血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平在急性腦梗死患者中的表達及臨床意義

臧棟，楊麗潔，吳振安

(北京市中西醫結合醫院檢驗科，北京 100039)

急性腦梗死(acute cerebral infarction，ACI)是腦血供突然中斷后所致的腦組織壞死，起病突然，且致死率及致殘率高，多數患者治療后仍會遺留一定程度的后遺癥，給患者家屬及社會帶來巨大的負擔[1-2]。因此，加強ACI患者的病情監測及預后評估尤為重要。有證據[3]顯示，ACI患者常伴隨血清同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)水平的異常升高，可能是引發其發生的重要影響因素之一。脂蛋白磷脂酶A2(lipoprotein phospholipase A2，Lp-PLA2)是一種血管特異性的炎癥標志物。研究[4]表明，Lp-PLA2可加速動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)形成，是導致AS發生的重要危險因素之一，還會增加腦血管疾病發生的風險。Beclin-1是一種自噬調控基因，可參與調控細胞凋亡，可能在腦組織缺血再灌注損傷中發揮了重要作用[5]。目前，上述三種物質在ACI患者中的意義尚未完全明確。本研究探旨在探討Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1在ACI患者中的表達水平及臨床意義，以期為患者病情監測及預后情況評估提供數據參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2020年10月北京市中西醫結合醫院收治的83例ACI患者為觀察組，再按腦梗死面積分為小面積組(n=34)、中面積組(n=26)及大面積組(n=23)；按神經缺損程度分為輕度組(n=37)、中度組(n=23)、重度組(n=23)；按隨訪兩個月患者預后結局分為生存組(n=69)和死亡組(n=14)；另選50名同期體檢健康的志愿者為對照組。觀察組中，男性57例，女性26例；年齡33～73歲，平均(52.84±9.85)歲；體質量指數(body mass index，BMI)(23.84±1.55)kg/m2；既往史：高血壓25例，糖尿病15例。本研究經醫院倫理委員會審核批準，患者及家屬知情同意，觀察組與對照組患者一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

納入標準：(1)均符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》[6]中急性缺血性腦卒中的診斷標準；(2)年齡18～80周歲；(3)初次發病，發病時間≤4.5 h；(4)血壓<180/100 mmHg；(5)近期無重大手術史、無出血傾向；(6)近期未服用降脂類藥物；(7)配合度高，自愿檢測相關指標；(8)近期均無降脂類藥物服用史。排除標準：(1)經CT檢查發現有顱內出血、顱內腫瘤、腦血管畸形等；(2)既往有顱內出血史，入組前3個月內有頭顱外傷史及心肌梗死史；(3)合并活動性出血、嚴重創傷者；(4)血小板計數<100×109/L；(5)伴精神疾病、晚期惡性腫瘤；(6)伴自身免疫性疾病、血液系統疾病；(7)肝、腎及心功能不全；(8)妊娠、哺乳女性。

1.2 方法

1.2.1 病情評估及隨訪 (1)腦梗死面積：采用頭顱CT、MRI檢查后評估，面積<1.5 cm為小面積梗死，1.5～3 cm為中面積梗死；>3 cm且累及兩個以上解剖部位為大面積梗死；(2)神經缺損程度：采用美國國立衛生研究院卒中量表(national Institute of health stroke Scale，NIHSS)[7]評分評估，≤4分為輕度，5～15分為中度，≥16分為重度；(3)隨訪：觀察組患者以電話、短信或門診復查隨訪2個月預后結局，即生存或死亡。

1.2.2 血清學指標檢測 采集所有研究對象晨起空腹靜脈血5 mL，離心分離血清。酶循環法檢測Hcy水平，試劑盒購自寧波美康生物科技股份有限公司；酶聯免疫法檢測；Lp-PLA2、Beclin-1水平，試劑盒分別購自天津康爾克生物科技有限公司、美國Usbiological公司。操作均按試劑盒說明進行。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 觀察組與對照組血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平比較

觀察組血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組與對照組血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平比較

2.2 不同梗死面積患者血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平比較

不同梗死面積患者血清血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平差異有統計學意義，且大面積組高于小面積組及中面積組(P<0.05)，中面積組高于小面積組(P<0.05)。見表2。

