南京地區(qū)老年冠狀動(dòng)脈疾病病人ApoE基因多態(tài)性與SYNTAX評(píng)分的相關(guān)性研究

楊楊 周瀅 田蕓凡 史倞

冠狀動(dòng)脈疾病(coronary artery disease, CAD)可導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，是一種由環(huán)境和遺傳因素共同作用導(dǎo)致的心血管疾病。全基因組關(guān)聯(lián)研究目前發(fā)現(xiàn)了約60個(gè)CAD的遺傳易感性位點(diǎn)[1]，其中載脂蛋白E (apolipoprotein E, ApoE) 基因多態(tài)性因引起血脂代謝異常而與CAD的發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)。SYNTAX評(píng)分體系是一種新型的按照冠狀動(dòng)脈解剖特點(diǎn)進(jìn)行危險(xiǎn)分層的積分系統(tǒng)，可以客觀反映冠狀動(dòng)脈病變的嚴(yán)重程度。本研究將探討南京地區(qū)老年人群ApoE基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈病變復(fù)雜程度SYNTAX評(píng)分的相關(guān)性，以及ApoE是否可以作為預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈病變復(fù)雜程度的基因?qū)W指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集 2017年8～9月江蘇省人民醫(yī)院心臟科連續(xù)收治的就診戶口所在地為南京的>60歲老年CAD病人109例，進(jìn)行冠脈造影(CAG)檢查。其中男68例，女41例；年齡60～94歲，平均(70.52±7.58)歲。按基因型分為3組，ApoE2組22例，平均年齡(68.09±6.89)歲，男12例，女10例；ApoE3組71例，平均年齡(71.24±7.82)歲，男46例，女25例；ApoE4組16例，平均年齡(70.69±7.12)歲，男10例，女6例。納入標(biāo)準(zhǔn)：通過臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查等考慮有行CAG的病人；排除標(biāo)準(zhǔn)：存在先天性心臟病、心肌病、心臟瓣膜病、心源性休克、惡性心律失常、多臟器功能不全、合并感染性疾病、消化道出血、哮喘、拒絕CAG者。

1.2 研究方法

1.2.1 一般資料收集：記錄病人的性別、年齡、高血壓病史、糖尿病病史、高血脂病史，脂蛋白(a)[Lp(a)]、TC、TG、LDL-C、HDL-C、肌酐(Cr)等臨床指標(biāo)。

1.2.2 CAG檢查：該手術(shù)由經(jīng)驗(yàn)豐富的心內(nèi)科醫(yī)師完成，采用GE大型數(shù)字減影血管造影機(jī)進(jìn)行冠狀動(dòng)脈多體位投照，結(jié)果由2名冠脈方面的介入專家判讀,結(jié)果不一致時(shí)由第3名醫(yī)師分析確定。左主干管腔直徑狹窄≥30%，左前降支、左回旋支、右冠狀動(dòng)脈及其主要分支血管，任何一支血管管腔直徑狹窄≥50%確定為陽性病變。

1.2.3 ApoE基因多態(tài)性檢測(cè)：用試劑盒提取病人清晨空腹血的白細(xì)胞基因組DNA，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR來擴(kuò)增編碼112位和158位氨基酸的ApoE基因片段，再使用限制性內(nèi)切酶AflⅢ和HaeⅡ消化PCR產(chǎn)物，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)掃描電泳結(jié)果，在標(biāo)準(zhǔn)分子量對(duì)照下鑒定不同個(gè)體的ApoE基因型。同時(shí)使用已知的ApoE2、ApoE3、ApoE4質(zhì)粒為模板擴(kuò)增ApoE基因片段，內(nèi)切酶AflⅢ和HaeⅡ消化PCR產(chǎn)物進(jìn)行對(duì)照。

1.2.4 其他生化指標(biāo)的檢測(cè)方法：以高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定TC、TG水平，以超速離心結(jié)合ALBK法測(cè)定LDL-C、HDL-C水平，以膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定Lp(a)水平，運(yùn)用堿性苦味酸法測(cè)定Cr水平。

1.2.5 SYNTAX評(píng)分：首先判斷冠狀動(dòng)脈為左優(yōu)勢(shì)型或右優(yōu)勢(shì)型，再根據(jù)病變部位對(duì)左心室供血的范圍進(jìn)行加權(quán)，然后根據(jù)CAG下病變的具體特點(diǎn)進(jìn)行打分，如血管阻塞的程度、數(shù)量、時(shí)間、長(zhǎng)度以及是否有開口部阻塞等，最后將所有得分相加乘以權(quán)重即得到病人的SYNTAX評(píng)分情況。評(píng)分結(jié)果由2名冠脈方面的介入專家判讀,結(jié)果不一致時(shí)由第3名醫(yī)師分析確定。

