HPLC法測定煙酸片的溶出度

本文目的為建立煙酸片溶出度的高效液相測定方法。方法: 色譜柱為Hypersil Gold C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為0.1%三乙胺（用醋酸調節pH值至3.5）-甲醇（90:10），流速為1.0 mL·min-1，檢測波長263 nm，柱溫30 ℃。結果: 煙酸在2.20～39.93 mg·L-1濃度范圍內顯良好的線性關系（r=1）,平均回收率為99.51%（n=9），RSD為0.79%。結論: 該方法準確、可靠，可用于煙酸片的溶出度測定。

煙酸片屬于維生素類藥，煙酸也稱維生素B3，分子式:C6H5NO2，化學名稱3-吡啶甲酸，耐熱、能升華。煙酸在體內轉化為煙酰胺，再與核糖腺嘌呤等組成煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，為脂質氨基酸、蛋白、嘌呤代謝，是組織呼吸的氧化作用和糖原分解所必需。多用于預防和治療煙酸缺乏癥、糙皮病，也用作血管擴張藥，治療高脂血癥等[1]，亦可作為食品飲料的添加劑[2]，在食品領域應用較廣。《中華人民共和國藥典》2020年版二部，煙酸片溶出度采用紫外分光光度法檢測[3]，近年來未見HPLC法測定煙酸片溶出度的相關報道[4-6]。本文研究建立了HPLC法測定煙酸片溶出度的方法，獲得了滿意的結果。

材 料

儀器Thermo UItiMate3000高效液相色譜儀，DAD3000檢測器；UV2600紫外分光光度計；2015CCE070溶出儀；梅特勒XPE205DR電子天平（0.01 mg）。

試劑與藥品煙酸對照品（批號：100434-201603，含量：99.8%，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純，三乙胺、醋酸為分析純，水為去離子水，其它試劑為分析純；煙酸片（均為上海上藥信誼藥廠有限公司，批號：42190701；093170601；093171101規格：50 mg）。

方法與結果

色譜條件色譜柱：賽默飛Hypersil Gold C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：0.1%三乙胺（用醋酸調節pH值至3.5）-甲醇（90:10），流速為1.0 mL·min-1，檢測波長263 nm，柱溫30℃，進樣量20 μl，理論塔板數按煙酸計算不低于2000。

對照品溶液的制備精密稱取煙酸對照品約10 mg，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度；精取10 mL置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。

溶出度供試品溶液的制備取本品按照溶出度測定法（《中華人民共和國藥典》2020年版二部，通則0931第一法），以水900 mL為溶出介質，轉速100 r·min-1，依法操作，經20 min時取樣濾過（0.45 μm微孔濾膜），精取續濾液10 mL置25 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，作為溶出度供試品溶液。

陰性對照溶液的制備按煙酸片處方比例配成不含煙酸的片劑，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

干擾試驗按1色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液20 μl注入色譜儀。結果表明，樣品與對照品色譜圖保留時間相同，陰性對照溶液在煙酸對照品溶液保留時間處均無干擾。

方法學考察

線性關系考察 精密稱取煙酸對照品適量，加水溶解配成相應的質量濃度：2.20,5.18,10.12,14.98,20.06,25.03,3 0.00,39.93 mg·L-1，按1色譜條件，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖, 峰面積分別為：0.9549，2.3734，4.7284，7.0481，9.4693，11.8369，14.2047，18.9383。以質量濃度（C）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸，回歸方程：A=0.4767C-0.0946，r=1，結果表明，煙酸在2.20～39.93 mg·L-1范圍內質量濃度與峰面積的線性關系良好。

精密度試驗 取上述對照品溶液，按2.1色譜條件，精密連續進樣6次，測得峰面積為11.0400、11.0331、11.0356、11.0438、11.0445、11.0550，平均峰面積為11.0420，RSD=0.07%（n=6），結果表明該方法精密度良好。

穩定性試驗 按對照品溶液配制方法制備對照品溶液，按2.1色譜條件，分別在0，1，2，4，8，12 h進樣，測得平均峰面積9.4533，RSD=0.57%（n=6），結果表明供試品溶液在12h內穩定。

重現性試驗 取樣品（批號：42190701），加水900 mL，超聲20 min，濾過（0.45 μm微孔濾膜），取6份續濾液，分別加水稀釋制成每1 mL中約含20 μg的溶液，按2.1色譜條件進樣測定，測得溶出度為99.1、99.5、99.7、99.2、99.4、99.6，平均溶出度99.4%，RSD為0.23%（n=6）。結果表明該方法樣品重現性良好。

加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的煙酸片（約相當于煙酸50 mg），置1000 mL容量瓶中，加水超聲20 min，冷卻，加水稀釋至刻度。精取5 mL，置25 mL容量瓶中，共取9份分三組，每組再分別精密加入濃度為0.0539 mg·mL-1的對照品溶液4，5，6 mL，制成低、中、高三組濃度的供試品溶液,加水稀釋至刻度。按2.1色譜條件測定，計算回收率，平均回收率為99.51%，RSD=0.79%。結果見表1。

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樣品溶出度測定取3批樣品（批號：42190701；093170601；093171101），按上述溶出度供試品溶液的制備方法制備樣品溶出液。用紫外分光光度法測定3批樣品的溶出度；同時用HPLC法，按2.1色譜條件測定3批樣品的溶出度。結果表明紫外分光光度法與HPLC法一致。

討 論

檢測波長的選擇高效液相DAD光譜掃描煙酸對照品溶液最大吸收波長為263 nm；采用UV2600在200～400 nm掃描煙酸對照品溶液，最大吸收波長262 nm。經考察高效液相選擇波長263 nm的色譜圖面積大于選擇波長262 nm的色譜圖面積，故高效液相檢測波長選擇263 nm。

流動相的選擇參閱相關資料[7-9],對多套流動相系統進行了考察，采用本文流動相系統，峰型好，重現性高，保留時間適度，系統穩定無干擾。

耐用性考察本文對流動相系統的耐用性進行了考察，對流動相中甲醇的比例在7%-13%范圍進行了考察；pH值在3.0-4.0范圍進行了考察；流速在0.8、1.0、1.2 mL·min-1范圍進行了考察；柱溫在25℃、30℃、35℃范圍進行了考察；色譜柱使用了超高效色譜柱、Waters高效色譜儀配套專用柱及相應的高效液相色譜儀上進行了考察，差異均不大，峰型均保持良好，本文流動相系統耐用性較好。

拓展測定比較按處方比例自制三批樣品，采用高效液相法和紫外分光光度法對更多批次煙酸片溶出度進行拓展測定比較，并采用統計學分析方法對測定結果差異進行了分析評價，結果，高效液相法與紫外分光光度法測定結果基本一致。