禽流感免疫抗體檢測分析

陳 霞 陳銀基 黃福林

1.江蘇省南京市高淳區農業農村局動物疫病預防控制中心，南京211313；2.南京財經大學食品科學與工程學院，南京210038

禽流行性感冒（簡稱禽流感）是由禽流感病毒引起的家禽和野禽的一種從呼吸系統疾病到全身性敗血癥等多種癥狀的綜合病癥。在抗原特性相同的病毒中，有毒力強的毒株，也有毒力弱的毒株。禽流感臨床表現為精神沉郁，羽毛蓬亂，食欲減退或廢絕，輕重度不一的呼吸道感染，產蛋下降甚至嚴重致死性疾病[1]，對家禽養殖業危害很大。

由于本病的臨床癥狀和病理變化的差異大，所以確診需要依靠病毒的分離鑒定和血清學試驗。該病以預防為主，是國家強制免疫的疾病，對活禽、觀賞鳥類、野禽應當進行嚴格執行免疫程序。2018年，南京市高淳區采用的是二價苗（H5N1Re-8 株和H7N9H7Re-1 株），從2019年開始，使用三價苗（H5N1Re-11+12 株，H7N9H7Re-2 株），以下簡稱H5+H7 三價苗，進行家禽免疫。隨著農業產業結構的不斷調整，禽養殖業逐年增加，規模化雞場增多，仍有部分雞場及散養戶采用放養的方式進行養殖。筆者對南京市高淳區2018-2020年春秋兩季各養殖場進行采樣和監測，現將不同飼養方式下禽流感免疫監測效果作出對比，以及時掌握流行病學動態，查漏補缺。

1 材料與方法

1.1 免疫疫苗

2018年采樣禽流感（H5+H7）二價滅活苗免疫（乾元浩生物股份有限公司）；2019-2020年采樣重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活苗免疫（乾元浩生物股份有限公司）。

1.2 血清來源

隨機抽取春秋兩季免疫后的8 個鄉鎮的家禽（雞和鴨）血樣，重點抽查免疫21 d 后的家禽。用采血器采集翅靜脈血，全血靜置后，檢查組帶回區動物疫控中心實驗室集中監測。籠養方式（規模場）的每戶采樣30 份以上，放養方式（散戶和部分規模場）的每戶采樣不少于20 份，每個樣品采血量至少2 mL。

1.3 主要試劑

1%雞紅細胞懸液（自配）、禽流感H5-Re8 抗原、禽流感H5-Re11 抗原、禽流感H7N9(Re-1)抗原、禽流感H7N9 (Re-2)抗原（均由哈爾濱國生生物科技有限公司提供，效價為1∶2 048）。

1.4 主要耗材及儀器

96 孔微量反應板、1～100 μL 移液器、滴頭、微型振蕩器、恒溫箱、離心機。

1.5 方 法

1）檢測方法。用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗方法進行，試驗依據是《高致病性禽流感診斷技術》（GB/T 18936-2003）。

2）結果判定。以完全抑制4 個單位抗原的血清最高稀釋倍數作為HI 滴度。HI 效價≤3 log2 判為陰性；HI≥4 log2 判為陽性，即抗體水平合格。

2 結果與分析

2.1 不同飼養方式對禽流感H5 和H7 亞型免疫抗體監測效果的對比

由表1可知，2018-2020年對高淳區內家禽禽流感H5 和H7 亞型抗體進行監測，每年的平均合格率均在80%以上，說明近3年禽流感整體免疫效果理想。H5 抗體平均合格率分別為85.64%、82.28%、86.50%，達到國家規定免疫合格率70%標準，H7 抗體水平具有相同的趨勢。

表1 2018-2020年高淳區家禽采樣情況份

由表2可知，籠養方式的家禽禽流感（H5+H7）抗體合格率均在90%以上。籠養方式的家禽H5 和H7 亞型抗體合格率在2020年達到最高，分別為99.16%、99.44%。這是因為規模場采用籠養的方式，自行免疫，免疫人員經過專門培訓且有多年管理經驗、重視免疫工作，籠養方式便于開展免疫工作，家禽一般經過2 次免疫以達到免疫保護力，少數免疫效價低可能是因為體質差[2]或接種疫苗后未能獲得免疫的原因[3]。說明2 次免疫對家禽養殖的重要性，這與張啟建[4]等觀點一致。

由表2可知，2018-2020年，放養家禽禽流感抗體合格率在70%左右，處于合格的臨界值，2020年略有提高，H5 亞型抗體合格率達到73.84%，但是仍較低。可能的原因有：1）因為放養家禽2 次免疫有一定的難度，捕抓較困難，免疫時如果不做好標記容易混淆，不能保證每只都能免疫到；2）散養戶一般采用放養的方式，散養戶的家禽是由本地村防員統一時間集中免疫，由于村防員專業水平和責任感所限，不能嚴格按照免疫程序進行免疫。所以禽流感抗體水平明顯低于籠養家禽, 最終影響了整體免疫抗體水平。

2.2 不同年份抗體合格率

由圖1和圖2可知，2018-2020年春秋防檢測的H5 和H7 亞型禽流感抗體合格率在2019年略有降低，這是因為2019年開始使用了三價苗，但2020年抗體合格率明顯上升，說明已適應三價苗的使用。近3年來，春秋防的免疫抗體平均合格率均達到國家規定的70%以上標準，且合格率在2020年達到最高，這與疫苗的正確保存，動物防疫員的防控意識、技術水平都有所提高，與當地動物防疫管理部門對免疫工作的重視和嚴格監督有關。

圖1 不同飼養方式H5 亞型抗體合格率

圖2 不同飼養方式H7 亞型抗體合格率

2.3 二價苗與三價苗免疫效果的比較

由表2可知，2018年H5 亞型平均抗體合格率為85.64%，2019年H5 亞型平均抗體合格率為82.28%，2020年H5 亞型平均抗體合格率為86.50%，2019年抗體合格率有所下降這是因為2018年采用的是二價苗，H5 亞型為H5-Re8 株，而2019年首次采用三價苗[5]，H5 亞型為H5-Re11 株和H5-Re12 株，可能與首次免疫、疫苗保存不當等原因有關[3]。

表2 不同飼養方式H5 和H7 亞型抗體合格率

由表2可知，H5 和H7 亞型的合格率水平略有差異，這是因為重組禽流感H5+H7 三價苗因不同廠家疫苗抗原含量、生產工藝以及保存運輸等方面的原因，會導致疫苗差異[6]。

不論禽流感二價苗還是三價苗，免疫后禽流感抗體合格率均能達到70%以上，均有較好的免疫效果，與之前研究結論一致[7]。

3 結 論

通過分析和比較，高淳區近三年禽流感抗體合格均能達到國家規定的標準，這與當地防疫部門的管理分不開，但是籠養方式家禽的禽流感抗體合格率明顯高于放養家禽，放養家禽抗體合格率不高拉低了本區的整體合格率，放養家禽存在較高風險。

在下一步的工作中，一是需要進一步加強防疫人員網格管理責任制，免疫效果與補貼掛鉤才能有效提高免疫質量；二是加強對村防員的培訓，放養家禽免疫時做好標記以提高免疫準確度，督促其嚴格按照免疫程序進行免疫；三是區動物疫病預防控制中心實驗室加強對放養家禽的飛行采樣（監測），發現抗體不合格的及時補免，從而提高本區禽流感抗體的整體水平。