藏豬脾臟轉(zhuǎn)移因子對(duì)小鼠抗氧化作用的研究

葉兵兵　楊瑩湘　張輝梅　倪萍　劉登波

摘要：為了研究藏豬脾臟中轉(zhuǎn)移因子（TF）的抗氧化作用，試驗(yàn)選擇20只小鼠（雌雄各半），隨機(jī)分為藥物組和對(duì)照組（每組10只），藥物組注射TF，對(duì)照組注射等量生理鹽水，檢測(cè)小鼠部分組織中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。結(jié)果表明，藥物組小鼠脾臟SOD活性與對(duì)照組相比顯著降低（P<0.05），其他組織中SOD活性無顯著差異（P>0.05）。藥物組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟MDA含量均顯著低于對(duì)照組（P<0.05），腎臟MDA含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P>0.05）。說明藏豬脾臟TF能增強(qiáng)其機(jī)體清除自由基的能力。

關(guān)鍵詞：藏豬;脾臟;轉(zhuǎn)移因子（TF）;抗氧化性

中圖分類號(hào)：S828? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1007-273X（2021）04-0010-02

自從1995年Lawrence發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移因子（Tansfer factor，TF）以來[1]，人們對(duì)轉(zhuǎn)移因子的研究越來越廣泛。TF是來自于具有細(xì)胞性免疫功能的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的一類可透析的小分子多肽類物質(zhì)，其分子質(zhì)量小，含多種氨基酸，可提高機(jī)體免疫活性，并且還可以誘導(dǎo)靶細(xì)胞產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子，實(shí)踐中經(jīng)常用于免疫缺陷病以及感染性疾病防治[2，3]。

抗氧化（vAnti-Oxidant）是指抗氧化自由基的簡(jiǎn)稱，抗氧化是任何以低濃度存在就能有效抑制自由基的氧化反應(yīng)的物質(zhì)，機(jī)體在產(chǎn)生自由基的同時(shí)，也產(chǎn)生著抵抗自由基的抗氧化物質(zhì)。超氧化物歧化酶（SOD）是調(diào)節(jié)機(jī)體自由基代謝的重要酶。丙二醛（MDA）含量可衡量機(jī)體內(nèi)自由基的代謝情況[4]。本試驗(yàn)以甘孜州藏豬脾臟為原料，提取藏豬脾臟TF，給小鼠注射后測(cè)定其心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟中SOD和MDA含量，檢測(cè)其抗氧化能力，以為藏豬脾臟TF的進(jìn)一步利用提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料 藏豬脾臟采集于四川省甘孜州姑咱鎮(zhèn)屠宰場(chǎng)。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 昆明系小鼠20只（雌雄各半），體重為18～22 g。由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。

1.1.3 主要試劑 SOD試劑盒、MDA試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 TF的制備 采用冷凍-透析法制備TF，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 動(dòng)物分組及處理 適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后將20只健康小鼠隨機(jī)等分為藥物組和對(duì)照組。在無菌條件下分別注射TF和無菌生理鹽水，即藥物組小鼠每天腹腔注射TF 0.2 mL，對(duì)照組小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.2 mL，持續(xù)15 d。

1.2.3 組織勻漿的制備 注射15 d后脫頸椎處死小鼠，取小鼠心、肝、脾、肺、腎各0.1 g，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去皮下脂肪和其他結(jié)締組織，濾紙拭干，稱重，量筒量取該組織塊9倍質(zhì)量預(yù)冷的生理鹽水，玻璃勻漿器充分研碎，即得組織勻漿，勻漿后3 500 r/min離心12 min，取上清液備用。

1.2.4 組織勻漿中各物質(zhì)含量的測(cè)定 按照相應(yīng)試劑盒說明書分別測(cè)定小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟中SOD和MDA含量。

（1）SOD活力測(cè)定。使用黃嘌呤氧化酶法。

[SOD活力（U/mg）=對(duì)照OD450 nm-測(cè)定OD450 nm對(duì)照OD450 nm]

÷50%×反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)[0.24 mL0.02 mL]÷待測(cè)樣本蛋白濃度（mg/mL）

