基于“寒凝血瘀“關(guān)鍵病機(jī)理論探討新加良附方治療胃癌的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

國(guó)佳鑫 侯麗 蔡和平 栗梟杰 楊茜茹 張思親 董青

摘要 目的：通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討新加良附方治療胃癌的作用機(jī)制。方法：在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）中獲取高良姜、香附、穿山龍的有效成分及靶蛋白，通過(guò)Genecards、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出胃癌的靶點(diǎn)，利用Venn軟件獲取共同靶點(diǎn)，使用Cytoscape3.7.2進(jìn)行“化合物-靶點(diǎn)-疾病”的網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建。通過(guò)String數(shù)據(jù)庫(kù)獲取蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（PPI），最后進(jìn)行GO功能、KEGG通路富集分析。結(jié)果：從新加良附方中篩選出高良姜素、槲皮素、木犀草素、薯蕷皂苷元等主要有效活性成分，作用于87個(gè)胃癌靶點(diǎn)，篩選出AKT1、MYC、CASP3、EGFR等關(guān)鍵靶點(diǎn)，并確定了PI3K-Akt信號(hào)通路、p53信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路等關(guān)鍵代謝信號(hào)通路，參與蛋白結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子活性、酶活性調(diào)節(jié)、受體活性等過(guò)程。結(jié)論：新加良附方通過(guò)多個(gè)靶點(diǎn)、多條通路發(fā)揮治療胃癌的作用。

關(guān)鍵詞 新加良附方;寒凝血瘀;高良姜;香附;穿山龍;胃癌;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);作用機(jī)制

Based on the Key Pathogenesis Theory of “Cold Coagulation and Blood Stasis” Discussing the Network Pharmacology Study of Modified Liang-Fu Formula In The Treatment of Gastric Cancer

GUO Jiaxin1，HOU Li1，CAI Heping2，LI Xiaojie1，YANG Qianru1，ZHANG Siqin3，DONG Qing1

（1 Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100020，China; 2 Beijing Traditional Chinese Medicine Hospital Shunyi Hospital，Beijing 101399，China; 3 Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610075，China）

Abstract Objective：To explore the mechanism of action of modified Liang-Fu Formula in the treatment of gastric cancer through network pharmacology method.Methods：The effective components and target proteins of Alpinia officinarum Hance，Cyperus rotundus L and Discorea nipponica Makino were from the traditional Chinese medicine system pharmacology analysis platform （TCMSP）.And the target of gastric cancer was gotten through the Genecards and OMIM database.Venn online software was used to obtain the common target，and the “compound-target-disease” network diagram was constructed by using Cytoscape 3.7.2 software.The String database was used to draw the protein interaction（PPI） network.Finally，enrichment analysis of GO function and KEGG pathway was carried out.Results：The main active components，such as galangin，quercetin，luteolin and diosgenin，were screened out from the negaeliang side，and acted on 87 gastric cancer targets.Key targets，such as AKT1，MYC，CASP3 and EGFR，were screened out，and key metabolic signaling pathways，such as pi3K-Akt signaling pathway，p53 signaling pathway，and Wnt signaling pathway，were determined.It was involved in protein binding，transcription factor activity，enzyme activity regulation，receptor activity and other processes.Conclusion：Modified Liangfu Formula plays a role in the treatment of gastric cancer through multiple targets and pathways.

Keywords Modified Liang-Fu Formula; Cold coagulation and blood stasis; Alpinia officinarum Hance; Cyperus rotundus L; Discorea nipponica Makino; Gastric cancer; network pharmacology; Mechanism of action

