尋常型銀屑病血漿中CGRP1、VIP 水平與PASI 評分的相關性分析

張春利，王 薇，劉利君，何 磊，吳景良，牛艷東，李雪飛，段昕所

（1.承德醫學院附屬醫院皮膚病與性病科，河北 承德 067000；2.天津醫科大學總醫院總醫院濱海醫院皮膚科，天津 300450）

銀屑病（psoriasis vulgaris，PV）是免疫介導的慢性、復發性、炎癥性皮膚病，典型皮損臨床表現為鱗屑性紅斑或斑塊，其發生與遺傳、環境因素如潮濕、外傷、飲酒、精神緊張等因素有關[1]；且大多患者存在心理健康、情緒及社會適應能力等問題[2]。研究表明[3-5]，與敏性疾病和黑色素瘤患者相比，銀屑病患者更容易出現精神并發癥及自殺的念頭，主要是心理應激因素通過中樞神經系統、外周神經系統和皮膚下丘腦-垂體-腎上腺素軸，參與對銀屑病的神經免疫調節。而中樞神經系統在應激情況下可導致促炎神經肽[降鈣基因相關肽（CGRP）、血管活性腸肽（VIP）]表達升高[6]。目前評估銀屑病嚴重程度的常用指標之一為銀屑病皮損面積和嚴重程度指數（PASI）[1]。本研究通過檢測不同PASI 評分的銀屑病患者血漿中的CGRP1、VIP 的表達情況，分析嚴重程度不同的尋常型型銀屑病患者血漿CGRP1 及VIP 表達水平及其與PASI 的相關性，以期為確定尋常性銀屑病嚴重程度的實驗室判定指標提供支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月～12 月于承德醫學院附屬醫院收治的尋常型銀屑病患者60 例作為研究對象。納入標準：①依據2018 年銀屑病對尋常型銀屑病的診斷標準[1]；②2 個月內未進行規范化治療或出現病情復發的情況；③無嚴重肝腎功能異常、感染、腫瘤及其它系統性疾病或免疫性疾病等。排除標準：①伴發有其它皮膚病、精神神經類疾病或者腫瘤性疾病患者；②妊娠期或哺乳期婦女。依據2018年尋常型銀屑病診療指南的PASI 對患者的病情嚴重程度進行評估[1]（PASI＜3 分為輕度銀屑病，PASI 3～10 分為中度銀屑病，PASI≥10 分為重度銀屑病），將PASI 評分＜10 分設為PV1 組，PASI 評分10～20 分設為PV2 組，PASI 評分20～30 分設為PV3組，各20 例。同時另選取本院健康體檢者20 名作為對照組。PV1 組男14 例，女6 例，年齡11～82，平均年齡（50.80±9.87）歲；PV2 組男17 例，女3 例，年齡9～66，平均年齡（42.90±18.27）歲；PV3 組男15例，女5 例，年齡17～83，平均年齡（39.35.20±21.69）歲；對照組男14 例，女6 例，年齡18～64，平均年齡（50.80±9.87）歲。四組性別、年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審批通過，所有研究對象知情同意并簽署知情同意書。

1.2 主要儀器及試劑 低速離心機（北京雷勃爾醫療器械有限公司），-80 ℃低溫冰箱（Haier 電器），4 ℃低溫冰箱（Haier 電器），全自動酶標儀（Thermo scientific Multiskan Mk3），定軌搖床（海門市其林貝爾儀器制定有限公司），GN-RO-100 型純水機（北京雙峰純水設備廠），人/小鼠/大鼠CGRP1 ELISA 試劑盒（美國RayBiotech 公司），人/小鼠/大鼠VIP ELISA 試劑盒（美國RayBiotech 公司）。

1.3 方法

1.3.1 標本采集及保存 采集研究對象外周靜脈血5 ml，置于肝素抗凝管中，均于3000 r/min 的轉速下離心10 min，取上清，并按一次用量分裝，凍存于-80 ℃低溫冰箱中保存。

1.3.2 CGRP1、VIP 檢測 參照ELISA 試劑和說明操作的檢測，在450 nm 波長處檢測出反應孔的OD值。使用SigmaPlot 12.0 軟件，以標準品濃度為橫坐標，以B（標準品或樣本的OD 值）/B0（0 ng/ml 標準品的OD 值）為縱坐標，繪制標準曲線，并計算各樣本的濃度。

