吡唑醚菌酯對鯪魚的毒性試驗

○李 治

吡唑醚菌酯（Pyraclostrobin）又名唑菌胺酯，是德國巴斯夫公司于1993年發(fā)現(xiàn)的一種兼具吡唑結(jié)構(gòu)的甲氧丙烯酸甲酯類殺菌劑，具有高效、廣譜、強內(nèi)吸性的特點，其作用機理為通過阻止細(xì)胞色素b和c1間電子傳遞而抑制線粒體呼吸作用，使線粒體不能產(chǎn)生和提供細(xì)胞正常代謝所需要的能 量（ATP），最終導(dǎo)致病原菌死亡，同時發(fā)揮保護(hù)、治療、葉片滲透傳導(dǎo)作用，主要應(yīng)用于小麥、花生、水稻、煙草和果蔬等作物。據(jù)了解，吡唑醚菌酯類產(chǎn)品2016年在我國銷售總額達(dá)到了8億元，原藥產(chǎn)能達(dá)到1.8萬噸，是目前農(nóng)藥市場上的主流產(chǎn)品之一。

已有研究表明吡唑醚菌酯對人類、哺乳動物、鳥類等毒性較低，但對水生動物具有高毒性。隨著吡唑醚菌酯大量地投入到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，特別是在水稻種植中的應(yīng)用，其殘留于土壤中的成分會通過漂移、經(jīng)雨水沖刷等方式進(jìn)入水體中，存在對水生生態(tài)系統(tǒng)造成污染的風(fēng)險。目前已有吡唑醚菌酯對于斑馬魚等實驗用魚的毒性研究，但缺乏其對于常規(guī)養(yǎng)殖品種魚類的毒性試驗，因此本文選取鯪魚作為吡唑醚菌酯毒性試驗的受試品種，完善基礎(chǔ)實驗數(shù)據(jù)，為進(jìn)一步研究吡唑醚菌酯對于魚類的毒性提供理論依據(jù)。

一、材料與方法

1.1 材料

試驗用魚為土鯪，來自于本地魚苗養(yǎng)殖合作社，平均體長為7.8cm，試驗前在實驗室環(huán)境條件內(nèi)馴養(yǎng)7日，馴養(yǎng)期間活動情況正常，無死亡，試驗前24小時停止投喂。試驗用的吡唑醚菌酯購自本地農(nóng)藥店，生產(chǎn)廠家為南京華洲藥業(yè)有限公司，劑型為懸浮劑，含量30%，性狀為乳白色渾濁液體。試驗容器為規(guī)格長55cm寬40cm高35cm的塑料水族箱，試驗用水為經(jīng)24小時曝氣的自來水。

1.2 試驗?zāi)敢旱呐渲?/h3>

用移液槍吸取吡唑醚菌酯藥劑10g，用純凈水稀釋后定容至1000mL，制成濃度為3000mg/L的吡唑醚菌酯百倍稀釋原液作為試驗?zāi)敢骸?/p>

1.3 預(yù)試驗

為了計算正式實驗中的藥物試驗濃度需進(jìn)行預(yù)試驗，在0.01-0.1mg/L濃度范圍內(nèi)設(shè)置的10個濃度組，濃度間隔為0.01mg/L，每個濃度放入試驗鯪魚5條，不設(shè)平行組，試驗時間96小時，得出24小時內(nèi)100%的死亡的最小濃度為0.03mgL，96小時無死亡的最大濃度為0.01mg/L，則可確定正式實驗的濃度范圍0.01-0.03mg/L。

1.4 試驗藥液濃度的確定

根據(jù)預(yù)試驗得出的結(jié)果，在0.01-0.03mg/L的濃度范圍內(nèi)求出7個等對數(shù)濃度組，經(jīng)計算得出其分別為 C1=0.01mg/L、C2=0.0120mg/L、C3=0.0144mg/L、C4=0.0173mg/L、C5=0.0207mg/L、C6=0.0249mg/L、C7=0.03mg/L。每個濃度組設(shè)置3個平行和一個空白對照組。

1.5 急性毒性試驗

本試驗采取靜態(tài)試驗法，將經(jīng)過24小時曝氣的自來水加入到塑料水族箱內(nèi)，每箱加水20L，計算每個濃度所需加入的吡唑醚菌酯試驗?zāi)敢旱牧浚鶕?jù)計算結(jié)果，按照從低濃度到高濃度的順序用移液槍準(zhǔn)確量取藥液依次加到試驗箱的水中，用玻璃棒攪拌均勻后，隨機選取受試鯪魚迅速放入水中，每個試驗箱放魚20尾。

