“腰樓大蔥”組織培養(yǎng)技術及田間對比研究

李文峰 張曉慧 張書

摘要 [目的]篩選最佳濃度NAA“腰樓大蔥”生根培養(yǎng)基，比較組培苗和非組培苗的優(yōu)劣。[方法]以“腰樓大蔥”莖尖為外植體材料，接種到不同濃度NAA生根培養(yǎng)基上，將獲得的組培苗與非組培苗進行田間對比試驗。[結(jié)果]生根壯苗最佳NAA濃度為0.10 mg/L;組培苗與非組培苗的直立葉數(shù)和老葉個數(shù)均存在顯著差異;非組培苗的平均倒伏葉數(shù)為6.40片，組培苗僅有3.29片，且存在極顯著差異。[結(jié)論]“腰樓大蔥”組培苗商品性明顯優(yōu)于非組培苗。

關鍵詞 大蔥;組織培養(yǎng);倒伏葉

中圖分類號 S-633.1? 文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2021）11-0100-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.11.027

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Tissue Culture Technique and Field Comparative Study of ‘Yaolou scallion（Allium fistulosum）

LI Wen-feng， ZHANG Xiao-hui， ZHANG Shu

（Fuyang Academy of Agricultural Sciences， Fuyang， Anhui? 236065）

Abstract [Objective] To select the best concentration of NAA ‘Yaolou scallion rooting medium， the advantages and disadvantages of tissue culture and non-tissue culture seedlings were studied. [Method] Shoot tips of ‘Yaolou scallionwere used as explants and cultured on different concentrations of NAA rooting medium. The tissue culture seedlings and non-tissue culture seedlings were compared in the field. [Result]The results showed that the optimum concentration of NAA was 0.10 mg /L， the number of erect leaves and the number of old leaves were significantly different between tissue-cultured and non-tissue-cultured plantlets， the average number of lodging leaves of non-tissue-cultured plantlets was 6.40， and that of tissue-cultured plantlets was only 3.29. There was a significant difference in the average number of lodging leaves between non-tissue culture seedlings and tissue culture seedlings. [Conclusion]The commercial quality of tissue-cultured plantlets was better than that of non-tissue-cultured plantlets.

Key words Allium fistulosum;Tissue culture;Lodging leaf

蔥起源于半寒地帶，喜冷涼不耐炎熱，原產(chǎn)自我國。我國各地廣泛栽培，主要作為蔬菜食用，鱗莖和種子亦入藥。蔥可分為普通大蔥、分蔥、胡蔥和樓蔥。“腰樓大蔥”為分蔥，蔥白為純白色，具有葉色濃、辣味淡、品質(zhì)佳的特點。栽培歷史可上溯至明清時期，栽培地點緊鄰阜陽市潁河河畔，土地肥沃，適宜大蔥種植，家家戶戶不僅門前屋后都種植大蔥，還有部分大戶專業(yè)化種植大蔥幾十年，不僅行銷周邊地區(qū)，還遠銷至江蘇、河南等地。除夏季外，“腰樓大蔥”在初夏、秋季、初冬均可收獲，是當?shù)厝罕娭匾慕?jīng)濟收入來源。但是多年的種植，種苗攜帶的病菌逐漸增多，產(chǎn)量下降，品質(zhì)降低，收益驟減。筆者以“腰樓大蔥”為試材，對其莖尖進行組織培養(yǎng)及離體再生，以期為繁育出脫毒種苗提供基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 供試品種取自安徽省潁上縣腰樓村大蔥種植基地。以“腰樓大蔥”嫩芽為外植體材料。

1.2 試驗地點 于2016年11月至2020年3月，在阜陽市農(nóng)業(yè)科學院生物工程研發(fā)中心進行試驗。

1.3 試驗方法

1.3.1 組織培養(yǎng)。

將大蔥嫩芽先用清水清洗，切除基部受傷部分，用適量洗潔精浸泡15 min，再用流水沖洗20 min;然后在超靜工作臺上先用75%乙醇消毒10 s，0.2% HgCl2消毒10 min，再用無菌水沖洗多次;在顯微鏡下挑取大蔥嫩芽莖尖端部分，以0.2～0.4 mm最為合適;接種到誘導培養(yǎng)基（MS+BA 1.00 mg/L+NAA 0.10 mg/L+GA3 0.05 mg/L）上，30 d后進行擴大培養(yǎng)（培養(yǎng)基為MS+ BA 1.00 mg/L+NAA 0.05 mg/L）。

