宮內(nèi)感染產(chǎn)婦血清及羊水Clara細(xì)胞蛋白16、肺表面活性蛋白A與新生兒肺損傷的關(guān)系

王芳芳，張 濤，王曉玲

宮內(nèi)感染是造成新生兒早產(chǎn)、先天性疾病的重要原因，在宮內(nèi)感染導(dǎo)致的新生兒損傷中以肺損傷最為常見[1-2]。新生兒肺損傷主要表現(xiàn)為肺功能不成熟、呼吸窘迫等，導(dǎo)致新生兒存活率下降。因此，防治宮內(nèi)感染新生兒發(fā)生肺損傷是新生兒科的重點(diǎn)和難點(diǎn)，尋求便捷、敏感的指標(biāo)預(yù)測(cè)新生兒肺損傷也是目前亟待解決的問(wèn)題。新生兒肺損傷的主要病理機(jī)制是肺泡表面活性物質(zhì)缺乏，造成肺泡萎縮，使新生兒無(wú)法正常呼吸，肺表面活性蛋白A(surfactant protein-A, SP-A)是診斷肺泡細(xì)胞功能不全的標(biāo)志物，能夠參與肺泡表面活性膜的形成和代謝[3]。Clara細(xì)胞蛋白16(Clara cell protein 16, CC16)是細(xì)支氣管上皮Clara細(xì)胞分泌的特異性蛋白，是能夠反映支氣管上皮屏障損傷的炎性因子[4]。本研究觀察宮內(nèi)感染產(chǎn)婦血清及羊水CC16、SP-A水平，并分析二者與新生兒肺損傷的關(guān)系，具體內(nèi)容報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月—2020年9月我院收治的136例宮內(nèi)感染產(chǎn)婦及肺損傷新生兒作為研究組。①納入標(biāo)準(zhǔn)：所有產(chǎn)婦符合宮內(nèi)感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，羊水病原體檢測(cè)陽(yáng)性，或病理證實(shí)絨毛膜羊膜炎；均符合新生兒肺損傷的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，患兒呼吸困難，胸部X線提示雙肺彌漫浸潤(rùn)影，氧合指數(shù)(PaO2/FiO2)<300 mmHg；產(chǎn)婦年齡20～45歲；單胎妊娠。②排除標(biāo)準(zhǔn)：產(chǎn)婦合并妊娠期高血壓、糖尿病、腎病、心臟病等；新生兒先天性疾病、染色體異常、畸形、死胎等；新生兒中樞神經(jīng)功能障礙，包括腦損傷、腦性癱瘓、腦發(fā)育不全等。另選取同期70例宮內(nèi)感染產(chǎn)婦及未發(fā)生肺損傷的健康新生兒作為對(duì)照組。兩組產(chǎn)婦及新生兒的一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，產(chǎn)婦及家屬均知情同意。

表1 兩組產(chǎn)婦及新生兒的一般資料比較

1.2方法

1.2.1CC16與SP-A檢測(cè)：產(chǎn)婦在妊娠末期抽取外周血5 ml，3000 r/min離心取血清待檢；同時(shí)行羊膜穿刺術(shù)，穿刺針經(jīng)腹壁、子宮壁進(jìn)入羊膜腔，抽取羊水20 ml進(jìn)行檢測(cè)。血清及羊水CC16、SP-A均采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)雙抗體夾心法檢測(cè)。試劑盒購(gòu)自美國(guó)BioTek公司，檢測(cè)儀器為BioTek 800TS酶標(biāo)儀。檢測(cè)步驟：①按試劑盒說(shuō)明書將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同的濃度200、100、50、25、12.5和6.25 ng/L；②設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔6孔，分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μl；③空白孔不加樣本和酶標(biāo)試劑；④樣本孔中加入待測(cè)樣本10 μl和稀釋液40 μl(樣本稀釋5倍)；⑤37℃溫育45 min，然后甩去孔內(nèi)液體，每孔加入磷酸鹽緩沖液振蕩30 s，重復(fù)洗滌5次；⑥每孔加入50 μl酶標(biāo)試劑，37℃溫育45 min，每孔加入磷酸鹽緩沖液振蕩30 s，重復(fù)洗滌5次；⑦每孔加入顯色劑A液和B液各50 μl，輕輕振蕩混勻，37℃避光顯色15 min；⑧每孔加入終止液50 μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立刻轉(zhuǎn)為黃色；⑨對(duì)空白孔調(diào)零，在酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度OD值。以O(shè)D值為縱坐標(biāo)(Y)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品的OD值代入回歸方程可得出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)(5倍)，即為樣本的實(shí)際濃度。

1.2.2血?dú)夥治觯撼槿⌒律鷥旱膭?dòng)脈血進(jìn)行床旁血?dú)夥治觯瑱z測(cè)動(dòng)脈血氧分壓(PaO2)、二氧化碳分壓(PaCO2)、血氧飽和度(SaO2)和PaO2/FiO2。

2 結(jié)果

2.1產(chǎn)婦血清及羊水CC16、SP-A水平比較 研究組產(chǎn)婦的血清及羊水CC16、SP-A水平均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

表2 兩組產(chǎn)婦血清及羊水CC16、SP-A水平比較

2.2新生兒血?dú)夥治鲋笜?biāo)比較 研究組新生兒的動(dòng)脈血PaO2、SaO2、PaO2/FiO2均低于對(duì)照組，且PaCO2高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表3。

