長航保存去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞儲血袋三種放置方式的溶血性分析

史大川，姚雪，劉偉，李燕，初慧，王曉婷，孫青菊

在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展中，輸血技術(shù)是一種重要的支持手段，也是醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要載體，輸血技術(shù)的發(fā)展能夠提高治療水平和醫(yī)療質(zhì)量[1]。近年來，隨著成分輸血的應(yīng)用推廣，去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞是國內(nèi)外臨床應(yīng)用最廣泛的一種血液制品，在封閉條件下，過濾去除掉全血中的白細(xì)胞以及分離出大部分血漿，并加入紅細(xì)胞營養(yǎng)添加液制成去白細(xì)胞的懸浮紅細(xì)胞，成分血的輸注能有效減少由于輸注全血而引發(fā)過敏反應(yīng)的可能性[2-4]。

在陸地儲血冰箱內(nèi)，去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞儲存都是直立方式放置，然而長航狀態(tài)下，在船上的去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞的放置方式?jīng)]有相關(guān)文獻(xiàn)報道。因此，本試驗將依托長航中血液保障任務(wù)，研究長航保存去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞儲血袋3種不同的放置方式對游離血紅蛋白含量和紅細(xì)胞溶血率的影響，探討長航船上去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞合適的儲存方式。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 長航區(qū)域海洋氣象條件 天氣晴轉(zhuǎn)多云，偶有陣雨，氣溫24.2～27.1 ℃，海水溫度22.4～24.5 ℃，浪高3～5 m，海況4～5級，搖擺度平均3.5°，累計長航時間40 d。

1.1.2 試驗儀器與試劑 三洋儲血冰箱(日本三洋集團(tuán))，Beckman J6-HC型低溫大容量離心機(jī)(美國貝克曼庫爾特有限公司)，600A白洋離心機(jī)(北京白洋醫(yī)療器械有限公司)，生物安全柜HR40-IIA2(中國海爾集團(tuán))，Mindray BC-5000全自動血液細(xì)胞析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)，南京德鐵BS-1101酶標(biāo)儀(南京德鐵試驗設(shè)備有限公司)，自動溫控運(yùn)血箱(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生裝備研究所)，去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞保存液四聯(lián)袋(四川南格爾生物醫(yī)學(xué)有限公司)，Hemoglobin Assay Kit(西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司)等。

1.1.3 血液采集與分組 根據(jù)《獻(xiàn)血者健康檢查要求》(GB 18467-2011)，于長航前1 d，隨機(jī)采集和制備去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞(red blood cells in additive solution leukocytes reduced)5人份(1.5 U)。每份血液等分為3份，標(biāo)記為垂直懸掛組、直立貼合組和平鋪碼放組。

1.2 方法

1.2.1 試驗標(biāo)本處理與數(shù)據(jù)采集 試驗血液儲存于船上專用儲血冰箱內(nèi)，溫度為(4±2) ℃，分3種方式擺放儲存(垂直懸掛、直立貼合和平鋪碼放)。試驗血液在運(yùn)輸過程中，血液均置于運(yùn)血箱內(nèi)運(yùn)輸，溫度為(4±2) ℃。試驗血液于儲存終末期取樣進(jìn)行檢測。

1.2.2 試驗標(biāo)本檢測 在無菌條件下，每袋試驗血液分別取10 ml至標(biāo)本管中，標(biāo)本管中血液使用Mindray BC-5000全自動血液細(xì)胞析儀檢測紅細(xì)胞比容和總血紅蛋白濃度，然后3 000 r/min離心10 min(離心半徑r=17.5 cm)，取上清，用Hemoglobin Assay Kit檢測游離血紅蛋白含量。紅細(xì)胞溶血率由紅細(xì)胞比容、總血紅蛋白濃度和游離血紅蛋白濃度計算得到。計算公式為：

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

檢測數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件作統(tǒng)計處理。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，3組間采用單因素方差分析，兩組間采用LSD 進(jìn)行分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種方式儲存紅細(xì)胞中游離血紅蛋白含量比較