中圖分類(lèi)號(hào)：R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.03.004

在世界范圍內(nèi)，亞洲為胃癌發(fā)病率最高的地區(qū)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2015年中國(guó)惡性腫瘤新發(fā)病例42.92萬(wàn)例，死亡病例28.14萬(wàn)例，而胃癌的發(fā)病率和病死率分別為679.1/10萬(wàn)和498/10萬(wàn)[1]。盡管近年來(lái)胃癌的發(fā)病率及病死率均有所下降，但胃癌患者的治療及其由此產(chǎn)生的不良反應(yīng)仍是困擾醫(yī)學(xué)界的一大難題。中醫(yī)藥在改善胃癌患者癥狀、延遲生存期方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，有待進(jìn)一步研究。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是通過(guò)對(duì)生物系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)分析，選取特定信號(hào)節(jié)點(diǎn)進(jìn)行多靶點(diǎn)藥物分子分析的新方法[2]。體現(xiàn)了中藥復(fù)方“多成分、多靶點(diǎn)、多途徑”的治療特點(diǎn)，符合中醫(yī)藥對(duì)疾病本質(zhì)的認(rèn)識(shí)。新加良附方由《良方集腋》中的良附丸加味化裁而來(lái)，主要用于寒凝血瘀證。本研究基于寒凝血瘀關(guān)鍵病機(jī)理論，以新加良附方為切入點(diǎn)，用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析方法探討其治療胃癌的作用機(jī)制，以期為臨床提供新的治療思路。

1 資料與方法

1.1 胃癌相關(guān)靶點(diǎn)的獲取

以“Gastric Cancer”為關(guān)鍵詞，在GeenCards（https：//www.genecards.org/）和OMIM（https：//omim.org/）2個(gè)疾病數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索，獲取胃癌相關(guān)靶點(diǎn)。

1.2 藥物活性成分以及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的獲取

應(yīng)用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)與分析平臺(tái)（http：//tcmspw.com/tc-msp.php），分別檢索新加良附方中3種藥物高良姜、香附、穿山龍的有效成分，時(shí)間截止在2019年9月13日，通過(guò)類(lèi)藥性指數(shù)（DL）和口服生物利用度（OB）進(jìn)行設(shè)定限制條件，篩選閾值設(shè)定為OB>30%且DL>0.18，并通過(guò)篩選結(jié)果在此平臺(tái)獲得有效成分的蛋白作用靶點(diǎn)。

1.3 構(gòu)建藥物有效成分-靶點(diǎn)和胃癌疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的可視圖

用Veen軟件獲取藥物作用靶點(diǎn)與疾病作用靶點(diǎn)的交集，以獲得藥物與疾病潛在靶點(diǎn)的相互作用，然后運(yùn)用Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建藥物有效成分-靶點(diǎn)和胃癌疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的可視圖。

1.4 新加良附方治療胃癌靶點(diǎn)蛋白互相作用網(wǎng)絡(luò)（PPI）的構(gòu)建

將獲取的藥物-靶點(diǎn)共同作用蛋白上傳到在線(xiàn)String數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/），設(shè)置“Homo Sapiens（人類(lèi)）”進(jìn)行操作，構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)模型，獲得PPI網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 GO功能富集分析與KEGG通路富集分析

將藥物有效作用靶點(diǎn)上傳到David6.8數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//david.ncifcrf.gov/），進(jìn)行GO功能富集分析與KEGG通路富集分析，獲取核心部分的生物學(xué)過(guò)程及信號(hào)通路，探索新加良附方治療胃癌可能的作用機(jī)制。

2 結(jié)果

2.1 胃癌疾病靶點(diǎn)的篩選

通過(guò)檢索GeenCards數(shù)據(jù)庫(kù)共得到與胃癌相關(guān)靶點(diǎn)11 353個(gè)，以Relevance score>23為篩選條件，篩選后共獲取510個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)，在OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)中共檢索到490個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)，通過(guò)篩選重復(fù)值后，共獲得929個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)。

2.2 藥物活性成分及作用靶點(diǎn)

通過(guò)TCMSP的檢索及OB>30%且DL>0.18的條件篩選后，獲得高良姜的有效成分13種，香附的有效成分18種，穿山龍的有效成分3種。見(jiàn)表1。在有效成分檢索中，獲得194個(gè)藥物作用靶點(diǎn)。