1.4 統計學方法 采用SPSS 21.0 統計學軟件對數據進行統計分析，利用Shapiro-wilk 檢驗判斷樣本的正態性，計數資料以（n）表示，采用χ2檢驗；計量資料以（）表示，采用F檢驗或Welch 檢驗；利用線性回歸分析進行相關性分析，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 四組CGRP1、VIP 水平比較 四組血漿CGRP1及VIP 表達水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05），其中PV3 組＞PV2 組＞PV1 組＞對照組；但PV1 組與對照組血漿CGRP1、VIP 比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；PV2 組與PV3 組血漿VIP 比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 四組CGRP1、VIP 水平比較（，ng/ml）

表1 四組CGRP1、VIP 水平比較（，ng/ml）

2.2 PV 組血漿CGRP1 及VIP 的表達水平與PASI的相關性分析 PV 患者血漿CGRP1 與PASI 呈正相關（r=0.7093，P=0.0001）；PV 患者血漿VIP 與PASI 無相關性（r=0.2289，P=0.7850），見圖1。

3 討論

銀屑病是一種反復發作的慢性炎癥性皮膚病，現廣泛認為銀屑病發病機制與神經、環境、遺傳、感染、代謝、免疫等因素有關。Vegas O 等[6]在銀屑病小鼠模型中將皮膚支配神經切斷后發現，皮損現象明顯好轉，炎癥因子相對減少，但皮損補充神經肽后出現加重的情況，炎癥因子逐漸增多，這表明神經參與銀屑病的發病過程。皮膚是外周的神經內分泌器官，與中樞神經系統具有相同的神經外胚層來源、相似的下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA）系統和密布復雜的神經纖維，并表達多種激素、神經肽及其受體。研究表明[7]，CGRP 和VIP 相關神經纖維在銀屑病患者的真皮乳頭層增多，可導致真皮乳頭的血管擴張加重，從而加重銀屑病。

CGRP 在銀屑病皮損中是一種高表達的神經肽，它包括37 個氨基酸，分為2 個亞型，具有相似的生物學效應。CGRP 廣泛存在于神經系統，大部分由感覺神經分泌，為皮膚中重要的感覺神經遞質，與皮膚免疫密切相關。研究顯示[8]，CGRP 可能通過促進HaCaT 細胞增殖和分泌神經生長因子（NFG），并刺激朗格漢斯細胞分泌白介素-1β（IL-1β）、白介素-10（IL-10），產生自身遷移[9]，從而使血管內皮細胞活化，引起血管擴張[10]；且CGRP 通過調節朗格漢斯細胞抗原提呈過程，可誘導CD4+T 細胞分化為Th17細胞[11]，參與銀屑病的發生途徑。而在銀屑病皮損中高表達的另一種神經肽VIP 是一個由28 個氨基酸組成的腦腸肽，廣泛存在于神經系統，在神經-內分泌系統發揮著重要的免疫調節作用。研究表明[12]，VIP 可促進表皮角質形成細胞產生血管內皮生長因子（VEGF），引起血管過度增生和血管擴張，與表皮角質形成細胞（KC）上的VIPR 結合，從而調節KC的功能，高濃度時促進KC 分泌IL-6/IL-8 等細胞因子，導致KC 增殖[13]；且VIP 可調節肥大細胞脫顆粒刺激KC 增殖[12，13]。本研究檢測了這兩條種神經肽在外周血的表達情況，結果顯示四組血漿CGRP1 及VIP 表達水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05），其中PV3 組＞PV2 組＞PV1 組＞對照組；但PV1 組與對照組血漿CGRP1、VIP 比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；PV2 組與PV3 組血漿VIP 比較，差異無統計學意義（P＞0.05），提示尋常型銀屑病患者血漿中CGRP1、VIP 表達水平總體高于健康人群，而輕中度銀屑病患者與健康人群的血漿中CGRP1 及VIP 水平表達一致。此外，本研究相關性分析顯示，PV 患者血 漿CGRP1 與PASI 呈 正 相 關（r=0.7093，P=0.0001）；PV 患者血漿VIP 與PASI 無相關性（r=0.2289，P=0.7850），說明尋常型銀屑病患者外周血CGRP1 水平隨著尋常型銀屑病嚴重程度的增加而增加，而外周血VIP 水平有所升高，但不隨著尋常型銀屑病嚴重程度的增加而增加。

綜上所述，尋常型銀屑病患者血漿CGRP1 與PASI 評分密切相關，可作為輔助評價尋常性銀屑病嚴重程度的相對客觀的實驗室指標。但由于銀屑病的發病機制比較復雜，涉及的細胞因子較多，需要擴大樣本量，豐富檢測方法以驗證尋常型銀屑病患者外周CGRP1 與疾病嚴重程度之間的關系。