P16蛋白聯(lián)合高危型人乳頭瘤病毒測定在宮頸疾病中的篩查效果及診斷效能研究

江亞寧

(湖南省婦幼保健院，湖南 長沙 410000)

宮頸是女性重要的內(nèi)生殖器，而宮頸疾病是指宮頸區(qū)域發(fā)生的病變，包括炎癥、損傷、腫瘤等，是女性常見的疾患之一[1]。患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，臨床多表現(xiàn)為白帶增多、下腹及腰骶部疼痛、外陰瘙癢及排尿困難，影響患者生活[2]。陰道鏡活組織檢查是宮頸疾病患者常用的檢查方法，并將其視為“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是該檢查方法風(fēng)險性、創(chuàng)傷性較大，導(dǎo)致患者診斷耐受性、依從性較差。研究表明[3]，P16蛋白屬于腫瘤相關(guān)基因蛋白，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中呈過表達現(xiàn)象。P16蛋白與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)基因用于宮頸疾病篩查，具有方法簡單、易于操作、能減少經(jīng)濟支出等優(yōu)點[4]。因此，本研究探討了P16蛋白聯(lián)合HPV測定在宮頸疾病中的篩查應(yīng)用效果及診斷價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年3月—2019年4月宮頸病變患者240 例，年齡(47.84±4.71) 歲；宮頸上皮內(nèi)瘤變CINⅠ 83 例，CINⅡ 104 例，CINⅢ 34 例，鱗癌19 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合宮頸疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，且患者均經(jīng)陰道鏡檢查最終確診；能遵醫(yī)囑完成P16和HPV檢查，且患者均能耐受；意識清楚，能與醫(yī)生進行溝通、交流。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并已經(jīng)確診的宮頸癌患者、入院資料不全者；精神狀態(tài)異常患者。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

所有患者入院后均取病灶組織與病灶旁組織(≥3 cm)，石蠟包埋后，常規(guī)制備切片，備用。

1.2.2 P16蛋白測定

采用免疫組化技術(shù)測定不同組織中P16蛋白陽性表達水平。取上述獲得的病灶組織與癌旁組織，利用多聚甲醛4%常溫下固定，經(jīng)石蠟包埋后制備4 μm切片，向切片中加入濃度為3%的過氧化氫(H2O2)阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，分別加入P16一抗(以PBS代替一抗作陰性對照)，4 ℃下過夜，然后加入生物素標(biāo)記的P16二抗，常溫下完成10 min孵育，用DAB顯色后進行蘇木素染色，用中性樹膠常規(guī)封固。免疫組化染色下隨機取10 個非重疊視野，完成細胞陽性比例計算[5]。判斷方法：P16陽性信號位于胞核或胞漿，上述抗體的陽性對照染色強度均記為2+；對于待測腫瘤細胞無信號為0，弱于對照組記為1+，等于記為2+，強于記為3+。估算陽性區(qū)域百分比。0和1+為陰性，2+和3+為陽性[6]。

1.2.3 HPV定量檢測

借助美國Digene公司提供的HPV試劑盒完成13 種高危HPV亞型檢測，包括HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68。但是，該方法不能對單一HPV進行分型，對于任何一種高危型人乳頭瘤病毒基因檢測(HPV-DNA)超過設(shè)定的閾值或正常值時，測定結(jié)果視為陽性[7]。

1.2.4 診斷效能

繪制接受者操作性(ROC)曲線，分析P16蛋白聯(lián)合HPV檢測在宮頸疾病中的診斷敏感性、特異性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 宮頸疾病不同組織P16蛋白陽性率比較

宮頸疾病病灶組織中P16蛋白陽性患者183 例(76.25%)，高于病灶旁組織[P16蛋白陽性5例(2.08%)](P<0.05)。免疫組化結(jié)果表明：宮頸疾病組織中多數(shù)細胞呈陽性，染色呈褐色；而在病灶旁組織中陽性細胞較少，呈淡黃色(見圖1)。

A B

2.2 不同類型宮頸疾病HPV陽性率比較

240 例患者均完成HPV檢測，結(jié)果表明：HPV陽性患者184 例(陽性率76.67%)。HPV陽性率前三位為鱗癌、CINⅢ和CINⅡ，分別占100.00%，91.18%和90.38%(見表1)。

表1 不同類型宮頸疾病HPV陽性率比較

2.3 P16蛋白聯(lián)合HPV測定在宮頸疾病中的診斷效能

ROC曲線結(jié)果表明：P16蛋白聯(lián)合HPV測定宮頸疾病診斷敏感性、特異性均高于單一P16蛋白和HPV檢測(P<0.05)(見表2)。

表2 P16蛋白聯(lián)合HPV測定在宮頸疾病中的診斷效能

3 討 論

近年來，P16聯(lián)合HPV測定在宮頸疾病中廣泛應(yīng)用，且效果理想[8]。本研究中，宮頸疾病病灶組織中P16蛋白陽性患者183 例(陽性率76.25%)，高于病灶旁組織(P16蛋白陽性5 例，陽性率2.08%)(P<0.05)；免疫組化結(jié)果表明：宮頸疾病組織中多數(shù)細胞呈陽性，染色呈褐色，而在病灶旁組織中陽性細胞較少，呈淡黃色，說明P16聯(lián)合HPV測定能為臨床診療宮頸疾病提供參考依據(jù)。P16是一種抑癌基因，能參與細胞周期G1期的抑制，促進凋亡與修復(fù)。同時，P16能通過經(jīng)典信號途徑實現(xiàn)對細胞周期的抑制作用，從而引起該途徑失控，細胞過度增殖。研究表明[9]：高危型HPV能誘導(dǎo)P16蛋白過表達，而過度表達的P16亦可引起P16-pRb(抑癌基因)反饋循環(huán)破壞，難以發(fā)揮腫瘤抑制作用。HPV是一種能特異性地感染人皮膚、黏膜鱗狀上皮細胞，引起多種良、惡性病變的DNA病毒。同時，HPV感染是宮頸鱗癌、上皮肉瘤發(fā)生的必要條件，持續(xù)的HPV感染能增加宮頸癌發(fā)生率。本研究結(jié)果表明：HPV陽性患者184 例，陽性率為76.67%。HPV陽性率前三位分別為鱗癌、CINⅢ和CINⅡ，分別占100.00%，91.18%和90.38%。臨床上將P16蛋白聯(lián)合HPV測定用于宮頸疾病中能發(fā)揮不同測定方法的優(yōu)勢，可獲得較高的診斷效能。本研究中，ROC曲線結(jié)果表明：P16蛋白聯(lián)合HPV測定宮頸疾病診斷敏感性、特異性，均高于單一P16蛋白和HPV檢測(P<0.05)。因此，宮頸疾病患者加強P16蛋白、HPV檢測能幫助患者確診，避免延誤最佳診療時機[10]。

綜上所述，P16蛋白在宮頸疾病組織中呈高表達，聯(lián)合HPV檢測診斷宮頸疾病組織具有較高的診斷敏感性、特異性，能為臨床診療提供參考依據(jù)。