2.3 構(gòu)建藥物有效成分-靶點(diǎn)和胃癌疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的可視圖

將檢索得到的194個(gè)藥物作用靶點(diǎn)和929個(gè)胃癌相關(guān)靶點(diǎn)通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，然后通過(guò)Veen軟件得到疾病相關(guān)靶點(diǎn)和藥物作用靶點(diǎn)的交集，共獲得87個(gè)共同靶點(diǎn)。見(jiàn)圖1。通過(guò)Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建藥物活性成分-靶點(diǎn)和胃癌疾病-靶點(diǎn)的可視化網(wǎng)絡(luò)圖。見(jiàn)圖2，表2。

2.4 藥物治療胃癌的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

將藥物與疾病共同的87個(gè)靶點(diǎn)上傳至String數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)置置信度大于0.4，獲得PPI網(wǎng)絡(luò)。見(jiàn)圖3。共獲得87個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白，1 624條相互作用蛋白之間相互作用的邊線(xiàn)，根據(jù)count值篩選出藥物治療胃癌的前30個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白。見(jiàn)圖4。

2.5 藥物治療胃癌的功能富集分析與通路富集分析

2.5.1 GO功能富集分析

將藥物與疾病相關(guān)的87個(gè)靶點(diǎn)導(dǎo)入David平臺(tái)進(jìn)行GO功能富集分析，以P<0.01為篩選條件，篩選出GO條目共92個(gè)，其中主要涉及受體活性、蛋白結(jié)合、酶活性調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄因子活性等方面，根據(jù)其生物學(xué)功能排名獲取前20的條目。見(jiàn)圖5。包括泛素樣蛋白連接酶結(jié)合、泛素蛋白連接酶結(jié)合、激酶調(diào)節(jié)活動(dòng)、細(xì)胞因子受體結(jié)合、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活劑活性，RNA聚合酶Ⅱ特異性、細(xì)胞因子活性、活化轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、蛋白激酶調(diào)節(jié)活性、磷酸酶綁定、蛋白磷酸酶綁定、RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、核受體的活動(dòng)、轉(zhuǎn)錄因子活性，直接配體調(diào)控序列特異性DNA結(jié)合、整合素結(jié)合、受體配體活動(dòng)、激酶活化劑活動(dòng)、生長(zhǎng)因子受體結(jié)合等。

2.5.2 KEGG通路富集分析

將87個(gè)靶點(diǎn)導(dǎo)入David平臺(tái)進(jìn)行KEGG通路富集分析，共確定了149條富集通路，涉及癌癥、炎性反應(yīng)、感染等各方面。排名靠前的通路主要包括膀胱癌、乙型肝炎、前列腺癌、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、胰腺癌、IL-17信號(hào)通路、人類(lèi)巨細(xì)胞病毒感染、糖尿病并發(fā)癥信號(hào)通路、丙型肝炎、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化、結(jié)腸直腸癌、肝細(xì)胞癌、EB病毒感染、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥、非小細(xì)胞肺癌、細(xì)胞衰老等。通路富集結(jié)果涵蓋了以下幾個(gè)重要通路：PI3K-Akt信號(hào)通路、p53信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路等。

