胸腹水細胞塊石蠟包埋聯合免疫組織化學技術在病理學診斷中的應用價值

李延新 杜雄 劉永霞

【關鍵詞】胸腹水細胞;塊石蠟包埋;免疫組織化學技術

胸腹水也叫胸腹腔積液，是臨床上判斷癌癥的主要手段，臨床上嚴重的胸腹水會給患者的生命帶來巨大的威脅。進行細胞脫落病檢是各醫院病理科的重點工作，胸腹水細胞學檢查是臨床上常見的確定腫瘤性疾病的方法，比較細胞的大小、形狀、內部構造，可以進行定性判斷，這種方法具有簡單、快捷、痛苦小等特點。臨床上大多對細胞進行直接離心涂片法做出判斷，但直接涂片法下的細胞較厚，不能呈現單一的細胞層，內部構造不容易觀察，細胞量較少，陽性的檢出率較低等，不利于臨床上分辨腫瘤細胞以及間皮細胞[1]。因此臨床上推出使用塊石蠟包埋聯合免疫組織化學技術對細胞進行切片染色，染色后的細胞結構清晰，切片的薄厚均勻，細胞結構較完整等特點，可以反復切片，進行染色后可以更準確鑒定腫瘤細胞分類及原發地，本文就胸腹水細胞塊石蠟包埋聯合免疫組織化學技術在病理學診斷中的應用價值進行如下報道。

1資料與方法

1.1一般資料

對在醫院進行治療的患者送檢的胸腹水共60名，其中胸水46名，腹水16名。其中男性36名，女性24名。年齡分布在30歲～76歲，臨床上確診疾病22名，原因待查38名。

1.2試劑

所有的免疫組化試劑、即用型試劑盒及DAB顯色劑均為美國DaKO試劑，使用DaKO全制動免疫組化儀進行實驗步驟操作。

1.3方法

①收集患者胸腹水：根據胸腹水的濃度進行取用，取30～90毫升進行離心，每分鐘2000轉，離心10分鐘。②將胸腹水進行離心后，舍棄上清液，取出少量沉淀做細胞涂片。③取95%乙醇，加入其他沉淀中，加入沉淀至30毫升，震蕩2分鐘，再進行離心，每分鐘2000轉，離心5分鐘。④離心后放棄上清液，加入15毫升15%福爾馬林固定。⑤靜置3～5小時，去除福爾馬林液體，用紙將沉淀和其他組織一起包裹，使用全自動脫水機進行脫水處理。⑥常規細胞切片使用蘇木精-伊紅染色后，在使用中性樹膠封固。⑦使用CK7、CAl25、CK20、CK、CDX-2、ME、Calretinin、Vi-mentin、TTF-1等抗體，使用細胞免疫進行染色。胸水加做TTF-1，腹水加做CA125，與提供的對照物質進行陽性的比對，DAB顯色[2]。

2結果

在60名疑似惡性胸腹水標本進行塊石蠟包埋后，借助免疫組織化學染色，診斷結果如下：惡性胸腹水來源疑似乳腺癌2例，肺癌10例，腺癌12例，鱗癌4例，未發生原發性的惡性腫瘤16例，反應性間皮細胞增生為26例。

與常規涂片方法比較，該方法制片色彩鮮艷，背景清晰，有利于收集到更多的細胞，且具有一定的組織結構。因抗體不同，切片中所表達的陽性部位與組織學相同，所以陽性顆粒呈棕黃色。

3討論

胸腹水是臨床上最常見的特征之一，在臨床上常用于鑒別癌細胞的類型及來源，以及鑒別腫瘤細胞是否病變，還可以明確腫瘤的性質。但胸腹水易受其他因素的影響，因此在鑒別過程中，會出現一系列的問題。常規涂片的缺點很多，如涂片的細胞數量較少，常常伴隨著紅細胞及其他炎癥滲出物及粘液，背景不夠清晰，在涂片時涂片較厚，多層細胞重疊，在診斷時，這些因素給觀察細胞帶來特別大的困擾。因此在臨床上，經常使用福爾馬林浸泡固定胸腹水，可以將胸腹水像組織塊一樣脫水，之后再進行包埋切片。

對胸腹水細胞塊石蠟包埋聯合免疫組織化學技術具有以下優點：①操作簡單，方法便捷，不需要過多的儀器。②在包埋切片中，細胞為單層切片，便于觀察。③可以搜集所有細胞，使碎小的組織也可以完整的切出，利于讀取切片。④將胸腹水制成蠟塊，方便保存，在臨床會診時可拿出反復使用，⑤可以將切片的免疫細胞進行化學染色，對腫瘤的類型以及來源進行準確的診斷，在鑒別時，可以清晰地觀察到陽性細胞，利于臨床上的鑒別。⑥通過生物分子標記法對切片組織進行標記，可以對臨床上的治療進行及時調整，也方便對疾病的確診以及分析。⑦將進行切片的細胞塊進行分子檢測，可以實施分子靶向治療，對組織細胞的耐藥基因進行檢測。

在炎性胸腹水增生或者退變的過程中，同皮細胞與某些惡性細胞從外觀或結構上易混淆，因此臨床上對胸腹水細胞塊石蠟包埋聯合免疫組織化學技術，不僅滿足了診斷上的需求，還可以增加陽性細胞的檢出率：①Calretinin、vimentin、MC，此類陽性細胞為間皮增生細胞。②CK-7、TTF-1等陽性細胞多來源于肺。③CK7、CA125等陽性細胞來源于卵巢。④CDA2、CK20等陽性細胞多來源于胃腸道。但是陽性細胞為非特異性細胞，抗體的組織特異性也并非絕對，因此需要進一步的觀察。

綜上所述，對胸腹水細胞塊石蠟包埋聯合免疫組織化學技術，加強臨床上對腫瘤的判斷，可以大范圍推廣。