殼聚糖處理桑葉水提液的抗氧化性研究

宋娟+寧喜斌+陳璐璐+朱莉莉+李曉暉

摘要：為了提高桑葉的利用率，應用殼聚糖進行絮凝除雜試驗，測量不同環境條件（pH值、絮凝溫度、殼聚糖加入量、絮凝時間）對桑葉水提液抗氧化性的影響。結果表明，最佳殼聚糖投入量為1.6 mL，pH值為5，絮凝溫度為35 ℃，絮凝時間為3 h，通過殼聚糖處理明顯提高了桑葉水提液的抗氧化性，該法具有廣泛推廣價值。

關鍵詞：殼聚糖；桑葉；絮凝；抗氧化性

中圖分類號：R284.1 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2014）08-0306-02

桑葉是?？浦参锷５母稍锶~，又稱家桑、荊桑、桑椹樹等，始載于《神農本草經》，是一種常用的中藥，桑葉的化學成分有黃酮及黃酮苷類、生物堿類、多糖類、氨基酸類、維生素類、揮發油成分等^[1]。桑葉中總黃酮含量占桑葉干重的1.0%～3.0%，是所有植物莖葉中黃酮類化合物含量較高的一種^[2]。現代藥理研究表明，桑葉具有抗凝血、降血糖、抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞、改善腸功能、抗菌、抗病毒等多種藥理活性，獲得人們廣泛的關注。

殼聚糖是由甲殼素脫乙?；脕淼囊环N天然高分子化合物，具有成本低、耐堿、耐腐蝕、無毒、無味、易降解等特點，可作為吸附劑、絮凝劑、抑菌劑等被廣泛應用于很多領域，如農業、生物醫學、環境保護等^[3-4]。絮凝是一種簡單有效的分離固液兩相的技術，絮凝劑起“橋連”“電中和”作用^[5-6]，吸附沉淀，去除大分子雜質，絮凝技術應用方便、操作簡單、凈化時間短，殼聚糖作為絮凝劑本身具有很強的“架橋”作用，使溶液中有沉淀趨勢的懸浮顆粒沉淀，殼聚糖分子帶正電荷，能與溶液中的蛋白質、氨基酸等負電荷化合物分子結合^[7]，通過這2個因素殼聚糖可產生有效的絮凝效果。

桑葉水提液制備過程中會產生某些無用雜質，如碎桑葉的纖維、蛋白質等，這些雜質直接或間接影響桑葉水提液中有效成分運用，為了提高桑葉的利用率，本試驗用殼聚糖除去桑葉水提液中的雜質，研究此法在不同環境條件下對桑葉的抗氧化性有無影響，以期為桑葉的合理應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

干桑葉，產自浙江省湖州市；殼聚糖（90%脫乙酰度）；1%冰醋酸；DPPH（1-二苯基-2-三硝基苯肼），（上海華藍化學科技有限公司）；其余試劑都為分析純。

1.2 儀器

離心機（Thermofisher公司）；紫外可見分光光度計（尤尼柯上海儀器有限公司）；水浴鍋（THZ82）（江蘇省金壇市精達儀器制造廠）。

1.3 方法

1.3.1 桑葉水提液的制作

取干桑葉，剪碎以料液比 2 g ∶180 mL 的標準配制，調pH值為10，在100 ℃的水浴鍋中浸提90 min，后取出并冷卻至室溫，抽濾，定容，測總黃酮含量及抗氧化性。

1.3.2 殼聚糖溶液的制備 用1%冰醋酸溶液配制1%的殼聚糖溶液，備用。

1.3.3 絮凝 取適量桑葉水提液，測黃酮總含量，調pH值，加入一定量的殼聚糖溶液，攪拌10 min，在一定溫度的水浴中放置一段時間，3 000 r/min離心15 min，測總黃酮量及抗氧化性。殼聚糖的加入使待測液的體積發生變化，為了使試驗結果更為精確，在測量各影響因素時，每組試驗均做相應的對照，每個對照組用相同體積的水代替加入的殼聚糖的量。

1.3.4 抗氧化性測定 稱取DPPH 7.886 4 mg，無水乙醇定容至100 mL的容量瓶中，使其濃度為200 μmol/L，取不同濃度的待測樣品，加入1 mL的200 μmol/L的DPPH溶液，將該混合液混勻，室溫下靜置30 min，以無水乙醇為參比，測定其在517 nm處的吸光度，對照組以無水乙醇代替樣品，計算自由基清除率：自由基清除率=[1-（Ds-Dr）/Do]×100%。