3 討論

在中醫(yī)學(xué)中，胃癌歸屬于“噎膈”“反胃”“癥瘕”“胃積”等范疇，其發(fā)病與飲食、情志、正氣不足等多方面因素有關(guān)[3]，其關(guān)鍵病機(jī)為寒凝血瘀[4]，中醫(yī)治療以溫陽(yáng)散寒化痰為主要原則。此方以溫中散寒、理氣化痰、活血止痛為主要功效，主要用于寒凝血瘀證，高良姜溫胃止嘔、散寒止痛;香附疏肝解郁、理氣寬中、調(diào)經(jīng)止痛;二藥疏氣散寒;穿山龍祛風(fēng)除濕、活血止痛、止咳平喘，可融于良附丸之中活血祛瘀，制約高良姜之辛熱，防止香附之辛散。三藥合用，奏溫中散寒、理氣化痰、活血化瘀之效，是針對(duì)“脾陽(yáng)不振、內(nèi)外寒邪交織”導(dǎo)致“寒凝血瘀、氣機(jī)阻滯、集結(jié)胃腑”所致的胃癌的治療良劑?，F(xiàn)代研究表明，新加良附方可能通過(guò)逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞中p16甲基化這一效應(yīng)機(jī)制來(lái)發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，而且此方的臨床療效與劑量成正比的關(guān)系[5]。還有研究發(fā)現(xiàn)，新加良附方可以通過(guò)調(diào)節(jié)Bcl-2與Akt的表達(dá)進(jìn)而抑制人胃癌BGC-823細(xì)胞的增殖[6]，通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞中Caspase-3、Fas、Survivin、FasL蛋白的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞進(jìn)行凋亡[7-9]。以上研究成果均表明新加良附方在抑制胃癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡等方面具有良好的作用。

3.1 藥物有效成分

本次研究結(jié)果顯示，高良姜的有效活性成分主要包括高良姜素、槲皮素、美迪紫檀素、谷甾醇等，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其有效成分在抗腫瘤細(xì)胞增殖、抗氧化、抗炎性反應(yīng)和鎮(zhèn)痛等方面具有較明顯的效果[10]。香附的有效成分主要包括山柰酚、豆甾醇、木犀草素、槲皮素等，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其有效成分具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、抑制血小板聚集、解熱鎮(zhèn)痛抗炎等作用[11-13]。穿山龍的有效活性成分主要包括薯蕷皂苷元、表紫杉醇、土茯苓素等，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其在抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抗炎等方面具有較明顯的作用[14]。

根據(jù)研究中的“有效成分-靶點(diǎn)-疾病”可視化網(wǎng)絡(luò)圖可見(jiàn)高良姜素、槲皮素、木犀草素、薯蕷皂苷元等有效成分作用靶點(diǎn)較多，且度值和介數(shù)較高，提示這些有效成分是治療胃癌的關(guān)鍵有效成分。高良姜素是一種天然的黃酮類(lèi)化合物，賀文煜等[15]通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論，高良姜素與阿帕替尼聯(lián)合使用可能通過(guò)2個(gè)通路對(duì)胃癌細(xì)胞起到抑制其增殖、誘導(dǎo)其凋亡的作用，這2個(gè)通路分別是PI3K/Akt通路和p38-MAPK通路;同時(shí)國(guó)外有研究表明，高良姜素單藥可以抑制胃癌細(xì)胞的增殖[16]。Bestwick等[17]通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出高良姜素可能通過(guò)影響caspase-3的表達(dá)增強(qiáng)對(duì)胃癌細(xì)胞抑制增殖的作用。許云霞等[18]通過(guò)噻唑藍(lán)法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)得出，高良姜素可能通過(guò)線(xiàn)粒體途徑抑制胃癌細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡。另有研究表明，高良姜素具有明顯抑制胃癌活性的作用，可能與抑制STAT3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與周期通路的作用機(jī)制有關(guān)系[19]。

槲皮素是一種黃酮類(lèi)化合物，是高良姜和香附共同具有的化合物。耿威等[20]在實(shí)驗(yàn)中得出結(jié)論表明槲皮素可以降低胃癌細(xì)胞增殖和并延緩其侵襲正常的細(xì)胞，這些功能可能是通過(guò)調(diào)節(jié)Cav-1蛋白的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。另有研究表明槲皮素能升高Caspase-3和Caspase-9的活性，進(jìn)而抑制胃癌MKN45細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡[21]。王曉燕等[22]在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)槲皮素可能通過(guò)下調(diào)MMP-2基因的表達(dá)進(jìn)而明顯降低胃癌BGC-823細(xì)胞的侵襲能力。張燦燦等[23]通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論，槲皮素和si-FSCN1聯(lián)合可能通過(guò)抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路的活化進(jìn)而達(dá)到抑制胃癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。有研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明槲皮素聯(lián)合伊馬替尼可能通過(guò)調(diào)控Caspase-9和Caspase-3的表達(dá)進(jìn)而抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡[24]。有研究顯示槲皮素可能通過(guò)阻滯SGC-7901細(xì)胞周期于S期來(lái)達(dá)到抑制胃癌細(xì)胞增殖[25]。

