血管內皮生長因子與熱休克蛋白90α和胸苷激酶1在肝惡性腫瘤臨床診斷中的應用價值探討

陳丹 陳博 陳涌泉

1中國人民解放軍陸軍第七十三集團軍醫院檢驗科，廈門 361003；2安徽醫科大學附屬巢湖醫院檢驗科，合肥 238000；3福建醫科大學附屬廈門弘愛醫院醫學檢驗中心

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肝惡性腫瘤是臨床最常見惡性腫瘤之一，其發病率和病死率均比較高。研究顯示2018年全球肝惡性腫瘤的發病率約11.0/10萬，其中我國肝惡性腫瘤的發病例數約占全球總發病數的46.71%［1］。肝惡性腫瘤患者早期常無特殊臨床表現，或僅類似肝硬化體征而不易被發現，肝惡性腫瘤的癥狀主要出現在中晚期，如肝臟腫大、腹水和黃疸等體征，嚴重時可合并出現并發癥，如肝癌破裂出血和肝腎衰竭等［2］。臨床上，肝惡性腫瘤主要依賴于病理活檢進行確診，但因侵入性操作而不易被患者接受；常用血清腫瘤標志物主 要 有 甲 胎 蛋 白（alpha fetoprotein，AFP）、癌 胚 抗 原（carcinoembryonic antigen，CEA）和 糖 鏈 抗 原 199（carbohydrate antigen 199，CA199）等，但其診斷靈敏度和特異性亦不十分理想，因此，尋找新的肝惡性腫瘤血清標志物具有重要意義。近年來，血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、熱 休 克 蛋 白90α（heat shock protein 90α，HSP90α）和胸苷激酶1（thymidine kinase 1，TK1）在肝惡性腫瘤臨床輔助診斷中的價值逐漸得到了研究者們的關注，研究顯示VEGF、HSP90α和TK1在肝惡性腫瘤發展的分子機制中具有重要作用，其表達水平與肝惡性腫瘤的臨床分期有關，VEGF、HSP90α和TK1具有作為肝惡性腫瘤血清標志物的潛能［3-5］。因此，本研究擬通過分析肝惡性腫瘤患者和肝良性疾病患者血清VEGF、HSP90α和TK1的表達水平，探討VEGF、HSP90α和TK1檢測在肝惡性腫瘤臨床診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究共納入2018年7月至2020年6月安徽醫科大學附屬巢湖醫院收治的肝惡性腫瘤患者32例、肝良性疾?。ㄒ倚透窝祝┗颊?2例和同時期體檢健康人32例，其中肝惡性腫瘤患者男性23例，女性9例，年齡（47.80±11.78）歲；肝良性疾病患者男性21例，女性11例，年齡（49.24±13.22）歲；體檢健康人群男性22例，女性10例，年齡（48.32±12.65）歲；3組研究對象在性別和年齡方面比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05），具有可比性。本研究中所有肝惡性腫瘤患者經病理確診。本研究采用患者就診時臨床檢驗剩余樣本進行研究，研究過程和研究結果均已隱藏研究對象相關信息，豁免知情同意。

1.2 檢測方法 所有研究對象于清晨8～10點采集空腹靜脈血3～5 ml（促凝），3 000轉/min離心10 min后分離血清，離心半徑為16.77 cm，采用威海威高VEGF測定試劑盒檢測血清VEGF水平（化學發光法），采用煙臺普羅吉HSP90α定量檢測試劑盒檢測血清HSP90α水平（酶聯免疫法），采用深圳華瑞同康細胞周期分析試劑盒檢測血清TK1水平（酶免疫點印跡化學發光法），收集并分析檢測結果。研究中所有操作步驟嚴格按照科室制定的標準操作規程執行，檢測期間儀器各項指標均處于在控狀態，試劑均在有效期內使用。本研究中VEGF、HSP90α和TK1的參考值范圍為分別為0～160.00 pg/ml、0～82.06μg/ml和0～2.00 pmol/L。

1.3 統計學分析 采用SPSS 25.0軟件進行統計學處理，由于肝惡性腫瘤組患者血清VEGF、HSP90α和TK1水平不符合正態分布，故以均數和四分位數對3組研究對象血清VEGF、HSP90α和TK1水平進行表示；采用Mann-Whitney檢驗比較各組間VEGF、HSP90α和TK1水平，采用ROC分析VEGF、HSP90α和TK1對肝惡性腫瘤和肝良性疾病的鑒別診斷效能；以0.05作為檢驗水準，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 肝惡性腫瘤患者、肝良性疾病患者和健康人群血清VEGF、HSP90α和TK1水平分析 經Mann-Whitney檢驗，肝惡性腫瘤組VEGF、HSP90α和TK1水平均高于肝良性疾病組和健康對照組（均P＜0.05），肝良性疾病組和健康對照組之間VEGF、HSP90α和TK1水平差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表1。

