胃癌組織中CapG、Prox-1、TrkB的表達與胃癌淋巴結轉移及預后的關系*

李 姝,郭蓮怡

(1.遼寧省盤錦市中心醫院消化內科 124010;2.錦州醫科大學附屬第一醫院消化內科，遼寧錦州 121099)

胃癌是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國各種惡性腫瘤中發病率居首位。近年來，胃癌的早期診斷率不斷提高，但是大多數胃癌患者在被診斷時處于中晚期，其預后相對較差[1]。我國胃癌患者的5年生存率為20%～30%[2]，明顯低于日本。淋巴結轉移(LNM)是胃癌預后的重要影響因素。術前對LNM進行評估與手術方案的選擇及淋巴清掃范圍的確定存在密切關系[3]。目前，對于胃癌LNM尚無精準的判斷方法。螺旋CT是評估LNM的常用手段，但文獻報道其診斷LNM的靈敏度及特異度分別在55%、86%左右[4]。

近年來，分子生物標志物在惡性腫瘤LNM的評估研究中成為熱點。傳統分子生物標志物的靈敏度及特異度并不高，存在一定局限性。巨噬細胞加帽蛋白G(CapG)、酪氨酸激酶受體B(TrkB)、同源異型盒基因轉錄因子1(Prox-1)、基質金屬蛋白酶2(MMP-2)、血管內皮生長因子C(VEGF-C)及血管內皮生長因子受體3(VEGFR-3)等新型的分子生物標志物，參與了胃癌發生、發展的各個階段[5]，但其與胃癌LNM及預后的相關性研究報道少見。本研究探討以上分子新型生物標志物表達對胃癌LNM及預后的影響，以期為臨床提供科學的依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2014年1月至2015年4月在錦州醫科大學附屬第一醫院收治的110例胃癌患者的臨床資料。其中男64例，女46例；年齡26～80歲，平均(62.15±4.77)歲；36例早期胃癌，74例進展期胃癌；按照國際抗癌聯盟(UICC)及美國腫瘤聯合會(AJCC)的TNM分期標準進行胃癌分期：Ⅰ期48例，Ⅱ期32例，Ⅲ期28例，Ⅳ期2例；術后病理檢查：LNM 44例，無LNM 66例；組織學分型：分化31例，未分化79例；腫瘤大小：直徑>5 cm 31例，≤5 cm 79例；腫瘤位置：胃體30例,胃角24例,胃竇49例,多灶或全胃7例；浸潤深度：T1～T376例，T434例。所有患者均實施胃癌根治術，在術前經過胃鏡活檢病理檢查確診，且沒有進行任何放化療及生物治療。本研究經醫院醫學倫理委員會審批，所有患者均知情并簽署知情同意書。

1.2 方法

術前，采用EliVision兩步法對胃癌患者的胃鏡活檢組織進行免疫組化染色。兔抗人CapG(Ab94508，1∶200)、兔抗人TrkB(Ab91225，1∶200)、兔抗人Prox-1(Ab96713，1∶200)、兔抗人MMP-2(Ab94032，1∶200)、兔抗人VEGF-C(Ab91106，1∶200)及兔抗人VEGFR-3(Ab90847，1∶200)均購自美國Abcam公司。采用檸檬酸緩沖液進行2 min的高壓抗原修復，DAB顯色進行染色，嚴格按照說明書進行操作。

細胞染色強度評分：0分，無陽性染色；1分，淺黃色；2分，棕黃色為；3分，棕褐色。細胞染色面積評分：0分，陽性細胞百分比0～25%；1分，陽性細胞百分比26%～50%；2分，陽性細胞百分比51%～75%；3分，陽性細胞百分比>75%。染色積分=染色強度評分×染色面積評分，>3分表示陽性表達，≤3分表示陰性表達。

1.3 統計學處理

采用SPSS20.0統計軟件進行分析。計數資料以率表示，采用χ2檢驗；受試者工作特征曲線(ROC曲線)分析不同分子生物標志物預測胃癌LNM的效能；Kaplan-Meier生存曲線分析不同分子生物標志物對胃癌預后的影響。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 LNM組與無LNM組中不同分子生物標志物的表達差異

LNM患者CapG、Prox-1、TrkB、MMP-2、VEGF-C及VEGFR-3的陽性表達率高于無LNM患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 LNM組與無LNM組中不同分子生物標志物陽性表達率比較[n(%)]

2.2 不同分子生物標志物對胃癌LNM的預測效能

ROC曲線分析結果顯示，CapG、Prox-1、TrkB、MMP-2、VEGF-C及VEGFR-3預測胃癌LNM的曲線下面積(AUC)分別為0.790、0.781、0.757、0.697、0.680、0.577，比較差異有統計學意義(P<0.05)。CapG、Prox-1、TrkB的預測價值相對較高，故臨床研究價值較高。CapG、Prox-1及TrkB單獨檢測時，CapG的靈敏度最高(95.16%)，Prox-1的特異度最高(89.37%)；聯合檢測時的AUC均大于單獨檢測，CapG+TrkB的靈敏度最高(89.25%)，CapG+Prox-1+TrkB的AUC最大(0.861)、特異度最高(97.30%)，見表2、圖1。