表2 不同梗死面積患者血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平比較

2.3 不同神經缺損程度患者血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平比較

不同神經缺損程度患者血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)，且重度組高于輕度組及中度組(P<0.05)，中度組高于輕度組(P<0.05)。見表3。

表3 不同神經缺損程度患者血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平比較

2.4 不同預后結局患者血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平比較

死亡組患者血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平高于生存組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同結局患者血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin1水平比較

3 討論

ACI是十分常見的腦卒中類型，發病機制較復雜，一般認為是因患者供應腦部血液的動脈出現粥樣硬化和血栓形成，造成管腔狹窄、閉塞，繼而引發區域性腦組織出現缺血，最終導致其發生[8]。患者由于腦部局灶性血運減少，會損傷周圍神經元細胞、神經膠質細胞等，造成神經功能損害，誘發感覺及運動異常，甚至意識障礙，危及患者生命。

已有證據[9]表明，AS是導致ACI發生的重要病理生理學機制，而炎癥反應在AS的發生、發展過程中扮演了重要角色。Lp-PLA2是磷脂酶A2超家族中的成員之一，主要由淋巴細胞、巨噬細胞等炎性細胞分泌，是一種與低密度脂蛋白C(low density lipoprotein C， LDL-C)水解氧化生成促炎物質相關的酶。有文獻[10]報道，Lp-PLA2不僅與血管炎性反應關系密切，還對AS、不穩定斑塊形成有促進作用。本研究結果顯示，觀察組患者血清Lp-PLA2水平高于對照組，且隨著ACI患者的腦梗死面積增大、神經缺損程度加劇及預后結局的惡化不斷升高(P<0.05)，表明其水平可能在一定程度上反映了患者病情進展情況，并可作為預后評估的潛在參考指標。LDL的氧化過程中，Lp-PLA2作用后產生了自由脂肪酸、溶血磷脂酰膽堿兩種促炎產物，均會刺激黏附因子及細胞因子產生，從而促進AS的發生，加速病情進展。

血清同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是蛋氨酸代謝的中間產物，為一種血管損傷性氨基酸，與血管內皮損傷密切相關。既往研究[11]顯示，血清Hcy水平異常升高可能會增大AS等心血管疾病的發生風險。近年有研究[12]發現，血清Hcy水平異常升高在ACI患者中也較為常見，且Hcy水平越高，患者神經功能損傷越嚴重，可能是Hcy可介導炎癥因子和自由基的生成，而高Hcy水平會引發機體的炎癥反應和氧化應激增加，損害血管內皮細胞，導致血管功能障礙，病情加劇[13]。本研究結果顯示，觀察組患者血清Hcy水平明顯高于對照組，且隨患者腦梗死面積、神經缺損程度的增加而升高(P<0.05)，表明Hcy可能與ACI的發生發展有關，可能是一種潛在的病情監測指標。同時，本研究還發現，死亡組患者血清Hcy水平高于生存組(P<0.05)，提示監測血清Hcy水平對患者預后判斷可能也有一定的意義。

Beclin-1屬于酵母Apg6/Vps30基因的同源物，能與死亡相關蛋白相結合，誘導細胞凋亡。多數哺乳動物體內均含有Beclin-1蛋白，能夠參與自噬調控機制，當機體內存在氧化應激、神經毒反應時，會激活機體發生自噬[14]。目前有關Beclin-1在ACI患者中的表達情況報道較少。本研究結果顯示，ACI患者血清Beclin-1水平升高，且隨著腦梗死面積增大、神經缺損程度加劇不斷升高(P<0.05)，表明Beclin-1可能參與了ACI的發生、發展過程。腦缺血損傷后，機體主要通過抑制自噬，發揮對神經保護的作用，而Beclin-1蛋白可能在此過程中起到關鍵作用。一項動物實驗研究[15]表明，ACI大鼠梗死組織中的Beclin-1蛋白表達明顯增多，提示腦缺血時可能存在神經細胞的過度自噬。本研究還發現，存活患者相比，死亡組患者血清Beclin-1水平高于生存組(P<0.05)，表明Beclin-1與患者預后也存在一定關聯，可為預后評估提供參考。

綜上所述， ACI患者血清Hcy、Lp-PLA2及Beclin-1水平升高，并與腦梗死面積、神經缺損程度及患者預后有關，可作為患者病情監測及預后評估的指標。