木犀草素是一種黃酮類(lèi)化合物，它存在于蔬菜、中藥和水果等植物中。有國(guó)外研究表明，它可以治療多種惡性腫瘤，例如胃癌、肺癌、乳腺癌等，其作用機(jī)制可能通過(guò)不同的信號(hào)通路誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，在體內(nèi)外阻斷腫瘤的發(fā)展。Lu等[26]認(rèn)為木犀草素可能通過(guò)MAPK和PI3K信號(hào)通路對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖進(jìn)行雙重抑制。李艷紅等[27]通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出木犀草素體外抗胃癌腫瘤的主要機(jī)制可能是通過(guò)改變細(xì)胞周期分布和誘導(dǎo)其凋亡。有研究表明木犀草素可能通過(guò)阻滯細(xì)胞周期和線(xiàn)粒體途徑來(lái)誘導(dǎo)胃癌MGC803細(xì)胞的凋亡[28]。王鵬等[29]認(rèn)為木犀草素通過(guò)調(diào)節(jié)MMP-7蛋白表達(dá)進(jìn)而抑制胃癌HGC-27細(xì)胞的遷移能力。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，穿山龍總皂苷是穿山龍發(fā)揮藥理作用的主要活性成分，其在抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫和消炎鎮(zhèn)痛等方面具有較明顯的作用[30]。薯蕷皂苷元可以調(diào)控miR-34a，下調(diào)E2F1、E2F3及CCND1基因表達(dá)，從而降低胃癌細(xì)胞的增殖、克隆，并抑制其遷移及侵襲等功能[31]。霍中華等[32]在研究中發(fā)現(xiàn)，薯蕷皂苷元能夠降低內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性并且減少腫瘤血供，同時(shí)還直接作用于胃癌細(xì)胞減少其遷移。有研究表明薯蕷皂苷元能夠影響人胃癌BGC-823與SGC-7901細(xì)胞的異型性、擴(kuò)散與轉(zhuǎn)移等多個(gè)方面，其作用機(jī)制可能是作用于MAPK通路中的p-p38通路[33]。何忠梅等[34]采用MTT比色法進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)薯蕷皂苷元具有抑制人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡的作用，但其細(xì)胞周期未受到明顯的影響。

以上各類(lèi)化合物通過(guò)不同方式來(lái)抑制胃癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡、抑制胃癌細(xì)胞侵襲能力等達(dá)到對(duì)胃癌的治療效果。

3.2 藥物作用靶點(diǎn)

通過(guò)對(duì)87個(gè)靶蛋白進(jìn)行PPI分析發(fā)現(xiàn)，AKT1、MYC、CASP3、EGFR等30個(gè)核心靶蛋白度，表明這些靶蛋白在新加良附方治療胃癌過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用，揭示了此方治療胃癌可能的作用機(jī)制為抑制胃癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡等。余南榮等[35]在實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為是通過(guò)LncRNA CCAT1調(diào)控MYC蛋白表達(dá)激活MAPK信號(hào)通路而實(shí)現(xiàn)，LncRNA CCAT1可以誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡，并且抑制其侵襲和遷移。還有研究表明胃癌細(xì)胞的增殖和凋亡是通過(guò)miRNA-490-3p直接靶向AKT1進(jìn)行調(diào)控[36]。有的學(xué)者認(rèn)為胃癌病因可能是細(xì)胞凋亡的非正常降低及增生過(guò)度導(dǎo)致的，其機(jī)制是CASP-3低表達(dá)和bcl-xl的高表達(dá)[37]。楊俊娥等[38]通過(guò)免疫組織化學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法研究得出，胃癌的發(fā)生與ALDH1A1和EGFR在胃腺癌組織內(nèi)異常表達(dá)有關(guān)，這2個(gè)靶點(diǎn)在胃癌的發(fā)生過(guò)程中起到協(xié)同的作用。