A：單獨檢測；B：聯合檢測。

表2 不同分子生物標志物單獨或聯合檢測對胃癌LNM的預測效能

2.3 CapG、TrkB及Prox-1對胃癌預后的影響

隨訪時間截止2020年4月30日，隨訪時間38.5(2.8～56.2)個月。7例(6.36%)患者失訪；術后2.8～36.5個月，21例(19.09%)患者死亡，12例(10.91%)患者因發生復發死亡，9例(8.18%)患者因發生轉移死亡。CapG陽性表達與陰性表達患者的總生存率分別為70.00%(42/60)、94.00%(47/50)，Prox-1陽性表達與陰性表達患者的總生存率分別為68.42%(26/38)、87.50%(63/72)，TrkB陽性表達與陰性表達患者的總生存率分別為69.81%(37/53)、91.23%(52/57)，組間比較差異均有統計學意義(P<0.05)，見圖2。

A：CapG；B：TrkB；C：Prox-1。

單因素分析結果顯示，CapG陽性表達、Prox-1陽性表達、TrkB陽性表達與胃癌患者的預后存在相關性(P<0.05)；多因素分析結果顯示，CapG陽性表達(HR=6.524，95%CI：1.012～36.362，P=0.027)是胃癌患者預后的獨立危險因素。

3 討 論

LNM是腫瘤最常見的轉移方式，是指浸潤的腫瘤細胞穿過淋巴管壁，脫落后隨淋巴液被帶到匯流區淋巴結，并且以此為中心生長出同樣腫瘤的現象。在胃癌的臨床診療中，術前對LNM進行精確的評估判斷，對患者的預后具有重要意義。螺旋CT是判斷胃癌LNM現狀的常用手段，但是準確度不夠[6]；超聲胃鏡能夠提高早期胃癌的檢出率，但是對于遠處是否有LNM比較難判斷[7]，限制了其在臨床中的廣泛應用。

CapG是一種肌動蛋白結合蛋白，在各類腫瘤組織中表達的研究報道相對多見，但是在胃癌組織中表達及臨床意義的研究報道較少見。有研究[8]發現，在有LNM胃癌組織中，CapG的表達水平明顯高于無LNM胃癌組織；有一項體外實驗研究[9]結果顯示，過表達的CapG能夠促進胃癌細胞的遷移；但是CapG導致胃癌LNM的具體機制還不清楚。Prox-1是果蠅蛋白在脊椎動物中的同源物；吳文安等研究[10]發現，Prox-1在胃癌組織中的表達水平增高，與胃癌的臨床分期及病理分級存在明顯正相關，提示Prox-1可能與胃癌患者的預后存在相關性。TrkB是腦源性神經營養因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)的受體，能夠對腫瘤的失巢凋亡產生抑制作用，對腫瘤的侵襲遷移起到促進作用；有研究發現，TrkB的表達水平與LNM范圍存在一定相關性[11]。

本研究顯示，CapG、Prox-1、TrkB、MMP-2、VEGF-C及VEGFR-3在有LNM的胃癌患者中的陽性表達率均高于無LNM的胃癌患者，可以說明該6種分子生物標志物與胃癌的LNM存在明顯相關性，與閔叢叢等[12]的研究報道結果相一致。ROC曲線分析結果顯示，CapG、Prox-1、TrkB預測胃癌LNM的AUC均高于其他分子生物標志物，說明CapG、Prox-1、TrkB的臨床研究價值較高。單獨檢測時，CapG的靈敏度最高(95.16%)，Prox-1的特異度最高(89.37%)，與吳元華[13]的研究報道結果相一致；聯合檢測時的AUC均高于單獨檢測，CapG+TrkB的靈敏度最高(89.25%)，CapG+Prox-1+TrkB1的特異度最高(97.30%)，說明不同分子生物標志物聯合檢測，能夠提高靈敏度與特異度；提示術前CapG、Prox-1、TrkB單獨檢測或聯合檢測可能成為預測胃癌LNM的重要手段。

本研究還發現，CapG、Prox-1、TrkB陽性表達胃癌患者的總生存率均低于陰性表達胃癌患者，多因素分析結果顯示，CapG陽性表達是胃癌患者預后的獨立危險因素。研究[14-15]發現，高表達的CapG能夠對胃癌細胞的深層浸潤及轉移起到促進作用，但具體作用機制尚不清楚；Prox-1能夠對腫瘤細胞的增殖及淋巴管的生成起到誘導作用，對胃癌的發生及發展起到促進作用；TrkB能夠對多個重要信號轉導通路進行激活，從而對腫瘤細胞侵襲及轉移起到促進作用。說明CapG、Prox-1、TrkB可能是通過以上作用機制影響胃癌患者的預后。

綜上所述，術前檢測CapG、Prox-1及TrkB表達對胃癌LNM及預后具有較高的預測價值。但是本研究也存在一定的不足，下一步將擴大樣本量進行多中心研究。