成都地區表觀健康者小而密低密度脂蛋白膽固醇參考區間建立

李 靜，全 暉，曾志榮，韋 祎

（成都醫學院第二附屬醫院 核工業四一六醫院檢驗科，四川 成都 610051）

心血管疾病是目前人類死亡的主要原因。低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）水平升高是獨立的致動脈粥樣硬化的危險因素。LDL根據大小和密度可分為大而輕低密度脂蛋白和小而密低密度脂蛋白（small and dense low-density lipoprotein，sd-LDL）[1]。有研究結果表明，sd-LDL顆粒具有比LDL顆粒更強的致動脈粥樣硬化作用[2]。sd-LDL更易于氧化，且清除緩慢，更易進入動脈管壁，促進泡沫細胞的形成。因此，小而密低密度脂蛋白膽固醇（small and dense low-density lipoprotein cholesterol，sd-LDL-C）水平對于評估致動脈粥樣硬化風險具有十分重要的作用。目前，sd-LDL的檢測方法主要有超速離心法、沉淀分離法、梯度凝膠電泳法和高效液相色譜法等。這些方法均需特殊儀器，操作繁瑣，步驟復雜，耗時較長，不適合臨床常規檢測。而可用于全自動生化分析儀檢測sd-LDL-C的過氧化物酶法具有簡便、快捷的優點，可大批量檢測，適用于臨床常規檢測[3]。由于目前尚無公認的sd-LDL-C參考區間，所以限制了sd-LDL-C在臨床診療及健康評估等方面的應用。為此，本研究擬采用過氧化物酶法檢測成都地區血脂水平正常的表面健康者的sd-LDL-C水平，初步建立基于過氧化物酶法的sd-LDL-C參考區間。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2017年7月—2019年8月核工業四一六醫院表觀健康者846名，其中男474名、女372名，年齡20～69歲，所有對象均經詢問病史、體格檢查、心電圖檢查、影像學檢查和實驗室檢查排除冠心病、糖尿病及肝、腎疾病，3個月內未服用降脂藥物，空腹三酰甘油（triglyceride，TG）＜1.7 mmol/L、總膽固醇（total cholesterol，TC）＜5.2 mmol/L、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）＜ 3.4 mmol/L[4]。將所有對象按年齡（20～29歲、30～39歲、40～49歲、50～59和60～69歲）和性別（男性、女性）分別分組。

1.2 方法

采用肝素鋰抗凝真空管采集所有對象禁食12 h后清晨安靜狀態下的空腹靜脈血5 mL，1 007×g離心10 min，2 h內完成TC、TG、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、LDL-C、載脂蛋白A1（apolipoprotein A1，apo A1）、載脂蛋白B（apolipoprotein B，apo B）和sd-LDL-C 的檢測。

TC和TG均采用酶法檢測，HDL-C采用直接法-選擇抑制法檢測，LDL-C采用直接法-表面活性劑清除法檢測，apo A1和apo B采用免疫比濁法檢測，sd-LDL-C采用過氧化物酶法檢測，試劑均購自北京九強生物技術股份有限公司，檢測儀器為AU2700 全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）。

1.3 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行統計分析。呈正態分布的數據以表示，呈非正態分布的數據以中位數（M）[四分位數（P25～P75）]表示，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗，兩兩比較采用Mann-WhitneyU檢驗；不同性別之間比較采用Mann-WhitneyU檢驗。采用百分位數法建立參考區間[5]，血脂的適宜水平采用M（P2.5～P97.5）表示。采用Spearman等級相關分析評估各項目之間的相關性。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同性別表觀健康者血脂水平的比較

男性、女性之間血漿TC、TG、HDL-C、LDL-C、apo A1、apo B和sd-LDL-C水平差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同性別表觀健康者血脂水平的比較

2.2 表觀健康者sd-LDL-C水平分布

表觀健康者血漿sd-LDL-C呈近似偏態分布。sd-LDL-C隨年齡的增長逐漸升高，男性50～59歲達到峰值（M為0.63 mmol/L），女性60～69歲達到峰值（M為0.63 mmol/L）。20～49歲各年齡段男性血漿sd-LDL-C水平均高于同年齡段女性（P＜0.05）；50～59歲和60～69歲男性、女性之間血漿sd-LDL-C水平差異均無統計學意義（P＞0.05）。見圖1。

圖1 各年齡段表觀健康者sd-LDL-C水平分布

2.3 男性、女性各年齡組血脂適宜水平的分布

不同性別各年齡組之間TC、TG、LDL-C、apo B和sd-LDL-C項目的適宜水平差異均有統計學意義（P＜0.05）。男性HDL-C、apo A1項目和女性HDL-C項目的適宜水平各年齡組之間差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 男性、女性各年齡組血脂適宜水平的分布

續表2

2.4 年齡、sd-LDL-C與各項指標的相關性

年齡與TC、TG、LDL-C、apo A1、apo B和sd-LDL-C呈正相關（r值分別為0.235、0.245、0.298、0.070、0.323、0.278，P＜0.05），與HDL-C呈負相關（r=-0.017，P＜0.05）。

sd-LDL-C與TC、TG、LDL-C、apo B和sd-LDL-C呈正相關（r值分別為0.601、0.544、0.758、0.757，P＜0.05），與HDL-C、apo A1呈負相關（r值分別為-0.256、-0.123，P＜0.05）。

