高效液相色譜法測定唑蟲酰胺的含量

周 敏，李敬良

（華北制藥集團愛諾有限公司，河北 石家莊052165）

0 引 言

唑蟲酰胺是一種新型吡唑雜環(huán)類高效殺蟲、殺螨劑，本品化學(xué)名為4-氯-3-乙基-1-甲基-N-{[4-(4-甲基苯氧基)苯基]-甲基}-1H吡唑-5-羧酰胺，分子式為C21H22ClN3O2，分子量為383.9，純品為類白色固體粉末。

唑蟲酰胺的主要作用機制是阻止昆蟲的氧化磷酸化作用，且具有殺卵、抑食、抑制產(chǎn)卵及殺菌的作用。

目前，國內(nèi)有關(guān)唑蟲酰胺的分析方法未見公開報道，本文采用高效液相色譜法，對唑蟲酰胺進行定量分析。該方法操作簡單、快速、準(zhǔn)確，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達到定量分析的要求。

1 儀器與試劑藥品

1.1儀 器

（1）高效液相色譜儀：日本島津公司LC-20A。

（2）檢測器：紫外檢測器，日本島津公司SPD-10A。

（3）Millipore：超純水制備系統(tǒng)。

1.2 試劑和藥品

（1）唑蟲酰胺對照品：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.7%，由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所提供。

（2）唑蟲酰胺樣品：由某公司提供，批號為Y146160102。

（3）甲醇：色譜純。

（4）超純水。

其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

①色譜柱：4.6 mm×250 mm，填料為ODS C18，5μm，依利特生產(chǎn)；②流動相：甲醇∶水=70∶30；③流速：1.0 mL/min；④柱溫：40℃；⑤檢測波長：217 nm。

2.2 溶液制備

（1）對照品溶液。

精確稱取40.0 mg唑蟲酰胺對照品（含量為97.0%）置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶劑溶解，稀釋至每1 mL約含相當(dāng)于唑蟲酰胺400 ug的溶液，搖勻，定容，備用。

（2）供試品溶液。

精確稱取40.0 mg唑蟲酰胺樣品置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶劑溶解，稀釋至每1 mL約含相當(dāng)于唑蟲酰胺400 ug的溶液，搖勻，定容備用。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

（1）稱取40.32 mg唑蟲酰胺對照品溶液置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶劑溶解，搖勻，定容，備用。

（2）精確量取5μL該溶液注入液相色譜儀中，連續(xù)進6針，測峰面積，計算得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.48%。

系統(tǒng)適應(yīng)性實驗結(jié)果見表1。

表1 系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果Table 1 Test results of system suitability

2.4 含量測定方法

（1）精確稱取40.0 mg唑蟲酰胺對照品置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶劑溶解，搖勻，定容，備用。

（2）精確量取5μL該溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

（3）另取唑蟲酰胺供試品適量，同法測定，采用外標(biāo)法以峰面積計算。

唑蟲酰胺色譜圖如圖1所示。

圖1 唑蟲酰胺色譜圖Fig.1 Chromatogram of tolfenpyrad

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察

線性關(guān)系考察的具體步驟如下。

（1）精確稱取102.43 mg唑蟲酰胺對照品(含量為97.0%）置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容。

（2）量取以上溶液分別稀釋成濃度為50.75、101.51、203.02、253.78、507.54 mg/mL的溶液，過濾，取濾液作為供試品溶液。

（3）分別抽取5μL供試品溶液注入高效液相色譜儀中，每個濃度進樣2次，色譜條件同2.1，記錄色譜圖。

（4）以對照品質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=17 028X-176.21，r=0.999 8。

唑蟲酰胺線性關(guān)系如圖2所示。

圖2 唑蟲酰胺線性圖Fig.2 linear graph of oxacylamide

由圖2可以看出，唑蟲酰胺在50.75～507.54 μg/mL范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5.2 精密度實驗

精密度實驗的具體步驟如下。

（1）準(zhǔn)確稱取40.0 mg唑蟲酰胺樣品（含量為96.5%）分別置于50、100、250 mL容量瓶中，用甲醇溶劑溶解，搖勻，定容，備用。

（2）分別抽取3個樣品各5μL，注入高效液相色譜儀中，每個樣品溶液進3針，記錄譜圖，測定峰面積，計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

（3）測得3個樣品的相對平均偏差分別為0.24%、0.18%、0.22%，結(jié)果重復(fù)性好。

精密度實驗結(jié)果見表2。

表2 精密度實驗結(jié)果Table 2 Precision test results

2.5.3 準(zhǔn)確度實驗

（1）從已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)（96.5%）的唑蟲酰胺樣品中稱取3個試樣，分別加入一定量的唑蟲酰胺標(biāo)樣（97.0%）。

（2）每個樣品溶液重復(fù)進針3次，每個待測溶液進1針，記錄譜圖，并分別計算樣品溶液的回收率。

準(zhǔn)確度實驗結(jié)果見表3。

表3 準(zhǔn)確度試驗結(jié)果Table 3 Accuracy test results

由表3可以看出，唑蟲酰胺的回收率及準(zhǔn)確度均良好。

3 討 論

3.1 試驗方法的選擇

（1）紫外分光光度法的選擇項不強，唑蟲酰胺制劑中的其他成分可能會影響吸收，不適合該樣品含量的測定。

（2）氣相色譜法適用于含揮發(fā)性或經(jīng)裂解、衍生化等能氣化的藥品及多組分混合物的定性、定量分析，而唑蟲酰胺的揮發(fā)性較低，此方法不適合。

（3）高效液相色譜法適用于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物及離子型化合物的定性、定量分析，唑蟲酰胺分子量大，揮發(fā)性較低，故選擇高效液相色譜法測定唑蟲酰胺的含量。

3.2 色譜柱的選擇

分別選用Kromasil C8、3.5μm填料色譜柱和ODS C18、5μm填料色譜柱進行測定，結(jié)果表明，2種色譜柱的檢測時間影響不大，因此，選擇成本較低的ODS C18、5μm填料色譜柱。

3.3 檢測波長的選擇

量取5μL對照品溶液注入高效液相色譜儀中，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描，對照品在217 nm和372 nm波長處有最大吸收，但在372 nm波長處的響應(yīng)值太小，故選擇217 nm作為檢測波長。

3.4 溶劑的選擇

依據(jù)唑蟲酰胺的物化性質(zhì)，用甲醇作為溶劑來溶解樣品，并選擇甲醇和水作為流動相。

為得到較好的分離效果和峰形，將流動相按不同比例在色譜柱上進行試驗，最終確定流動相為甲醇∶水=70∶30。

3.5 流速的選擇

通過實驗得出，在流速為1.0 mL/min時，有效成分與雜質(zhì)均能得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，能在短時間得到滿意的分析結(jié)果，提高了工作的效率。

4 結(jié) 語

建立了以高效液相色譜法測定唑蟲酰胺中有效成分的分析方法。實驗結(jié)果表明，唑蟲酰胺在測定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法的準(zhǔn)確度和精密度較高，具有操作簡便、快速的特點，是產(chǎn)品質(zhì)量控制和應(yīng)用研究中較為理想的分析方法。