（2）MDA活力測(cè)定。采用TBA法。

組織中MDA含量（nmol/mgprot）=

[測(cè)定OD532 nm-對(duì)照OD532 nm標(biāo)準(zhǔn)OD532 nm-空白OD532 nm]×標(biāo)準(zhǔn)品濃度[（10 nmol/mL）÷待測(cè)樣本蛋白濃度（mgprot/mL）]

1.2.5 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 藏豬脾臟TF對(duì)小鼠組織中SOD活性的影響

由表1可知，藥物組小鼠脾臟SOD活性較對(duì)照組顯著降低（P<0.05），小鼠其他組織中SOD活性兩組差異不顯著（P>0.05）。

2.2 藏豬脾臟TF對(duì)小鼠組織中MDA含量的影響

由表2可知，藥物組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟MDA含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05），腎臟MDA含量?jī)山M差異不顯著（P>0.05）。

3 小結(jié)與討論

制備非特異性TF應(yīng)選用成年或細(xì)胞免疫功能正?；蜉^強(qiáng)的畜禽作供體[5]。本試驗(yàn)以甘孜州特有物種藏豬脾臟為原料，經(jīng)勻漿、凍融、透析獲得藏豬脾臟中的TF，程序簡(jiǎn)單，可以將藏豬脾臟變廢為寶，為動(dòng)物抗病力及疫病防治工作提供新的途徑和工具。

TF作為一種特定的淋巴細(xì)胞因子，參與機(jī)體的免疫功能。TF通過活化巨噬細(xì)胞，能特異性和非特異性地增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。它能使正常的未致敏的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為致敏的T淋巴細(xì)胞。因此TF可以增強(qiáng)細(xì)胞的免疫應(yīng)答，增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力和促使自身免疫病的康復(fù)。常建軍等[6]研究表明，牦牛轉(zhuǎn)移因子有增加其細(xì)胞免疫的作用。蔣小武等[7]研究表明，鵝脾臟轉(zhuǎn)移因子粗提液對(duì)增強(qiáng)機(jī)體的免疫力具有一定作用。

SOD是生命機(jī)體中存在的一種活性酶，是機(jī)體內(nèi)清除自由基的重要物質(zhì)。MDA產(chǎn)生的量與機(jī)體內(nèi)自由基的水平有關(guān)，機(jī)體受自由基攻擊的程度越嚴(yán)重即MDA的含量越高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，藥物組小鼠脾臟SOD活性顯著降低（P<0.05），小鼠其他組織中SOD活性差異不顯著（P>0.05）。藥物組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟MDA含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05），腎臟MDA含量差異不顯著（P>0.05）。MDA含量的顯著降低反映機(jī)體受自由基攻擊的程度下降，表明藏豬脾臟TF能增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力。

參考文獻(xiàn)：

[1] LAWRENCE H S. The transfer in humans of delayed skin sensitivity to streptococcal M substance and to tuberculin with disrupted leucoeytes[J]. Clin Invest，1955，34（2）：219-230.

[2] 郭成留，程會(huì)昌.動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子及其研究進(jìn)展[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003（6）：46-48.

[3] 葉兵兵，李富桂.雞轉(zhuǎn)移因子脂質(zhì)體對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能及腸絨毛長(zhǎng)度的影響[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2013，41（1）：130-132.

[4] 寧 鵬，張 壽，尚海忠，等.牦牛胎盤抗氧化作用的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009.37（18）：8501-8502.

[5] 張 玲，胡庭俊，陳炳全.馬尾藻多糖對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞增殖及氧化應(yīng)激影響的實(shí)驗(yàn)觀察[J]，西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)2011，24（5）：1967-1971.

[6] 常建軍，文 英，李 莉，等.牦牛脾臟轉(zhuǎn)移因子對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖的影響[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2014，30（5）：38-40.

[7] 蔣小武，曾楊梅，朱樂欣，等.鵝脾臟非特異性轉(zhuǎn)移因子的粗提取與活性鑒定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：2710-2712.