以上研究說(shuō)明，靶點(diǎn)AKT1、MYC、CASP3、EGFR有抑制胃癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡、調(diào)控蛋白表達(dá)等作用，對(duì)于胃癌的治療有重要意義。

3.3 核心靶點(diǎn)的富集分析

GO功能富集分析結(jié)果顯示，新加良附方治療胃癌主要涉及受體活性、蛋白結(jié)合、酶活性調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄因子活性等方面，說(shuō)明新加良附方治療胃癌是一個(gè)十分復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程。

KEGG富集分析可見(jiàn)，新加良附方治療胃癌的重要信號(hào)通路包括PI3K-Akt信號(hào)通路、p53信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路等多種信號(hào)通路。徐江江等學(xué)者通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出，異常激活PI3K/Akt信號(hào)通路可能導(dǎo)致其在胃癌干細(xì)胞中的高表達(dá)，進(jìn)而引起胃癌的發(fā)生[39]。有研究發(fā)現(xiàn)胃癌的發(fā)生是由PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路參與，其作用機(jī)制與PTEN在胃癌細(xì)胞組織中低表達(dá)，p-AKT和p-mTOR在胃癌組織中高表達(dá)有關(guān)[40]。劉豪杰等[41]發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞自噬水平和細(xì)胞凋亡可能與促進(jìn)p53/AMPK/mTOR信號(hào)通路表達(dá)有關(guān)。Song等[42]認(rèn)為T(mén)NF-α通過(guò)激活Wnt/β-cateni/TCF信號(hào)通路進(jìn)而誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞中Wnt10a和Wnt10b的表達(dá)，導(dǎo)致胃癌發(fā)生。故新加良附方治療胃癌的主要通路可能為PI3K-Akt信號(hào)通路、p53信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路等，可能通過(guò)蛋白結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子活性、酶活性調(diào)節(jié)、受體活性等來(lái)治療胃癌。

4 結(jié)語(yǔ)

本文通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法，對(duì)新加良附方中“寒凝血瘀”病機(jī)采用溫陽(yáng)散寒化痰法治療胃癌的有效活性成分、關(guān)鍵靶點(diǎn)、作用機(jī)制及可能的關(guān)鍵通路做了初步探討。結(jié)果顯示，新加良附方治療胃癌過(guò)程中較為重要的成分可能是高良姜素、槲皮素、木犀草素、薯蕷皂苷元等，可能主要是通過(guò)MYC、AKT1、CASP3、EGFR等靶點(diǎn)來(lái)達(dá)到治療目的，主要通路可能為PI3K-Akt信號(hào)通路、p53信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路等，可能通過(guò)蛋白結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子活性、酶活性調(diào)節(jié)、受體活性等來(lái)治療胃癌，說(shuō)明新加良附方通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多途徑產(chǎn)生協(xié)同治療胃癌的作用，體現(xiàn)了中醫(yī)學(xué)整體性的特點(diǎn)。但是，本研究主要是通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討新加良附方治療胃癌的作用機(jī)制，具有一定的理論局限性，有待后續(xù)學(xué)者通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究對(duì)其機(jī)制進(jìn)行驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)

[1]Phd W C，Md，Mph R Z，et al.Cancer statistics in China，2015[J].CA Cancer J Clin，2016，66（2）：115-132.

[2]Niu B，Zhang H，Li C，et al.Network pharmacology study on the active components of Pterocypsela elata and the mechanism of their effect against cerebral ischemia[J].Drug design，development and therapy，2019，13（5）：3009-3019.