試驗開始后，在前12小時進(jìn)行連續(xù)觀察，密切留意試驗鯪魚的活動情況，有無異常情況如魚體側(cè)翻、失去平衡、游泳能力和呼吸能力減弱以及體色變化等，記錄開始出現(xiàn)和死亡的時間等（5分鐘內(nèi)魚對于玻璃棒觸碰尾柄的刺激無反應(yīng)即判定為死亡），再分別在24h、48h、72h、96h觀察記錄每個試驗濃度組魚的存活數(shù)量，死亡癥狀等。試驗過程中不投喂，不更換藥液。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS23.0統(tǒng)計分析軟件處理實驗數(shù)據(jù)，使用Probit回歸法計算吡唑醚菌酯對鯪魚的半致死濃度及95%置信區(qū)間，再根據(jù)《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》對毒性進(jìn)行分級。

二、結(jié)果與分析

2.1 吡唑醚菌酯對鯪魚的急性毒性結(jié)果

在毒性試驗開始3h后，高濃度組（C5-C7）的鯪魚出現(xiàn)不同程度的游動失去平衡、側(cè)翻、仰浮、掙扎的現(xiàn)象，低濃度組（C1-C4）未見出現(xiàn)明顯異常；6h候后高濃度組的鯪魚開始出現(xiàn)死亡，并且大部分魚游動失去平衡，低濃度組的C3和C4也出現(xiàn)游動緩慢；12h后高濃度組出現(xiàn)大批量死亡，其中最高濃度組C7全部死亡，至36h時累計死亡數(shù)量達(dá)到峰值，低濃度組的C3和C4也出現(xiàn)了部分死亡，而C1和C2組未見出現(xiàn)死亡；48h以后的所有濃度組的情況均趨于穩(wěn)定，沒有再出現(xiàn)死亡，吡唑醚菌酯對鯪魚的急性毒性結(jié)果見圖1。

使用SPSS23.0統(tǒng)計分析軟件的Probit回歸法處理各濃度組的累計死亡率數(shù)據(jù)，分析得出吡唑醚菌酯對鯪魚的LC50（96h）值為0.0183mg/L，95置信區(qū)間為0.0173-0.01923mg/L。

根據(jù)《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》（GB/T31270.12）中提出的標(biāo)準(zhǔn)，吡唑醚菌酯對鯪魚的毒性等級為劇毒。

本次毒性試驗結(jié)束后對中毒死亡的鯪魚進(jìn)行體表檢查和解剖檢查均未發(fā)現(xiàn)出血、充血、潰爛、水腫、壞死等明顯的癥狀。

三、討論

1.魚類的急性毒性試驗是判斷水體污染物對魚的毒性程度的重要依據(jù)，也是評價水體污染程度以及農(nóng)藥殘留對人類潛在毒性的手段。根據(jù)已有的研究表明，吡唑醚菌酯對于斑馬魚成魚（體長4-6cm）的急性毒性LC50（96h）為0.0613mg/L和0.056mg/L等，而本試驗得出吡唑醚菌酯對鯪魚的LC50（96h）值為0.0183mg/L，這說明同等體長水平下，鯪魚比斑馬魚對吡唑醚菌酯更為敏感，這反映了不同種類的魚可能會對吡唑醚菌酯有不同的敏感度，可以通過進(jìn)一步研究吡唑醚菌酯對其他品種魚類的毒性，利用不同魚類對其的敏感度作為判斷由吡唑醚菌酯造成的養(yǎng)殖水體污染的依據(jù)。

2.試驗用魚在本次毒性試驗中表現(xiàn)出的中毒癥狀為游動失去平衡、側(cè)翻、仰浮、掙扎并欲躍出水面，并在很短時間內(nèi)就不再游動沉底進(jìn)而死亡，但肉眼觀察未發(fā)現(xiàn)體色有明顯的變化，檢查中毒死亡的受試魚也未發(fā)現(xiàn)出血、充血、潰爛、水腫、壞死等明顯的癥狀，因此較難從臨床癥狀上判斷吡唑醚菌酯造成的魚類中毒，仍需要通過進(jìn)一步地研究吡唑醚菌酯對魚類的致毒機理，為吡唑醚菌酯所造成的養(yǎng)殖水體污染提供臨床判斷依據(jù)。

3.本次試驗中還發(fā)現(xiàn)了一個現(xiàn)象，配制好的吡唑醚菌酯藥液放置數(shù)天以后，再用作進(jìn)行毒性試驗時會發(fā)現(xiàn)藥液的毒性顯著降低，同時毒性試驗的結(jié)果也顯示了受試魚的死亡基本出現(xiàn)在36h以內(nèi)，從而導(dǎo)致得出的LC50（48h）和LC50（96h）是一致的，當(dāng)受試魚經(jīng)過了48h的“關(guān)口”后，就基本不會受毒性致死，至96h時，可觀察得到存活下來的受試魚癥狀消失且基本恢復(fù)活力。這說明了吡唑醚菌酯溶液的毒性會隨著時間而降低，這可能與吡唑醚菌酯在水中的降解有關(guān)，也可能與本次實驗所使用的懸浮劑劑型的特性有關(guān)，可以通過進(jìn)一步研究吡唑醚菌酯的水解特性和不同劑型對于水生動物毒性的影響，來用作判斷由吡唑醚菌酯引起的養(yǎng)殖水體及江河水體污染。

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