垂直懸掛組、直立貼合組、平鋪碼放組游離血紅蛋白含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.048)，直立貼合組和平鋪碼放組的游離血紅蛋白含量均比垂直懸掛組低，并且直立貼合組明顯優(yōu)于垂直懸掛組(P=0.016)，但是平鋪碼放組與另2組的差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 3種儲存方式游離血紅蛋白檢測結(jié)果(g/L)

2.2 3種方式儲存紅細(xì)胞中紅細(xì)胞溶血率比較

垂直懸掛組、直立貼合組和平鋪碼放組中的紅細(xì)胞溶血率差異比較明顯(P<0.05)，而且直立貼合組紅細(xì)胞溶血率明顯低于垂直懸掛組(P<0.05)，但平鋪碼放組與另2組的差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 3種儲存方式紅細(xì)胞溶血率檢測結(jié)果(%)

3 討論

在現(xiàn)代輸血技術(shù)中，成分輸血在臨床治療中占有重要地位，需要補(bǔ)充紅細(xì)胞的臨床患者占80%以上[5]。因此，對儲存期內(nèi)去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞的質(zhì)量評價就顯得十分重要。

血液采集后儲存在含有全血保養(yǎng)液的儲血袋中，通過運(yùn)輸和成分制備，紅細(xì)胞最后保存在MAP保養(yǎng)液(每1 000 ml紅細(xì)胞保存液含枸櫞酸三鈉1.5 g、枸櫞酸0.2 g、葡萄糖7.93 g、磷酸二氫鈉0.94 g、腺嘌呤0.14 g、氯化鈉4.97 g、甘露醇14.57 g)中，能夠維持紅細(xì)胞較低的溶血率，以及延長其輸入患者體內(nèi)的高存活率，但紅細(xì)胞在保存過程中會發(fā)生變化[6]，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞在儲存過程中，紅細(xì)胞從儲存的第14天開始出現(xiàn)球形[7]，第21天時80%變成棘形，第42天時95%變?yōu)榧蝃8]，最終由于脆性的增加，導(dǎo)致大部分紅細(xì)胞破裂而發(fā)生溶血，溶血會引起去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞中的游離血紅蛋白含量和紅細(xì)胞溶血率升高。游離血紅蛋白的含量是紅細(xì)胞制品質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一，較高的游離血紅蛋白含量可引起急性腎功能衰竭等嚴(yán)重副作用[9-11]。

本試驗著重研究了長航狀態(tài)下船上保存去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞中血漿游離血紅蛋白含量和紅細(xì)胞溶血率的變化和影響因素。通過研究結(jié)果提示直立貼合放置儲血袋可減少紅細(xì)胞的破壞，上述結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報道的不一致[12-13]，可能是因為這2篇文獻(xiàn)報道的研究結(jié)果均是在陸地上進(jìn)行，而不是在海上進(jìn)行的相關(guān)研究。海上運(yùn)輸和保存懸浮紅細(xì)胞容易引起紅細(xì)胞發(fā)生破裂，從而發(fā)生溶血，造成這種現(xiàn)象的主要原因是溫度、保存時間、震蕩和海上復(fù)雜的氣候條件等。

綜上所述，3組是在相同試驗條件下保存紅細(xì)胞，在船上經(jīng)過一段時間儲存和一定頻率的震動和晃動后，垂直懸掛儲存容易導(dǎo)致血液溶血，血漿游離血紅蛋白濃度和紅細(xì)胞溶血率升高加快；而直立貼合儲存降低了對紅細(xì)胞的溶血破壞，說明儲血袋直立貼合放置可減少對紅細(xì)胞的破壞，更有利于艦船上紅細(xì)胞的貯存；雖然平鋪碼放儲存與垂直懸掛儲存差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但平鋪碼放組的血漿游離血紅蛋白含量和紅細(xì)胞溶血率均高于垂直懸掛組。這對于今后進(jìn)一步研究海上血液儲存和血液保障任務(wù)等工作的開展具有重要的臨床意義。