NAA濃度梯度設為0.05、0.10和0.30 mg/L，在光、暗環(huán)境下分別培養(yǎng)，進行生根培養(yǎng)基篩選試驗。

選擇NAA最適濃度培養(yǎng)基接種，在12h光/12h暗、平均溫度22 ℃條件下培養(yǎng)30 d，從瓶裝組培苗中，散點式選擇9瓶組培苗，測定每瓶平均生根數(shù)、平均根長、平均葉片數(shù)、平均葉長。

1.3.2 田間對比。

選擇根長達到2 cm、長勢健壯的組培苗進行煉苗，組培苗經(jīng)過煉苗和擴繁，形成一定基數(shù)的壯苗。隨后，以非組培苗為對照，進行田間對比試驗。設3次重復，試驗連續(xù)進行2年。

1.3.3 數(shù)據(jù)分析。試驗數(shù)據(jù)均采用Excel及DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進行整理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 NAA濃度對生根的影響

由表1可知，NAA濃度為0.10 mg/L時，生根苗數(shù)均在20個以上，光、暗條件下分別為24、25個;生根率最高，分別為80.00%、83.33%;平均根數(shù)均達到2.5以上，分別為2.6、2.7條。可見，該條件下的生根效果最好，為最合適的培養(yǎng)條件，且光、暗環(huán)境處理之間無明顯差異。

2.2 組培苗生長情況

隨機選擇9瓶進行比較，平均根數(shù)4.22 個，平均根長2.38 cm，平均葉數(shù)4.89片，平均葉長5.23 cm。利用DPS軟件采用Tukey法對數(shù)據(jù)進行分析比較，②號瓶的各項指標較好，⑤號較差，存在較明顯差異（表2）。

2.3 組培苗與非組培苗田間對比

組培苗直立葉數(shù)平均達到14.48片，非組培苗只有11.08個。組培苗倒伏葉數(shù)平均3.29片，非組培苗倒伏葉數(shù)是組培苗的2倍，達到6.40片。組培苗老葉數(shù)平均2.77片，非組培苗為4.19片。分蘗數(shù)、蔥白長度、總長度和重量平均值差別不大（表3）。為進一步揭示各組之間差異顯著性，利用DPS軟件采用Tukey法對數(shù)據(jù)進行比較分析，結(jié)果顯示組培苗與非組培苗的直立葉數(shù)和老葉數(shù)均存在顯著性差異，倒伏葉數(shù)存在極顯著差異，分蘗數(shù)、蔥白長度、總長度和重量均無顯著性差異。

3 討論

（1）田間試驗數(shù)據(jù)顯示，“腰樓大蔥”組培苗與非組培苗的直立葉數(shù)和老葉數(shù)均存在顯著差異，倒伏葉數(shù)存在極顯著差異;分蘗數(shù)、蔥白長度、總長度和重量無顯著性差異。綜合分析，組培苗明顯健壯，多直立不易倒伏，且老葉少，商品性明顯優(yōu)于非組培苗。從技術角度來講，可大力推廣使用組培苗。但是，組培苗的實際生產(chǎn)投入較大，農(nóng)戶不易進行原始苗的繁殖。

（2）該研究選用的外植體材料是“腰樓大蔥”的莖尖，關于大蔥莖尖的組織培養(yǎng)，陳典等[1-2]以章丘大蔥莖尖為外植體，對大蔥莖尖脫毒苗的培養(yǎng)和增殖技術進行了研究。張松等[3]利用分蔥莖尖成功誘導了體細胞胚胎發(fā)生。關于大蔥不同外植體離體培養(yǎng)再生主要利用的外植體還有種子[4-5]、子葉[6]、幼葉[5，7]、根[5，8]、花蕾[9-11]、成熟胚[12-13]和花序軸[14]，不同材料、不同外植體對其愈傷率的影響很大。

（3）組織培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)了一些問題值得思考。例如，接種時，如果根部出現(xiàn)在培養(yǎng)基上方，未接觸到培養(yǎng)基，會導致根變短，梢頭變黃，枯死。若接種單株，則根較長，葉長而粗壯，如果是叢生株，則根細弱，葉片較多但細弱。因此，在接種時要保持根朝下生長，每瓶的接種量不宜過少，也不宜過多，以4～6個最優(yōu)。組培苗中1株出現(xiàn)開花現(xiàn)象，可能是組培苗受到激素的影響，到生長后期，該組培苗植株明顯變小，說明生殖生長影響營養(yǎng)生長。

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