[3]裘生梁，丁書(shū)凝，龐西.中醫(yī)藥診治胃癌研究進(jìn)展[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2020，30（7）：602-604.

[4]周義浪，吳曉勇，侯麗，等.新加良附方抗胃癌效應(yīng)機(jī)制研究[J].貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，34（3）：22-24.

[5]周義浪，田杰，朱國(guó)慶，等.新加良附方對(duì)人胃癌裸鼠移植瘤p16、hMLH1基因甲基化的影響[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2019，14（10）：1342-1345.

[6]莊嚴(yán)，董青，陳信義，等.新加良附藥物血清體外抑制腫瘤細(xì)胞活性研究[J].北京中醫(yī)，2007，26（5）：308-310.

[7]田劭丹，董青，侯麗，等.新加良附方對(duì)移植性人胃癌細(xì)胞Survivin與Caspase-3蛋白表達(dá)影響[A].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腫瘤專(zhuān)業(yè)委員會(huì).第三屆國(guó)際中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流大會(huì)暨第十二屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腫瘤專(zhuān)業(yè)委員會(huì)：中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)，2010：5.

[8]田劭丹，董青，侯麗，等.新加良附方對(duì)移植性人胃癌細(xì)胞Bax/Bcl-2表達(dá)影響[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2010，8（9）：57-59.

[9]董青，田劭丹，侯麗，等.新加良附方對(duì)移植性人胃癌細(xì)胞F/FL表達(dá)影響[A].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腫瘤專(zhuān)業(yè)委員會(huì).第三屆國(guó)際中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流大會(huì)暨第十二屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腫瘤專(zhuān)業(yè)委員會(huì)：中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)，2010：4.

[10]熊遠(yuǎn)果，沈瑤，張洪.高良姜藥理活性研究新進(jìn)展[J].中南藥學(xué)，2017，15（10）：1418-1421.

[11]陳志堅(jiān)，胡璇，劉國(guó)道.香附的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（36）：113-115.

[12]潘少斌，孔娜，李靜，等.香附化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2019，21（10）：1429-1434.

[13]黃凱玲，肖剛，黃建紅，等.香附化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，36（3）：491-492.

[14]方芳，顧媛媛，郭玉巖，等.穿山龍藥理及臨床研究[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，34（3）：450-452.

[15]賀文煜，張海明，袁昌勁.高良姜素通過(guò)PI3K/Akt及p38-MAPK信號(hào)通路增強(qiáng)胃癌SGC-7901細(xì)胞對(duì)阿帕替尼的敏感性[J].天津醫(yī)藥，2019，47（10）：1020-1025.

[16]Wu J，Yu J，Wang J，et al.Astragalus polysaccharide enhanced antitumor effects of Apatinib in gastric cancer AGS cells by inhibiting AKT signalling pathway[J].Biomedicine & Pharmacotherapy，2018，100：176-183.

[17]Bestwick C S，Milne L.Influence of galangin on HL-60 cell proliferation and survival[J].Cancer Lett，2006，243（1）：80-89.

[18]許云霞，趙新淮.高良姜素對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖、周期循環(huán)和凋亡的體外影響[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2013，48（15）：1274-1278.

[19]熱娜古麗·海里吾.高良姜抗胃癌作用及機(jī)制的探討[D].烏魯木齊：新疆醫(yī)科大學(xué)，2019.

[20]耿威，仉慧穎，李林，等.槲皮素對(duì)胃癌細(xì)胞增殖及侵襲的調(diào)控作用及機(jī)制[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2018，38（1）：34-36.

[21]付麗娜，劉維紅，徐愛(ài)軍，等.槲皮素對(duì)人胃癌MKN45細(xì)胞的抑制作用研究[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2017，32（6）：983-986.

[22]王曉燕，張尤歷，張恒，等.槲皮素對(duì)人胃癌細(xì)胞侵襲和MMP-2表達(dá)的影響[J].世界華人消化雜志，2012，20（3）：215-218.