式中：Ds表示待測液與DPPH反應液的吸光度；Dr表示待測液與無水乙醇混合液的吸光度；Do表示DPPH與無水乙醇混合液的吸光度。

2 結果與分析

2.1 殼聚糖加入量對絮凝效果的影響

取桑葉水提液50 mL，調pH值為6.0，平行5份，每份 10 mL，分別加入殼聚糖溶液0.8、1.2、1.6、2.0、2.4 mL，攪拌10 min，于45 ℃的水浴中放置3 h，3 000 r/min離心 15 min，過濾，取濾液，測該液和對照組的抗氧化性。如圖1所示，殼聚糖的加入明顯提高了桑葉的抗氧化性，當投放量在1.6 mL時，抗氧化性最好，因為此時殼聚糖與桑葉抗氧化成分的協同作用最好。

2.2 絮凝時間對絮凝效果的影響

取桑葉水提液50 mL，調pH值為6.0，平行5份，每份 10 mL，分別加入殼聚糖溶液1.6 mL，攪拌10 min，分別在45 ℃

2.4 pH值對絮凝效果的影響

取桑葉水提液5 mL，平行5份，每份10 mL，調pH值為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0，分別加入殼聚糖溶液1.6 mL，攪拌 10 min，與45 ℃水浴中放置3 h，于3 000 r/min離心15 min，過濾，測該液和對照組的總黃酮量及抗氧化性。如圖4所示，試驗組抗氧化性總體上弱于對照組，表明pH對抗氧化性有很大的影響。在pH值為3左右時，抗氧化性最強，酸性過大可能造成黃酮析出，但此時抗氧化性卻最強，因為桑葉水提液成分中不僅是黃酮有抗氧化的特點，黎小萍等證明了多糖也具有抗氧化性^[10]。考慮到酸性過大對人體的影響，該條件不建議使用，因此，pH值為5時較為適合。

3 結論

本試驗使用殼聚糖對桑葉水提液進行處理，對pH值、殼聚糖含量、時間、溫度4種條件進行研究。endprint

殼聚糖處理增加了桑葉的抗氧化性，提高了桑葉的利用率，經殼聚糖處理后，桑葉水提液的抗氧化性基本在80%以上，從而增加了桑葉的應用領域。

在殼聚糖處理的4種條件中，pH值的變化對抗氧化性的影響大于其他3個條件，絮凝時間影響最小；當殼聚糖投入量為1.6 mL、pH值為5、絮凝溫度為35 ℃、絮凝時間為3 h時，抗氧化性較好。

殼聚糖本身成本低，無毒無害，來源廣泛，對人體無不良影響，殼聚糖處理桑葉水提液是一種安全有效的方法，具有廣泛推廣價值。

參考文獻：

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[10]黎小萍，陳華玲. 桑葉的藥用與保健價值及其開發利用現狀[J]. 蠶桑茶葉通訊，2005，21（1）：8-9.endprint

殼聚糖處理增加了桑葉的抗氧化性，提高了桑葉的利用率，經殼聚糖處理后，桑葉水提液的抗氧化性基本在80%以上，從而增加了桑葉的應用領域。

在殼聚糖處理的4種條件中，pH值的變化對抗氧化性的影響大于其他3個條件，絮凝時間影響最小；當殼聚糖投入量為1.6 mL、pH值為5、絮凝溫度為35 ℃、絮凝時間為3 h時，抗氧化性較好。

殼聚糖本身成本低，無毒無害，來源廣泛，對人體無不良影響，殼聚糖處理桑葉水提液是一種安全有效的方法，具有廣泛推廣價值。

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殼聚糖處理增加了桑葉的抗氧化性，提高了桑葉的利用率，經殼聚糖處理后，桑葉水提液的抗氧化性基本在80%以上，從而增加了桑葉的應用領域。

在殼聚糖處理的4種條件中，pH值的變化對抗氧化性的影響大于其他3個條件，絮凝時間影響最小；當殼聚糖投入量為1.6 mL、pH值為5、絮凝溫度為35 ℃、絮凝時間為3 h時，抗氧化性較好。

殼聚糖本身成本低，無毒無害，來源廣泛，對人體無不良影響，殼聚糖處理桑葉水提液是一種安全有效的方法，具有廣泛推廣價值。

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