IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白在早期宮頸癌中的表達及意義分析

田 玉 河南省葉縣人民醫院婦產科 467200

宮頸癌是女性發病率最高的生殖系統惡性腫瘤，近年來發病呈年輕化趨勢[1]。目前臨床對宮頸癌治療以手術聯合放化療為主，盡早發現并評估患者病情對選擇合理的治療方案，改善預后具有重要意義[2]。腫瘤的轉移過程包括腫瘤細胞增殖、對基膜的侵襲和破壞、血管新生、從原發部位脫離進入外周循環、至轉移臟器著床，多種細胞因子參與其中[3]。研究者發現，腫瘤細胞分泌的白細胞介素-8(IL-8)能夠作用于免疫細胞，抑制宿主的局部免疫過程，通過血管內皮生長因子介導的血管生成，為浸潤和轉移創造有利條件[4]。基質金屬蛋白酶(MMPs)具有降解胞外基質的活性，在腫瘤浸潤過程中發揮重要作用[5]。Ezrin蛋白通過影響黏附因子活性，參與腫瘤的發生與發展[6]。本文中檢測了IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白在宮頸癌前病變與早期宮頸癌組織中的表達，探討其在宮頸癌發生發展中的作用，旨在為早期宮頸癌的診治及預后判斷提供參考。

1 對象與方法

1.1 觀察對象 收集2017年6月—2019年4月在本院婦產科行手術切除的宮頸組織石蠟標本。其中正常宮頸組織30例、上皮內瘤變56例，早期宮頸癌80例。依據FIGO標準對宮頸癌進行臨床分期和組織學分級，其中Ⅰ期30例、Ⅱ期50例，高分化10例、中分化34例、低分化36例；有淋巴結轉移24例，無淋巴結轉移56例。納入本研究的患者術前均無放化療、免疫治療史，臨床資料完整。年齡31～68歲，平均年齡(46.20±9.75)歲。本研究經醫院倫理委員會審核批準，告知患者并簽署知情同意書。

1.2 方法 宮頸組織標本經10%甲醛固定，常規石蠟包埋，4μm連續切片，脫蠟至水，高溫、高壓修復抗原，滴加鼠抗人IL-8單克隆抗體(1∶500)、鼠抗人MMP-2單克隆抗體(1∶500)、鼠抗人MMP-2單克隆抗體(1∶200)，4℃過夜，滴加HRP標記的山羊抗鼠IgG(1∶1 000)，室溫下孵育30min，DAB顯色、蘇木素復染、脫水、封片，檢測試劑購于北京中杉金橋生物技術有限公司。光學顯微鏡下取5個高倍鏡視野判斷結果。每個視野計數200個細胞，計算陽性細胞占細胞總數比例：<5%、5%～25%、26%～50%、>50%依次記0～3分。細胞染色強度：無色、黃色、棕黃色、黃褐色分別記0～3分。二者評分相乘，0分(-)、1～3分(+)、4～5分(++)、≥6分(+++)。

1.3 統計學方法 使用SPSS18.0軟件處理數據，以率表示計數資料，行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達陽性率比較 早期宮頸癌組織中IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白陽性率明顯高于上皮內瘤變組織和正常宮頸組織，差異有統計學意義(P<0.05)；上皮內瘤變組織中IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白陽性率明顯高于正常宮頸組織，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達陽性率比較[n(%)]

2.2 IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白在宮頸癌組織中的表達特點 宮頸癌組織中IL-8主要表達于細胞質，在細胞膜存在少量表達，以彌漫性分布為主；在腫瘤周圍間質中以成纖維肌細胞、炎性細胞為主，且染色較深。MMP-2陽性表達于細胞質，呈片狀彌散性分布，以中強陽性表達為主，在腫瘤周圍間質中呈弱陽性或中陽性表達，巨噬細胞、中性粒細胞中也存在表達。Ezrin蛋白陽性表達于細胞質和細胞膜，以彌漫性分布為主；在腫瘤周圍間質可見成纖維細胞、炎性細胞、平滑肌細胞。見圖1。

圖1 宮頸癌組織中IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達的免疫組化檢測(SP法，×200)

2.3 不同臨床病理指標的宮頸癌患者IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達水平比較 IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達在不同臨床分期、組織學分級的宮頸癌患者中差異無統計學意義(P>0.05)。合并淋巴結轉移的宮頸癌患者病灶組織中IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白陽性表達明顯強于無淋巴結轉移的宮頸癌患者，差異有統計學意義(P<0.01)。見表2。

表2 不同臨床病理指標的宮頸癌患者IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達水平比較[n(%)]

3 討論

IL-8是具有廣泛生物學活性的細胞因子，可表達于多種腫瘤組織和細胞中，影響腫瘤細胞的增殖、分化[7]。但在不同類型的腫瘤組織和細胞中IL-8發揮的生物學作用不盡相同，如在乳腺癌、肺癌細胞中IL-8具有抑癌活性，而在前列腺癌、多發性骨髓瘤細胞中IL-8具有增強活性的作用[8]。本文結果顯示，宮頸癌組織中IL-8陽性率明顯高于上皮內瘤變組織和正常宮頸組織，上皮內瘤變組織明顯高于正常宮頸組織，提示IL-8高表達可能促進宮頸癌的發生與發展。合并淋巴結轉移的宮頸癌患者中IL-8陽性表達明顯增強，結合宮頸癌組織中IL-8表達特點可推測腫瘤細胞分泌的IL-8可能通過作用于成纖維肌細胞、炎性細胞來調節局部免疫反應，促進新生血管生成，為癌細胞的浸潤、轉移提供有利條件。

腫瘤細胞的遷移、侵襲能力與其分泌的蛋白酶降解細胞外基質的能力有關，MMPs是其中一組重要的蛋白水解酶，MMP-2是MMPs家族的主要成員之一，能夠降解Ⅳ型膠原，破壞腫瘤細胞基膜完整性，促進腫瘤轉移[9]。Ezrin蛋白表達水平與腫瘤浸潤、轉移、吞噬能力密切相關[10]。研究者發現，具有強轉移和吞噬能力的黑色素瘤組織中Ezrin蛋白高表達，下調Ezrin蛋白表達后腫瘤細胞吞噬能力消失[11]。本文結果顯示，早期宮頸癌組織中MMP-2、Ezrin蛋白陽性率明顯高于上皮內瘤變組織和正常宮頸組織，上皮內瘤變組織明顯高于正常宮頸組織，提示MMP-2、Ezrin蛋白高表達可能促進宮頸癌的發生與發展。合并淋巴結轉移的宮頸癌患者中MMP-2、Ezrin蛋白陽性表達明顯增強，可能與MMP-2作用于巨噬細胞、中性粒細胞，Ezrin蛋白作用于成纖維細胞、炎性細胞、平滑肌細胞，影響宿主的免疫功能，促進腫瘤組織新生血管形成，促進癌細胞的浸潤與轉移。