[23]張燦燦，譚志軍，徐敏，等.槲皮素聯(lián)合si-FSCN1對(duì)胃癌MKN45細(xì)胞增殖與侵襲和凋亡的影響[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2020，36（9）：1132-1135.

[24]陳東奇.槲皮素聯(lián)合伊馬替尼體外抑制人胃癌SNU-1細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究[J].甘肅中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，34（2）：27-31.

[25]陳洪.槲皮素抑制SGC-7901細(xì)胞增殖及相關(guān)機(jī)制的研究[D].廣州：廣東藥科大學(xué)，2016.

[26]Lu X，Li Y，Li X，et al.Luteolin induces apoptosis in vitro through suppressing the MAPK and PI3K signaling pathways in gastric cancer[J].Oncol Lett，2017，14（2）：1993-2000.

[27]陸雪瑩，李艷紅，肖向文，等.木犀草素抑制人胃癌BGC-823細(xì)胞增殖作用的研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，21（3）：246-249.

[28]鄭旭華.木犀草素對(duì)胃癌MGC803細(xì)胞增殖抑制作用及其機(jī)制[D].廣州：暨南大學(xué)，2015.

[29]王鵬，姜戰(zhàn)武，孫玉國(guó)，等.木犀草素對(duì)人胃癌HGC-27細(xì)胞遷移的影響及機(jī)制[J].山東醫(yī)藥，2012，52（38）：8-10.

[30]李媛媛，周鴻銘.穿山龍總皂苷的藥理作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2020，48（5）：73-77.

[31]李亞，李蕊白，石鳳芹，等.薯蕷皂苷元通過(guò)調(diào)控miR-34a及其靶基因發(fā)揮抗胃癌作用[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，43（2）：108-114.

[32]霍中華，胡君，儲(chǔ)著陵，等.薯蕷皂苷元體內(nèi)外抑制胃癌增殖的機(jī)制[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2014，24（5）：394-398.

[33]吳媛媛，崔國(guó)興，馬鐵梁，等.薯蕷皂苷元對(duì)人胃癌BGC-823和SGC-7901細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2014，24（3）：207-210.

[34]何忠梅，白冰，金穎，等.薯蕷皂苷元對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞體外作用的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2010，14（12）：1903-1905.

[35]余南榮，曾祥，徐厚巍，等.LncRNA CCAT1通過(guò)調(diào)控MYC蛋白的表達(dá)激活MAPK信號(hào)通路影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2018，34（9）：1298-1303.

[36]Yu H，Sun J，Jiang S，et al.MicroRNA-490-3p regulates cell proliferation and apoptosis in gastric cancer via direct targeting of AKT1[J].Experimental and therapeutic medicine，2019，17（2）：1330-1336.

[37]林萬(wàn)隆，陳強(qiáng)，李定國(guó)，等.胃癌組織中CASP-3和bcl-xl表達(dá)的研究[J].實(shí)用癌癥雜志，2001，16（5）：479-481.

[38]楊俊娥，李玲玲，石慶芳，等.乙醛脫氫酶1A1和表皮生長(zhǎng)因子受體在胃癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2020，36（5）：499-502.

[39]涂江江，董翠梅，陶利英，等.PI3K/Akt信號(hào)通路在胃癌干細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2017，15（2）：154-155.

[40]孫海翔，徐余超，陳曉偉，等.PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白在胃癌中表達(dá)[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2017，33（10）：1455-1458.

[41]劉豪杰，陳文禮，陳雪蕾.蘆薈大黃素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡、自噬及p53/AMPK/m TOR信號(hào)通路的影響[J].中國(guó)藥師，2019，22（10）：1829-1834.

[42]Song X，Xin N，Wang W，et al.Wnt/beta-catenin，an oncogenic pathway targeted by H.pylori in gastric carcinogenesis[J].Oncotarget，2015，6（34）：35579-35588.

（2021-01-05收稿 責(zé)任編輯：徐穎）