表3 兩組新生兒血?dú)夥治鲋笜?biāo)比較

2.3血清及羊水CC16、SP-A水平與新生兒PaO2/FiO2的相關(guān)性 宮內(nèi)感染產(chǎn)婦血清及羊水CC16、SP-A水平與新生兒PaO2/FiO2均呈正相關(guān)(P<0.01)。見表4。

2.4ROC曲線分析 宮內(nèi)感染產(chǎn)婦血清CC16預(yù)測(cè)新生兒肺損傷靈敏度、特異度、AUC分別為75.71%、64.71%、0.748，血清SP-A分別為80.00%、75.74%、0.854，羊水CC16分別為75.71%、71.32%、0.786，羊水SP-A分別為85.71%、78.68%、0.888。見表5，圖1。

3 討論

有研究文獻(xiàn)報(bào)道，宮內(nèi)感染是導(dǎo)致新生兒肺損傷的重要危險(xiǎn)因素，80%以上的肺損傷新生兒存在宮內(nèi)感染病史[7]。其致病原因可能為：①產(chǎn)婦感染B族溶血性鏈球菌，通過(guò)胎盤、羊水傳播給胎兒，引起新生兒B族溶血性鏈球菌感染性肺炎[8-10]；②胎兒分娩時(shí)圍產(chǎn)期感染，繼發(fā)肺損傷[11]。目前相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，肺泡表面活性物質(zhì)缺乏是新生兒肺損傷的主要病理機(jī)制，肺泡表面活性物質(zhì)是Ⅱ型肺泡細(xì)胞分泌的一種脂蛋白，作用是降低肺泡表面張力，減小肺泡回縮力，維持肺泡容積的穩(wěn)定，預(yù)防肺泡萎縮和肺不張[12-13]。另外，肺泡上皮損傷、毛細(xì)血管內(nèi)皮損傷、肺泡炎癥反應(yīng)失控也是重要的病理機(jī)制[14-16]。

SP-A是一種肺泡表面活性物質(zhì)，具有親水性，SP-A減少可引起肺泡發(fā)育不全[17]。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，急性肺損傷新生兒血清SP-A水平顯著低于健康新生兒[18-19]。在呼吸過(guò)程中SP-A的密度隨肺泡半徑增大而減小，小肺泡的SP-A密度較大，其降低表面張力的作用越強(qiáng)；因此SP-A能維持大小不同肺泡的回縮平衡，若SP-A分泌較少，則增加了肺泡表面張力，使肺順應(yīng)性減小，肺泡擴(kuò)張所需的呼吸做功增加[20]。另外，SP-A減少使得肺泡表面張力增加，肺毛細(xì)血管組織液容易跨膜向肺泡組織移動(dòng)，造成肺泡組織液增多，引起肺水腫[21]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，研究組產(chǎn)婦的血清及羊水SP-A水平均低于對(duì)照組，且與新生兒PaO2/FiO2呈正相關(guān)，這表示血清及羊水SP-A水平越低，患兒缺氧越嚴(yán)重；宮內(nèi)感染產(chǎn)婦血清SP-A預(yù)測(cè)新生兒肺損傷的靈敏度為80.00%、特異度為75.74%、AUC為0.854，羊水SP-A分別為85.71%、78.68%、0.888，說(shuō)明SP-A對(duì)新生兒肺損傷的預(yù)測(cè)價(jià)值較高。

CC16是細(xì)支氣管上皮Clara細(xì)胞分泌的特異性蛋白，Clara細(xì)胞是呼吸道支氣管中的一種無(wú)纖毛上皮分泌細(xì)胞。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CC16可以抑制磷脂酶A2活性，從而抑制支氣管上皮的炎癥反應(yīng)，抑制炎性介質(zhì)分泌，具有較好的抗炎作用[22-23]。還有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，急性肺炎患者血清CC16水平顯著上升，表明CC16與肺損傷密切相關(guān)[24-25]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，研究組產(chǎn)婦的血清及羊水CC16水平均高于對(duì)照組，并且與新生兒PaO2/FiO2呈正相關(guān)。也有相似研究報(bào)道，CC16與宮內(nèi)感染新生兒呼吸窘迫有密切關(guān)聯(lián)，經(jīng)過(guò)治療后CC16水平及PaO2/FiO2均下降[26-27]。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，宮內(nèi)感染產(chǎn)婦血清CC16預(yù)測(cè)新生兒肺損傷的靈敏度為75.71%、特異度為64.71%、AUC為0.748，羊水CC16分別為75.71%、71.32%、0.786，說(shuō)明CC16對(duì)新生兒肺損傷有一定的預(yù)測(cè)作用。不過(guò)血清與羊水CC16的預(yù)測(cè)價(jià)值均低于SP-A，推測(cè)可能為SP-A是直接反映肺泡功能的標(biāo)志物，而CC16主要與氣道炎癥密切相關(guān)，與肺泡功能的關(guān)聯(lián)性較弱。

綜上所述，宮內(nèi)感染產(chǎn)婦血清及羊水CC16、SP-A與新生兒肺損傷密切相關(guān)，或可作為預(yù)測(cè)宮內(nèi)感染新生兒是否發(fā)生肺損傷的輔助指標(biāo)。