槐花顆粒配制工藝研究*

辛曉芳，梁志銀，曾聰彥

（廣州中醫藥大學附屬中山中醫院，廣東 中山 528401）

槐花顆粒為我院院內制劑，有涼血止血功效，用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、肝熱目赤、頭痛、眩暈等癥，由槐花、野菊花等中藥材組方，方中君藥槐花含有豐富的化學成分，具有抗氧化、抗菌、舒張血管、止血等作用［1－4］，其主要藥效成分包括黃酮、植物甾類、揮發油、鞣質［5－9］等。蘆丁為槐花的主要成分，故選取蘆丁為考察指標［10－12］，對其提取工藝進行優選，并采用單因素分析法［13－15］對其成型工藝進行優化。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（安捷倫科技＜中國＞有限公司）；BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司，精度為0.1 mg）；CH1006型電熱恒溫槽（上海衡平儀表廠）；CRLB－1500S型電爐（肇慶金雅樂電器有限公司）。

1.2 試藥

蘆丁對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100080－201610，含量為91.9%）；所用中藥材均由廣州醫科大學附屬中山中醫院制劑室提供；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 提取工藝優化

正交試驗設計：水提工藝選取提取次數（因素A）、提取時間（因素B）、浸泡時間（因素C）、加水量（因素D）為考察因素，每個因素設計3個水平，按L9（34）正交試驗表［3］進行試驗，以干浸膏得率和蘆丁含量為考察指標。因素水平見表1。

表1 水提工藝正交試驗因素水平表Tab.1 Factors and levels of the orthogonal test for water extraction process

試驗方法與結果：按處方比例稱取藥材，共9份，按表2進行試驗，測定干浸膏得率和蘆丁含量，對結果進行綜合評分作為工藝優化評價指標。采用SPSS20.0統計學軟件對評分結果進行數據處理，由直觀分析和方差分析判斷各因素對提取效果的影響程度，篩選出在該試驗條件下的優化提取參數。結果見表3。

表2 水提工藝條件L 9（34）正交試驗設計與結果Tab.2 Design and results of the L 9（34）orthogonal test for water extraction process

表3 綜合評分方差分析結果Tab.3 ANOVA results of comprehensive scores

結果分析：由直觀分析可知，影響提取效果的因素順序為提取時間＞提取次數＞浸泡時間＞加水量，最佳工藝組合為A3B3C2D2。由方差分析結果可知，提取次數（因素A）和提取時間（因素B）對提取效果影響顯著，浸泡時間（因素C）和加水量（因素D）對提取效果影響不顯著，且A3B3C2D2方案也符合制劑實際大規模生產，故最終優選的提取工藝為A3B3C2D2，即加10倍量水，浸泡20 min，提取3次，每次提取1.5 h。

驗證試驗：為確定該工藝的優劣和穩定性，根據篩選最佳條件，進行3次提取驗證試驗，結果干浸膏得率及蘆丁含量的RSD分別為0.79%和1.47%（n＝3）。詳見表4?？梢姡炞C試驗干浸膏得率和蘆丁含量均較高，重復性好。

表4 優選工藝驗證試驗結果（n＝3）Tab.4 Results of verification test of optimized process（n＝3）

2.2 干浸膏得率測定

精密吸取各樣品濃縮液10 mL，置已恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，照2015年版《中國藥典（一部）》附錄ⅨG干燥失重測定法［2］測定，按公式計算干浸膏得率。

干浸膏得率（%）＝（W2－W1）／Wt×n×100%

式中，W2為蒸發皿與干浸膏質量，W1為蒸發皿質量，Wt為藥材重量，n為稀釋倍數。

2.3 蘆丁含量測定

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent Zorbax EclipseXDB－C18柱（250mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇－1%冰醋酸溶液（40∶60，V／V）；流速：1 mL／min；柱溫：30℃；檢測波長：257 nm；進樣量：10μL。按擬訂色譜條件進樣測定，結果蘆丁對照品溶液和供試品溶液的分離度均大于1.5，對稱因子均小于1.05，理論板數為4 000～5 000。

2.3.2 溶液制備

樣品制備：按處方比例稱取藥材，加水煎煮，第1次2h，第2次1.5h，濾過，合并濾液并濃縮成清膏，加蔗糖及輔料適量，制成顆粒，低溫干燥成1 000 g，即得。

對照品溶液：取蘆丁對照品20 mg，精密稱定，置250 mL容量瓶中，加甲醇制成1 mL含80μg的對照品溶液。

供試品溶液：按處方比例稱取藥材，并按正交試驗因素水平表分別提取溶液，即得。

陰性對照品溶液：按處方比例稱取除槐花以外的藥材，按優化后的最佳條件提取溶液，即得。

2.3.3 方法學考察

專屬性試驗：取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各適量，按2.3.1項下色譜條件分別進樣分析，每次10μL。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應保留時間處有色譜峰，與其他組分基線分離良好，且分離度大于1.5，陰性對照無干擾，表明供試品溶液的其他成分對測定結果無影響，方法專屬性強。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