2 結(jié)果

ApoE基因表現(xiàn)型分為3種，其中ApoE2表現(xiàn)型包括ApoE2/2和ApoE2/3基因型，ApoE3表現(xiàn)型包括ApoE3/3和ApoE2/4基因型，ApoE4表現(xiàn)型包括ApoE3/4和ApoE4/4基因型。由于ApoE2與ApoE4等位基因可表現(xiàn)出對(duì)CAD相反的作用，因此既往研究中常排除ApoE2/4基因型。在110個(gè)分析對(duì)象中，最終獲得了109個(gè)樣本符合基因型要求，排除1個(gè)ApoE2/4基因型的樣本。

2.1 3組基線資料比較 3組間性別、年齡、高血壓病史、糖尿病病史、高血脂病史、TC、TG、LDL-C、HDL-C、Lp(a)、Cr等方面差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2 ApoE基因表現(xiàn)型與SYNTAX評(píng)分的關(guān)系 3組之間SYNTAX評(píng)分差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。ApoE3組及ApoE4組SYNTAX評(píng)分顯著高于ApoE2組(P<0.05)，而ApoE3組與ApoE4組相比，SYNTAX評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 各組病人基線資料比較

3 討論

CAD是目前影響人類健康的重要疾病之一，其相關(guān)遺傳易感基因多態(tài)性與CAD的關(guān)系逐漸被人們認(rèn)識(shí)，其中ApoE基因多態(tài)性因可能引起血脂代謝異常而與CAD的發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)。本研究中南京地區(qū)老年CAD病人基因表現(xiàn)型為ApoE2、ApoE3、ApoE4的病人比例分別為20.2%、65.1%和14.7%，與以往研究報(bào)道的3種基因表現(xiàn)型在中國人群中的比例分別為23.8%、65.3%和10.9%基本一致[2]。

本研究對(duì)冠狀動(dòng)脈嚴(yán)重程度的評(píng)估采用SYNTAX評(píng)分法，這是一種新型的按照冠狀動(dòng)脈解剖特點(diǎn)進(jìn)行危險(xiǎn)分層的積分系統(tǒng)，可以客觀反映冠狀動(dòng)脈病變的嚴(yán)重程度，該評(píng)分方法很大程度地提升了本研究結(jié)果的可信度。有研究驗(yàn)證了SYNTAX評(píng)分在介入心臟病學(xué)中的應(yīng)用是至關(guān)重要的，評(píng)分越高表示著心臟疾病的嚴(yán)重程度越高，預(yù)后越差。因此，SYNTAX評(píng)分不僅是一種血管造影工具，還在臨床實(shí)踐中對(duì)疾病嚴(yán)重程度的評(píng)估起著重要作用[3]。本研究發(fā)現(xiàn)，在年齡≥60歲的老年冠心病人群中，基因表現(xiàn)型為ApoE2、ApoE3、ApoE4的病人SYNTAX評(píng)分的均值分別為(7.75±7.62)分、(14.77±9.52)分和(15.53±7.14)分，組間比較提示ApoE基因表現(xiàn)型為ApoE2的人群發(fā)生CAD時(shí)冠脈病變的復(fù)雜程度低于ApoE3及ApoE4人群。既往研究提示，ApoE2等位基因?qū)AD具有保護(hù)作用[4]，而ApoE4等位基因的作用與之相反[5-7]。一項(xiàng)臨床研究表明，ApoE3基因表現(xiàn)型者CAD的復(fù)雜程度顯著高于其他基因表現(xiàn)型[8]；此外，另一項(xiàng)觀察性研究表明，冠脈嚴(yán)重狹窄組中ApoE4基因表現(xiàn)型的比例高于輕度狹窄組，這兩項(xiàng)研究的結(jié)果與本研究結(jié)果是一致的[9]。

本研究是一個(gè)單中心回顧性研究，可能存在選擇偏倚。且病例數(shù)稍偏少，缺乏長(zhǎng)期隨訪。上述結(jié)果仍需要更深入和大樣本的研究來進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，本研究涉及的南京地區(qū)老年CAD病人與全國ApoE基因表現(xiàn)型的分布基本一致，SYNTAX評(píng)分提示南京地區(qū)老年CAD病人基因表現(xiàn)型為ApoE3和ApoE4者的CAD復(fù)雜性高于ApoE2者。因此，ApoE的多態(tài)性對(duì)臨床預(yù)測(cè)老年人群CAD的復(fù)雜程度具有重要意義，可作為CAD復(fù)雜性的預(yù)測(cè)因子。