2.5 不同來源sd-LDL-C參考區間的比較

采用百分位數法（P2.5～P97.5）建立本地區表現健康者sd-LDL-C的參考區間。本研究建立的sd-LDL-C參考區間與已有的sd-LDL-C參考區間的比較見表3。

表3 不同來源的sd-LDL-C參考區間的比較

續表3

3 討論

《中國成人血脂異常防治指南（2016年修訂版）》[4]指出，中國成人血脂異常總體發生率高達40.4%，提示未來我國人群血脂異常及相關疾病的負擔將繼續加重。目前，臨床血脂檢測面臨以下問題：LDL-C水平并不能完全反應LDL的生物學效應，單純的LDL-C檢測并不能完全反映動脈粥樣硬化性心血管疾病（atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）患者的真實血脂水平[10]。因此，臨床近年來開始更多地關注脂蛋白“質”的變化及其對疾病的影響。有研究結果顯示，人體內高sd-LDL-C水平與ASCVD的發生密切相關，sd-LDL-C作為預測和評估ASCVD風險的指標比LDL-C更敏感[11]。目前，sd-LDL-C已引起臨床和實驗室的高度重視，被美國國家膽固醇教育計劃成人治療組列入新發現的重要心血管疾病危險因素之一[12]。但受檢測技術的限制，目前尚未見成都地區sd-LDL-C分布的報道。為了更好地發揮sd-LDL-C的臨床價值，建立本地區sd-LDL-C的參考區間尤為重要。因此，本研究對成都地區表觀健康者sd-LDL-C的分布情況進行探討，并初步建立其參考區間。

本研究結果顯示，成都地區表觀健康者血清sd-LDL-C呈偏態分布。不同年齡和性別之間sd-LDL-C水平差異均有統計學意義（P＜0.05）。sd-LDL-C與年齡呈正相關（r=0.278，P＜0.05）。20～49歲各年齡段男性血漿sd-LDL-C水平均高于同年齡段女性（P＜0.05）；50～59歲男性血漿sd-LDL-C水平稍高于女性，但差異無統計學意義（P＞0.05）；60～69歲男性血漿sd-LDL-C水平稍低于女性，但差異無統計學意義（P＞0.05）。女性血漿sd-LDL-C水平隨年齡增長而升高，60歲后稍高于男性，可能與女性絕經后TG和sd-LDL-C水平升高有關，提示女性絕經后有更高的冠狀動脈硬化風險。因此，我們下一步將研究中老年女性血脂水平與絕經的相關性。本研究各年齡段表現健康者sd-LDL-C水平分布趨勢與陳立平等[6]和從輝等[7]的報道相似，但總體水平高于陳立平等[6]、從輝等[7]、HIRANO等[8]和ITO等[9]的報道，這可能與人群、生活習慣、檢測方法不同有關。劉芳等[13]的研究結果顯示，濟南地區人群血清sd-LDL-C水平存在性別和年齡差異，與本研究結果一致。本研究使用的過氧化物酶法試劑說明書提供的參考區間相對較寬，高于本研究建立的sd-LDL-C參考區間，提示各臨床實驗室應建立符合本地區人群的與年齡、性別相關的sd-LDL-C參考區間。

本研究結果還顯示，sd-LDL-C與 TC、TG、LDL-C、apo B呈正相關（r值分別為0.601、0.544、0.758、0.757，P＜0.05），與HDL-C、apo A1呈負相關（r值分別為-0.256、-0.123，P＜0.05），與陳力平等[6]、從輝等[7]的研究結果一致。sd-LDL顆粒的形成高度依賴于TG水平和遺傳因素，其他環境因素也可能會影響這一過程。糖尿病、代謝綜合征、胰島素抵抗和高TG血癥患者LDL顆粒水平會明顯升高，這可能是此類患者血管疾病高發的部分原因。sd-LDL的理化特性可能會導致動脈粥樣硬化的風險升高，這是因為sd-LDL更易進入動脈壁的內皮下空間，增強了與內膜蛋白多糖的結合能力，導致其更易被巨噬細胞氧化和攝取，促進泡沫細胞形成。LDL受體對sd-LDL識別率較低，導致血漿sd-LDL的半衰期較長，進而使其氧化作用增強，代謝遲緩[8]。

與年齡和性別相關的參考區間是一個質量指標，正確使用這些參考區間可以為臨床決策提供有效的參考[14-15]。因此，各臨床實驗室應根據年齡、性別、地域等實際情況建立自己的參考區間。本研究按年齡和性別分別分組，建立了成都地區基于過氧化物酶法、與年齡和性別相關的sd-LDL-C參考區間。本研究尚存在一些不足，如＞50歲表觀健康女性例數較少。在后續工作中，我們會繼續關注中老年人群，進一步研究該目標人群血脂水平的影響因素及其對心腦血管的影響。

綜上所述，sd-LDL-C的參考區間對監測和控制ASCVD風險有重要意義[16]。本研究建立的sd-LDL參考區間可為患者管理、臨床疾病或治療效果的解釋提供可靠的參考信息。