線性關系考察：取蘆丁對照品適量，分別制備質量濃度為40，80，120，160，200，240μg／mL的系列對照品溶液，并于257 nm波長處測定吸光度，以峰面積（Y）為縱坐標、對照品質量濃度（X，μg／mL）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y＝7.446 0X＋18.563 8，R2＝0.999 7（n＝6）。結果表明，蘆丁質量濃度在40～240μg／mL范圍內與峰面積線性關系良好。

檢測限和定量限確定：將信噪比（S／N）3時的質量濃度確定為檢測限（LOD），S／N為10時的質量濃度確定為定量限（LOQ）。取蘆丁對照品適量，用甲醇配制成對照品貯備液，取10μL進樣分析，結果定量限為8μg／mL，檢測限為2.67μg／mL。

精密度試驗：取蘆丁對照品溶液（質量濃度為80μg／mL）6份，分別進樣。結果平均峰面積為935.753 0，RSD為0.66%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并進樣測定。結果平均峰面積為719.727 2，RSD為0.52%（n＝6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一批樣品，依法制備供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12，24 h時進樣測定。結果平均峰面積為846.253 2，RSD為1.20%（n＝7），表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：取已知蘆丁含量的樣品（質量濃度為80.2075μg／mL）1 mL，共9份，分別置5mL容量瓶中，并分別精密加入蘆丁對照品溶液（質量濃度為80μg／mL）0.5，1.0，1.5 mL，平行3份，分別吸取10μL，進樣測定，計算回收率。結果見表5。

表5 蘆丁加樣回收試驗結果（n＝9）Tab.5 Results of the recovery test of rutin（n＝9）

2.4 成型工藝研究

清膏提取：按提取工藝優化最佳方案提取浸膏，濾過，合并濾液，濃縮成清膏，相對密度為1.08～1.12（60℃）。

評價指標：參考文獻［16］，選擇成型率、成型性、溶化性、吸濕率為評價指標。計算公式如下。

成型率＝（過篩后能通過1號篩而不能通過5號篩的顆?？傎|量／過篩前顆粒質量）×100%

吸濕率＝（吸濕后質量－吸濕前質量）／吸濕前質量×100%

輔料選擇：篩選輔料為麥芽糊精、可溶性淀粉、糊精，輔料與清膏的比例為2∶1（m／m），進行試驗。結果選取糊精為輔料時顆?？扇咳芑蔬x擇輔料為糊精。清膏與輔料的關系見表6。

表6 清膏與輔料的關系Tab.6 Relationship between cream and excipients

藥物與輔料比例選擇：按清膏與糊精比例（1∶1，1∶2，2∶1）分別進行制粒，考察其成型率、吸濕率、溶化性。結果清膏與糊精比例為1：1時，顆粒可全部溶化，故比例選擇1∶1。詳見表7。

表7 藥物與輔料比例的選擇Tab.7 Selection of drug－excipient ratio

顆粒干燥溫度：選取不同溫度，分別低溫干燥8 h，考察其干燥情況和水分，結果當干燥溫度為60℃時，顆粒均勻，無結塊，故選擇干燥溫度為60℃。詳見表8。

表8 干燥溫度選擇Tab.8 Selection of drying temperature

潤濕劑比例：考察不同濃度的乙醇對顆粒的影響，結果當乙醇濃度為95%時，顆粒易過篩，故選擇95%乙醇為最佳潤濕劑比例。詳見表9。

表9 潤濕劑比例選擇Tab.9 Selection of lubricant proportion

驗證試驗：按上述優化后的最佳工藝，制得3批樣品，測得其成型率分別為97.33%，97.54%，97.81%，平均值為97.56%；吸濕率分別為7.28%，7.36%，7.45%，平均值為7.36%。結果表明，3批樣品顆粒溶化性和成型性均良好。

3 討論

槐花顆粒為我院協定處方，由槐花、野菊花等組方，用于治療便血、痔血等療效較好。試驗前期，參考大量文獻，對蘆丁進行了全波段掃描，選擇最佳檢測波長為257 nm，蘆丁峰形、峰面積均較理想；選擇反相流動相甲醇，經前期試驗考察，甲醇對目標峰并無影響，靈敏度好，且性價比較乙腈高，甲醇－0.1冰醋酸溶液（40∶60，V／V）下的目標峰分離度大于1.5。本方法優選出的制備工藝可保證制劑的質量和功效，適合現代化大規模生產。