HPLC法測定市售炮制輔料醋中川芎嗪的含量

董月梅 姜其寶 田金鳳 宋曉 張超

本文目的為測定不同品種市售炮制輔料醋中川芎嗪的含量。方法? 采用HPLC法測定市售醋中川芎嗪的含量，色譜條件為流動相為甲醇-1%HAC（35：65），流速1.0mL·min-1，檢測波長280nm，進樣量20?L。結果? 川芎嗪在0.29300?g·mL-1范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=59.18X+127.16（r=0.9998），平均回收率為98.08%，RSD值為1.56%（n=6）。結論? 本研究建立的方法操作簡便、準確性好、靈敏度高，適用于市售炮制輔料醋的質量控制。

食醋中氨基酸的種類多達18種，具有促進胃液分泌，降低血脂和膽固醇，延緩衰老等功能 [1]。近年來，炮制輔料用醋缺少嚴格的藥用標準，有文獻測定[2]食醋中苯乳酸的含量，為炮制輔料醋的質量控制提供了依據，還有文獻[3]用HPLC的方法測定了鎮江香醋中的川芎嗪，認為川芎嗪主要是由微生物的發酵而產生的，美拉德反應是川芎嗪含量增加的主要原因。但是，川芎嗪能否作為炮制輔料醋的質量控制指標未見報道。所以，本實驗采用HPLC法測定13種市售炮制輔料醋中川芎嗪的含量，結合釀造原料和工藝分析結果，為炮制輔料用醋品種的選擇和藥用標準的建立提供依據。

儀器與材料

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）; KQ-250E型醫用超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）;MS105DU型十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）;高速冷凍離心機（上海市浦東新區新金橋路27號7號樓），pH試紙（天津市金達化學試劑有限公司）。川芎嗪對照品（批號：110817-200305，中國藥品生物制品檢定所），其余試劑均為分析純。13種市售炮制輔料醋：山西紫林陳醋（批號：20200531）;紫林原釀陳醋（批號：20200629）;山西溢勺香老陳醋（批號：20150318）;恒順鎮江香醋（批號：20110928）;海天香醋（批號：20200705）;水塔老陳醋（批號：20200310）;恒順鎮江香醋（批號：20200415）;山西西堡泉老陳醋（批號：20130510）;居易米醋（批號：20200616）;正堂食醋（批號：20200227）;德馨齋清香米醋（20190610）;好太太香醋王（20200703）;海天白米醋（20200617）

方法與結果

對照品溶液的制備? 取川芎嗪對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為300?g·mL-1的對照品溶液。

供試品溶液的制備? 精密量取食醋15mL，用10%的NaOH溶液調pH10-11，加入CHCL3 20mL，混勻萃取，靜置分層。7200r·min-1離心15min，轉移CHCL3，重復上述操作一次，合并CHCL3相。將CHCL3水浴60℃蒸干，殘渣用0.2moL·L-1的鹽酸和甲醇以3：7比例混合均勻的溶液定容至1mL，臨用前用0.45?m微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

HPLC色譜條件? 采用Inertsil ODS-3C18色譜柱（250×4.6mm，5?m），流動相為甲醇-1%HAC（35：65），流速1.0 mL·min-1，檢測波長280nm，進樣量20?L，柱溫30 ℃。在該色譜條件下，川芎嗪色譜峰圖形較好，見圖1。

方法學考察

線性關系的考察? 分別精密量取川芎嗪標準品溶液（300?g·mL-1）0.010、0.039、0.156、0.625、2.500mL，置10mL棕色量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取以上稀釋的溶液各20?L，進行檢測，記錄峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為 Y=59.18X+127.16（r=0.9998），川芎嗪在0.29300?g·mL-1有良好的線性關系。

精密度實驗? 取同一供試品溶液，連續檢測6次，記錄峰面積，計算峰面積的RSD為2.58%，表明儀器精密度良好。

穩定性實驗? 取同一供試品溶液，按2.3項下的色譜條件分別在0、2、4、8、16、24 h進行測定，川芎嗪峰面積的RSD為2.46%，說明供試品溶液在24h內穩定性良好。

重復性實驗? 取同一供試品溶液6份，按2.3項下的色譜條件進行測定，結果川芎嗪的含量的RSD為1.86%，說明該方法重復性良好。

加樣回收率實驗? 精密吸取已知含量為9.31?g·mL-1 ，恒順鎮江香醋7.5mL（批號：20200415），共6份，加入川芎嗪對照品溶液適量，按2.2項下制備供試品溶液，2.3項下色譜條件測定，測得的回收率為98.08%，RSD為1.56%，該方法回收率高，符合含量測定的要求。

樣品測定? 取2.2項下供試品溶液，按2.3項下的HPLC色譜條件依次進行測定，計算樣品中川芎嗪的含量，見表2

討論

本文用HPLC法測定13批市售炮制輔料醋中川芎嗪的含量，發現不同方法釀制的輔料醋中川芎嗪的含量也不同。德馨齋白醋、海天白米醋采用液態發酵技術，均未檢測到川芎嗪，這與釀造過程中的脫色[4]有關，脫色過程中選擇活性炭作為吸附劑，活性炭對極性基團的吸附能力較強，凡是分子中含有極性基團的物質都容易被活性炭吸附，川芎嗪可能在脫色過程被吸附除去。因此，白醋及白米醋不適合作為中藥炮制的輔料醋。批號為20110928的恒順鎮江香醋和批號為20200415的恒順鎮江香醋生產原料均為糯米、麥麩、大米、大曲，川芎嗪的含量相差較大，這與陳放過程中的美德拉反應有關，隨著醋存放時間的增長，川芎嗪的含量會持續增加[3]。米醋主要有固態發酵和液態發酵兩種發酵方式，而液態發酵法周期較短（大約7d），而固態發酵法生產周期比較長（大約30d），更利于多種微生物及酶的參與，所發酵醋的風味口感更好[5]。因此，固態發酵的食醋更適宜作為中藥炮制的輔料。綜上，不同食醋中川芎嗪的含量不同，炮制輔料醋的發酵方法、存放時間等都可對川芎嗪的含量產生影響，可考慮將川芎嗪作為醋的質量控制指標，下一步可進行同一品種不同批次食醋間川芎嗪含量的穩定性試驗。

參考文獻：

[1] 吳曉明，曹嵐.我國食醋行業發展現狀及趨勢[J].中國調味品，2012，37（09）：19-21.

[2] 吳仁蔚，陳亨業，郭俊陸，等.食醋中苯乳酸的提取、鑒定及含量比較[J].中國釀造，2020，39（01）：66-70.

[3] 李丹亞，許泓瑜，陸震鳴，等.鎮江香醋在陳放過程中功能因子的變化規律研究[J].食品工業科技，2008（07）：219-221.

[4] 曹寶忠，蘇迎會，許新軍，等.發酵白醋生產及脫色技術探討[J].中國釀造，2010（04）：138-141.

[5] 胡本高.液態深層發酵與固態發酵食醋風味差別探討[J].食品工業，2004（5）：27-28.

基金項目：國家中醫藥管理局全國中醫藥創新骨干人才培訓項目（國中醫藥人教函[2019]128號）;山東中醫藥大學大學生研究訓練計劃（SRT）項目（2020050）

作者簡介

董月梅，女，從事藥物分析工作。

*通信作者，張超

董月梅? 姜其寶? 田金鳳? 宋曉? 張超*

山東中醫藥大學藥學院? 山東濟南? 250355