表1 肝惡性腫瘤組、肝良性疾病組和健康人群組血清VEGF、HSP90α和TK1水平分析[M（P25，P75）]

2.2 血清VEGF、HSP90α和TK1水平檢測對肝惡性腫瘤的診斷效能分析 繪制VEGF、HSP90α和TK1對肝惡性腫瘤輔助診斷的ROC，結果顯示VEGF、HSP90α和TK1均具有一定的輔助診斷價值（均P＜0.05），當VEGF、HSP90α和TK1分別取臨界值198.53 pg/ml、106.16μg/ml和1.88 pmol/L時獲得最大的診斷效能，ROC曲線下面積（AUC）分別為0.855、0.895和0.811，見表2和圖1。

圖1 血清VEGF、HSP90α和TK1水平檢測輔助肝惡性腫瘤診斷的ROC曲線

表2 血清VEGF、HSP90α和TK1水平檢測對32例肝惡性腫瘤患者的診斷效能分析

3 討 論

VEGF是一種具有促進血管內皮細胞遷移、增殖和血管形成等重要生理作用的促血管內皮細胞生長因子，其主要生理作用是促進血管內皮細胞的增生［6］。研究顯示，VEGF主要分布于惡性腫瘤血管內皮表面以調節腫瘤血管和淋巴管的生成，與惡性腫瘤的發生發展密切相關；VEGF在惡性腫瘤中通常表現為過度表達，可特異性作用于血管內皮細胞，通過旁分泌的形式來促進血管內皮細胞增殖，誘導腫瘤內生成血管，并可以破壞癌細胞間的連接，促進腫瘤的侵襲［7-8］。HSP90α在細胞內一般僅作為分子伴侶發揮作用，然而當機體處于應激反應狀態時，其在不同組織內具有不同的表達特性，如在某些惡性腫瘤中HSP90α的濃度會顯著增高，并由腫瘤細胞主動將其分泌至細胞外［9］。有研究指出，HSP90α參與多種腫瘤細胞生物學功能的調控過程，具有促進腫瘤細胞生長、轉移和侵襲的能力［10］。管志斌等［4］的研究發現MHCC97H肝癌細胞株HSP90α表達水平明顯高于HepG2肝癌細胞株，提示HSP90α可能與肝惡性腫瘤的轉移有關。TK1是維持細胞周期的S期所依賴的酶之一，TK1的含量與細胞內DNA合成速度呈正相關關系，在細胞周期的G1期TK1水平逐漸升高，在S期時達到頂峰，之后到G2期開始降低；正常人體細胞中的TK1極少釋放到外周血液中，但是在異常增殖細胞中，由于細胞周期的調控遭到破壞，使DNA合成增加，此時TK1呈現高水平，當異常細胞壞死或凋亡時，TK1釋放到外周血中，引起血清TK1水平升高［11-12］。目前，已有關于血清TK1應用于多種惡性腫瘤的早期診斷的報道，如乳腺癌、非小細胞肺癌、骨肉瘤等［13-15］?？梢姡錠EGF、HSP90α和TK1均具有作為惡性腫瘤篩查和療效監測指標的潛力。

在本研究中，肝惡性腫瘤組VEGF、HSP90α和TK1水平均明顯高于肝良性疾病組和健康對照組（均P＜0.05），而肝良性疾病組和健康對照組之間VEGF、HSP90α和TK1水平差異均無統計學意義（均P＞0.05），這表明VEGF、HSP90α和TK1在肝惡性腫瘤患者血清中異常表達，這可能與腫瘤組織的不斷生長密切相關。ROC曲線分析顯示，VEGF、HSP90α和TK1均具有一定的輔助診斷價值（均P＜0.05），且當VEGF、HSP90α和TK1分別取臨界值198.53 pg/ml、106.16μg/ml和1.88 pmol/L時獲得最大的診斷效能，ROC曲線下面積分別為0.855、0.895和0.811，Youden指數分別為0.648、0.736和0.636，可見，血清VEGF、HSP90α和TK1對于肝惡性腫瘤的臨床診斷具有重要的應用價值。

綜上所述，血清VEGF、HSP90α和TK1對肝惡性腫瘤具有一定的輔助診斷價值，臨床上可通過開展血清VEGF、HSP90α和TK1項目檢測，以提高對肝惡性腫瘤臨床診斷的準確性。然而本研究也有一些不足之處，由于本研究肝惡性腫瘤患者樣本量相對較小，故未對不同分期的肝惡性腫瘤患者進行比較分析，數據分析可能存在一定偏倚，我們將在后續的研究中逐漸增加樣本量，以進一步探討VEGF、HSP90α和TK1對肝惡性腫瘤的臨床輔助診斷價值。

利益沖突：作者已申明文章無相關利益沖突