農(nóng)戶的生產(chǎn)具有指導意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗設(shè)備 超凈工作臺、臭氧機（徐州錦康臭氧設(shè)備有限公司生產(chǎn)的JK-Y50，臭氧產(chǎn)量為50 g/h）。

1.1.2 試驗藥品與培養(yǎng)基配方 LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母提取粉5 g，NaCl 5 g，瓊脂15 g，水1000 mL。121℃滅菌20 min。

氣霧消毒劑：保菇王，主要成分為二氯異氰尿酸鈉，有效成分為69%。

1.1.3 試驗菇房概況 試驗菇房是銀耳標準菇房，長12 m、寬4.5 m、高4.5 m。

1.1.4 試驗年份 試驗于2020年在古田縣渭洋村夢幻食用菌專業(yè)合作社進行。

1.2 試驗方法

1.2.1 臭氧濃度試驗 ①沉降菌試驗。參考《GB/T 16294-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法》，在菇房內(nèi)地面上按附圖布置采樣點，將已制備好的LB平板按采樣點布置逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，讓固體培養(yǎng)基表面暴露在空氣中，靜置60 min后蓋上平板封上封口膜，將培養(yǎng)皿放置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 d后記錄每個平板上的菌落數(shù)量，計算平均值。②濃度試驗。選擇3個潔凈大小一致的菇房，按照“1.2.1①”的方法進行沉降菌試驗，測量消毒前的菌落數(shù)，分別采用1臺臭氧機、2臺臭氧機和3臺臭氧機消毒1.0 h，靜置2.0 h后，按照“1.2.1①”的方法進行沉降菌試驗，測量消毒后的菌落數(shù)，對比消毒前后菌落數(shù)變化。

附圖 采樣點分布

1.2.2 臭氧消毒時間試驗 隨機選擇4個菇房分別用2臺臭氧機進行消毒，消毒時間設(shè)置為0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h，按“1.2.1①”中方法進行消毒前后沉降菌試驗，測試消毒效果。

1.2.3 生產(chǎn)試驗 隨機選擇3間清洗晾干后的菇房，每間菇房都按“1.2.1①”中的方法測試空間沉降菌，然后用2臺臭氧機消毒1.0 h，再測試空間沉降菌，消毒后將剛滅完的銀耳料棒放進菇房，待菌棒冷卻后再進行臭氧消毒接種，待翻筒上架時統(tǒng)計污染率。以傳統(tǒng)氣霧消毒接種方法作對照，氣霧消毒劑根據(jù)傳統(tǒng)方法使用，生產(chǎn)中每間菇房保菇王用量為1000～1200 g（400 g的3包或500 g的2包）。

1.2.4 安全性試驗 按照“1.2.3”的方法進行消毒后定期觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速度，記錄出菇情況和產(chǎn)量，采菇后檢測六六六、滴滴涕、氯氰菊酯、溴氰菊酯4種農(nóng)藥。

2 結(jié)果和分析

2.1 臭氧濃度試驗結(jié)果

濃度試驗結(jié)果表明（表1），隨著臭氧濃度的升高菌落減少率升高，濃度達到100 g后便不顯著，菌落減少率達到85.6%。

表1 不同臭氧濃度下的消毒效果

2.2 作用時間試驗結(jié)果

作用時間試驗結(jié)果表明（表2），隨著臭氧機工作時間的增加菌落減少率隨之增加，但作用時間在1.0 h、1.5 h和2.0 h情況下沒有顯著差異，菌落減少率在86.6%左右。

表2 不同工作時間下的消毒效果

2.3 生產(chǎn)試驗結(jié)果

生產(chǎn)試驗結(jié)果表明（表3），按試驗方法進行臭氧消毒的效果略優(yōu)于氣霧消毒劑，沉降菌測試菌落減少率達88.9%，高于氣霧消毒劑的72.5%，菌包污染率為2.2%，低于氣霧消毒劑的3.0%。

表3 不同消毒劑生產(chǎn)試驗結(jié)果

2.4 安全性試驗結(jié)果

安全性試驗結(jié)果表明（表4），臭氧消毒和氣霧消毒劑在菌絲生長、出菇情況和產(chǎn)量方面均沒有顯著差異，六六六、滴滴涕、氯氰菊酯、溴氰菊酯這4種農(nóng)藥均未檢測出，且使用臭氧消毒后空氣中沒有刺鼻氣味。

表4 安全性試驗結(jié)果

3 結(jié)論與討論

食用菌生產(chǎn)過程中消毒殺菌是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，傳統(tǒng)方法是采用氣霧消毒劑進行空間消毒，但是氣霧消毒劑有刺鼻氣味，對接種人員有一定傷害，同時氣霧消毒產(chǎn)生的鹽酸、次氯酸等對標準菇房的彩鋼板墻體產(chǎn)生腐蝕。臭氧是一種高效、廣譜、清潔的殺菌劑，其氧化消毒后的產(chǎn)物是氧氣，不會造成二次污染[15]。

本研究表明，在長12 m、寬4.5 m、高4.5 m的銀耳標準菇房內(nèi)采用2臺50 g/h的臭氧機消毒1.0 h，能夠達到和氣霧消毒劑相同的效果，且消毒完成后臭氧降解后空氣清新，無刺鼻氣味，并且對菌絲生長和出菇無影響，無農(nóng)藥殘留，是一種比較清潔的消毒劑。